Влияние микроконцентрацийгербицида «Раундап» на развитие проростков озимого тритикале в лабораторномэксперименте
Введение
Использованиепестицидов – практически обязательный элемент технологии возделывания основныхсельскохозяйственных культур. Однако высокое насыщение их химическимисредствами, характеризующимися различной персистентностью, метаболизмом впочвах и вегетирующих растениях, заметно сказывается на физиолого-биохимическихпроцессах роста и развития возделываемых культур, качестве урожая, состоянииназемных и подземных вод, плодородии почвы. В тоже время оценка и выбороптимального сочетания химических препаратов при их комплексном применениичасто ограничены основным критерием – получаемой прибавкой урожая. Учитываямногообразие прямого воздействия и последействия различных средств химизации иих сочетание на отмеченные процессы, следует подчеркнуть, что комплексноеприменение химических, агрохимических, биохимических, биологических, токсикологическихметодов исследований в настоящее время становится насущной необходимостью.
Актуальностьработы. В последние годы вопросу защиты окружающей среды от различныхзагрязнений уделяется серьезное внимание и на исследования в этой областизатрачиваются большие средства, что вполне понятно, так как состояниеокружающей среды определяет будущее человечества, в том числе здоровье ипродолжительность жизни и активной деятельности человека. В связи с этимсовременные пестициды, прежде чем они будут допущены до практическогоиспользования, проходят очень тщательное изучение их поведения в окружающейсреде и разрабатываются рекомендации по их безопасному использованию.
Систематическоеприменение ядохимикатов приводит к их аккумуляции в почве и, как следствие, кпоступлению данных ксенобиотиков в продукцию растениеводства. В этих условияхнеобходим систематический контроль за содержанием остаточных количествпестицидов в почве, а так же за их влиянием на развитие сельскохозяйственныхрастений.
Цель работы.Изучение влияния микроконцентраций гербицида «Раундап» на развитие проростковозимого тритикале в лабораторном эксперименте и на содержание в них хлорофилла.
Практическаязначимость. Полученные в результате исследований данные могут быть использованыдля оценки экологического риска от использования гербицида «Раундап».
Новизнаполученных результатов. Был выявлен как стимулирующий, так и ингибирующийэффект различных концентраций изучаемого гербицида. Установлено, что дляпроростков озимого тритикале оптимальным параметром оценки воздействия данногогербицида является относительный прирост длины и вегетативной массы проростков.
пестицидрастение раундап тритикале
1. Обзорлитературы
1.1Пестициды в интегрированной системе защиты растений
Возрастающиемасштабы производства и потребления пестицидов, ставили вопросы о возможностизагрязнения ими окружающей среды и о возникновении отдельных последствий,опасных для человека и полезных организмов. Такое положение привело к повышениютребований к препаратам, рекомендуемым для широкого применения, а также кизучению условий их практического использования. Детальное изучение условийпрактического использования пестицидов привело к созданию, так называемой,«интегрированной» системы защиты растений [1–4], в которой учитываютсяэкологические особенности вредных и полезных организмов. Химические препаратыприменяются с таким расчётом, чтобы сохранить полезные организмы, эффективносочетать использование химических препаратов с биологической защитой растений,при этом учитывается экономическая эффективность того или иного метода защитырастений в конкретных условиях [5].
Интегрированнаязащита растений включает в себя агротехнические, биологические, биотехническиеи химические методы. Интегрированная система защиты растений обычноразрабатывается не только для каждой культуры и для каждого региона, но и длякаждого района применения препарата, так как в зависимости от микроклиматамогут сильно изменяться и экологические условия. Большое значение для успешногоприменения химических средств защиты растений в интегрированной системе имеетхорошая организация краткосрочного прогнозирования и сигнализации.
Агротехническийметод борьбы основан на использовании организационно-хозяйственных иагротехнических мероприятий и направлен, с одной стороны, на усиление развитиярастений, что способствует повышению устойчивости их к повреждениям, с другойстороны, на снижение численности вредителей, болезней, сорняков путем созданиянеблагоприятных условий для их развития [6,7].
Изагротехнических приемов борьбы с вредными организмами наиболее эффективныобработка почвы, подготовка посевного и посадочного материала, удобрения иподкормка, сроки сева, система ухода за растениями, сроки и способы уборки.
Организационно-хозяйственныемероприятия включают в себя освоение целинных и залежных земель, орошение иобводнение полей, севообороты и размещение в них сельскохозяйственных культур,внедрение устойчивых сортов.
Биологическийметод борьбы основан на использовании живых организмов или продуктов их жизнедеятельностидля предотвращения или уменьшения вреда, причиняемого вредными организмами.Основным направлением данного метода является использование для защиты растенийих естественных врагов – хищников, паразитов, гербифагов [8].
К числунаиболее прогрессивных методов борьбы с вредными насекомыми относитсягенетический метод, основанный на изменении функций размножения мутантов, такназываемых «генетических уродов». Суть его – в пополнении природной популяцииособями того же вида, полученными в искусственных условиях, но с измененнымигенетическими свойствами. Скрещивание указанных особей с нормальными насекомымиприводит к резкому сокращению потомства [9–11].
Возделываниеустойчивых сортов в значительной степени снижает затраты на защиту их отвредителей и болезней. Устойчивость растений – это способность егопротивостоять вредному организму.
Устойчивые квредным организмам сорта отличаются между собой анатомо-морфологическимстроением, биологическими особенностями, способностью к защитной реакции, котораявозникает в результате внедрения фитопатогена и направлена на его ограничениеили подавление.
В борьбе сболезнями, вредителями и сорняками химические средства защиты растений –пестициды – играют особую роль. Пестициды – это химические вещества, используемыедля борьбы с вредными организмами, повреждающими растения и вызывающими порчусельскохозяйственной продукции. Они не могут заменить агротехнических ибиологических мер борьбы, но в комплексе с ними достигают высокого эффекта.Применение пестицидов обеспечивает условия для механизации процессов ухода зарастениями, облегчает проведение уборки урожая, позволяет избавиться от такихтрудоемких операций, как ручная прополка [12].
Пестицидыприменяются путем опрыскивания, опыливания, протравливания семенного ипосадочного материала, фумигации, аэрозолей, химической иммунизации,отравленных приманок.
Опрыскивание– это способ нанесения раствора пестицида (эмульсии или суспензии) вкапельно-жидком состоянии на обрабатываемую поверхность для защиты растений отвредителей и возбудителей болезней, сорняков. Оно производится опрыскивателями– ручными, тракторными, авиационными.
Преимуществамиопрыскивания перед другими способами являются равномерное распределение ихорошая удерживаемость на обрабатываемой поверхности, более высокаяэффективность по сравнению с опыливанием, меньшая зависимость отметеорологических условий, возможность применения комбинированных пестицидов.Недостатки опрыскивания: сложность приготовления рабочих составов, большойрасход жидкости.
Опыливание –это нанесение пестицида в пылевидном состоянии на обрабатываемую поверхность спомощью опыливателей. Опыливание проводится порошковидными препаратами(дустами). При опыливании на 1 га расходуется 10–30 кг дуста. Достоинствомопыливания является то, что не нужно перед работой готовить специальныхсоставов. Густые посевы и посадки хорошо пропыливаются. К недостаткам можноотнести: запыливание воздуха рабочей зоны; большой расход препарата посравнению с опрыскиванием; снос препарата ветром на другие участки; слабуюудерживаемость дуста на обрабатываемой поверхности [13,14].
Протравливание– способ нанесения пестицида на семенной материал для уничтожения наружной иливнутренней инфекции растительного или животного происхождения. Различаютполусухое с увлажнением и мокрое протравливание.
Полусухоепротравливание – способ обработки семенного материала водной суспензией илираствором пестицида из расчета 20–30 л на 1 т с последующим томлением.Протравливание с увлажнением также считается полусухим способом протравливанияводной суспензией (8–10 л на 1 т без последующей сушки). Для повышениякачества протравливания добавляют прилипатели: сульфитно-спиртовую барду (0,7–1кг/т), силикатный клей (150–200 г./т).
Мокроепротравливание проводят путем погружения семенного материала в растворпестицида с последующим томлением во влажном состоянии в течение 3–4 ч вкучах под прикрытием брезента, а затем высушивают до нормальной влажности.
Выбор способапротравливания зависит от состава протравителей, биологии возбудителейзаболеваний, степени зараженности семян, от обрабатываемой культуры и другихусловий.
Фумигацияосуществляется путем введения пестицида в парообразном или газообразномсостоянии в среду обитания вредного организма. Этот способ широко применяется взащитном грунте, для фумигации помещений (складов, элеваторов, зернохранилищ).Достоинство его в том, что пестицид хорошо проникает в пористые материалы,мельчайшие щели, где могут обитать вредные организмы. К недостаткам можноотнести: высокую токсичность для теплокровных животных и человека; способностьвоспламеняться или взрываться при определенной концентрации паров воздуха.
Введениепестицидов в высокодиспергированном твердом (аэрозоль) или жидком (дым, туман)состоянии в среду обитания вредного организма находит широкое применение вборьбе с вредителями садов, для дезинфекции теплиц, парников, складов и другихобъектов. Достоинство метода заключается в высокой его эффективности. Кнедостаткам аэрозолей относятся: слабое оседание мельчайших аэрозольных частиц;недостаточное проникновение частиц в пористые материалы и щели; сильное влияниеметеорологических условий [15].
Химическаяиммунизация предполагает использование пестицида, создающего неблагоприятныеусловия для развития в растениях паразитов и положительно влияющего на урожай,как в год применения пестицида, так и в репродукции.
Отравленнаяприманка – способ применения пестицида вместе с приманочным кормом илиматериалом для приманочного укрытия. Обычно используют зерно, жмыхи, отруби,мякину и другие приманки, которые хорошо поедаются грызунами.
Для каждойотдельной сельскохозяйственной культуры химические обработки проводят с учетомфенологии вредного объекта и совпадения сроков его самой агрессивной фазы сосроками наиболее чувствительной к повреждениям фазы развития растений, а такжес учетом предупреждений, передаваемых службами прогнозов [16].
Винтегрированной защите растений в XXI столетии наиболее перспективными остаютсяразработки, связанные с поиском и использованием гербицидов с новым механизмомдействия: влияющие на биосинтез хлорофилла, каратиноидов, витаминов, кофакторовферментов. Требованиями к ним являются слабая подвижность в окружающей среде,разрушаемость до нетоксичных остатков, безопасность для нецелевых объектов,организмов. Важным пунктом является экономический порог вредности, т.е. такойуровень заселенности вредителями, при котором стоимость убытков при недобореурожая в отсутствии обработки выше, чем стоимость обработки. Этот подход врезультате приводит к сокращению числа обработок по сравнению с прежнейпрактикой «слепого», так называемого «календарного» опрыскивания [17–20].
Концепцияужесточения экологических требований безопасности к регистрируемым пестицидам,комплексной оценки коммулятивного действия и десятикратного факторабезопасности зарегистрированных препаратов более точных методов оценки побочныхэффектов. Это тем более важно, что могут использоваться пестициды, утратившиесрок патента, но по биологическим, экономическим параметрам отвечающие новымтребованиям. Неблагоприятная ситуация складывается с разработкой ассортиментасредств защиты растений для культур с небольшими площадями, так как фирмы незаинтересованы нести большие затраты на создание и регистрацию пестицидов,которые заведомо не будут окупаться при небольшом спросе и объемах продажпрепаратов. Количество экспериментальных данных по вопросам эффективности ивозможностях проявления нежелательных побочных эффектов недостаточно длярегистрируемых пестицидов таких культур [21–23].
1.2Влияние гербицидов на растения
В основемеханизма действия гербицидов лежит их многостороннее влияние на рост иразвитие целого растения, отдельных его органов, тканей и клеток, на клеточныеструктуры, органеллы клетки, физиологические и биохимические процессы,ферментативные реакции и белково-ферментные структуры.
Лишькомплексная оценка этих влияний позволяет выявить общий механизм действиягербицидов на растение. Первичное место действия гербицидов определяется еговзаимодействием с чувствительными системами растения на молекулярном уровне.
Так как донастоящего времени еще не раскрыта молекулярная природа многих процессовжизнедеятельности, происходящих в растениях, то возникают трудности и сопределением первичного механизма действия гербицидов.
Механизмдействия гербицидов тесно связан с характером и поведением вещества-токсикантав растении, с поглощением и перемещением его по растению и с непосредственнымвлиянием на жизненно важные процессы: основной, промежуточный и вторичныйметаболизмы.
Действиегербицидов на основной метаболизм проявляется в нарушении процессов образованияорганических соединений в ходе фотосинтеза, процессов генерированиявысокоэнергетических химических связей при дыхании и окислительномфосфорилировании, в ингибировании синтеза основных клеточных полимеров –белков, нуклеиновых кислот, крахмала и клетчатки. В результате действиягербицидов на промежуточный метаболизм нарушаются процессы распада иобразования низкомолекулярных органических соединений, необходимых для новогосинтеза; действие на вторичный метаболизм выражается в нарушении синтезаразличных специфических компонентов растительных клеток типа алкалоидов,пектина, кумаринов, антоциана, фитогормонов, танинов [24].
Гербицидымогут влиять на рост растений. Однако практический интерес представляютсоединения, действующие на процессы основного и вторичного метаболизмов. Такиегербициды нетоксичны для теплокровных животных и человека. Более опасны и менееизбирательны гербициды, нарушающие промежуточный метаболизм в растительныхтканях, который в значительной степени сходен для всех живых клеток, содержащихядра.
Механизмдействия контактных гербицидов сводится к нарушению целостности клеточныхмембран, увеличению их проницаемости и разрушению, ведущему к потересодержимого клеток и их отмиранию. В силу такого действия гербициды слабо илипрактически не перемещаются по флоэме. Однако они могут перемещаться странспирационным током по клеткам ксилемы.
Системныегербициды действуют на один или несколько физиологических и (или)метаболических процессов в растении. Они вызывают гибель растения черезнесколько дней или недель после поглощения гербицида, то есть проявляютхроническое токсическое действие, в отличие от быстродействующих контактныхгербицидов. Многие гербициды проявляют одновременно и контактное, и системноедействия.
По характеруперемещения по растению гербициды делятся на перемещающиеся преимущественно странспирационным током по ксилеме или с продуктами фотосинтеза по флоэме.Системные гербициды свободно перемещаются от клетки к клетке через плазмодесмы,проникая через мембраны и аккумулируясь в местах действия в токсичныхколичествах, не повреждая при своем движении живых, жизненно важных систем[25].
Устойчивостьрастений к гербицидам определяется совокупностью морфологических, физиологическихи биохимических факторов, от которых зависит соотношение количеств попавшего нарастение, поглощенного и разрушенного токсиканта. Если скорость детоксикациигербицида равна скорости его поступления в места действия, растение проявляетустойчивость.
Поступившие врастения и достигшие мест действия гербициды могут оказывать разностороннеевлияние на важные процессы жизнедеятельности: деление клеток, развитие тканей,образование хлорофилла или пластид, фотосинтез и дыхание.
Гербициды,нарушающие процесс деления клеток (например, производные карбаматов идитиокарбаматов), рассматриваются как митотические яды. Они прерываютнормальный процесс деления клеток (митоз) в период между метафазой и анафазой,препятствуют образованию перегородок в делящихся клетках, формирующихся послетелафазы, что приводит к возникновению ненормальных многоядерных клеток [26].
Проводилисравнительные цитогенетические исследования количественных и качественныхзакономерностей действия гербицидов трефлан (2,6 – динитро-4 – (трифторметил) –N, N-дипропиланилин) и зенкор (4-амино-6-трет-бутил-3-метилтио – 1,2,4 –триазинон-5).
Выявленацитогенетическая активность трефлана (рисунок 1): частота перестроек в опыте,где концентрация гербицида составляла 1 мг/л, была выше, чем в контроле болеечем в 68 раз (32,37 и 0,47% соответственно).
/>
Рисунок 1 – Влияниегербицидного препарата трефлан на частоту хромосомных аберраций и величинумитотического индекса у Hordeum vulgare L. сорт «Визит»
Большинствоизменений представляли собой различные типы нарушений ахроматинового веретена:наблюдалось полное его разрушение, разрыв части его нитей и многополюсность,вызывающие образование полиплоидных и полиядерных клеток, в том числе клеток смикроядрами, иными словами, клеток с нерегулярным числом хромосом.
В результатеизучения действия зенкора на меристематические клетки ячменя установлено, чтопрепарат негативно влияет на процесс образования клеточной перегородки примитозе. Наблюдали двуядерные интерфазные клетки, иногда в центре таких клетокимелась незавершенная межклеточная перегородка. В анафазе регистрировалинарушения расхождения хромосом: отставания хромосом, неравномерное расхождениехромосом к полюсам, многополюсность (рисунок 2). Зенкор также негативно влиялна пролиферативную активность клеток. Показатель митотического индекса дляконцентраций 250, 500, и 750 мг/л был достоверно ниже, чем в контроле.
/>
Рисунок 2 – Влияниегербицидного препарата зенкор на частоту хромосомных аберраций и величинумитотического индекса у Hordeum vulgare L. Сорт «Гонар»
Гербицидытипа регуляторов роста – арилоксиалканкарбоновые кислоты и их производные –нарушают рост и развитие клеток ксилемы и флоэмы, вызывая их деформацию.
Наиболеебезопасными для человека и животных являются препараты, влияющие на структуры ипроцессы, свойственные растительным организмам и отсутствующие у теплокровных.Это прежде всего гербициды, воздействующие на процесс преобразования солнечнойэнергии в химическую – фотосинтез. Группа ингибиторов фотосинтеза многочисленнаи включает половину препаратов, известных в настоящее время. Среди нихсоединения нарушающие биосинтез хлорофилла и других фотосинтетическихпигментов. Фомезафен, например, ингибирует синтез каратиноидов на этапефитоина.
К этой же группеотносятся вещества, подавляющие сам процесс фотосинтеза на различных егоэтапах. При воздействии гербицида на фотосинтез на световой стадии I нарушаетсяпроцесс восстановления метаболита Х, обладающего минимальным потенциалом, иокисления метаболита Р700, обладающего промежуточным потенциалом; действие насветовой стадии II сказывается на процессе восстановления метаболита Y иодновременно протекающем процессе фотолиза воды и выделения кислорода.
Производные4,4 – дипиридила, попав в растение, становятся посредниками при переносеэлектрона на световой стадии I, нарушают ее ход и «обесценивают» солнечнуюэнергию, поглощаемую растением. Электронно-транспортная система при этом неблокируется, как в случае других гербицидов, подавляющих фотосинтез.
Большинствогербицидов – ингибиторов фотосинтеза – действуют на световую реакцию II,прерывая поток электронов к хлорофиллу и подавляя процесс фотолиза воды(реакция Хилла). Так проявляют себя нитрофенолы, производные карбаминовойкислоты, анилиды, гидроксибензонитрилы, производные мочевины, производные 1,2,5 –триазина, 1,2,4 – триазина, производные пиримидина, бензимидазолы,пиридазиноны, производные фурана (этофумезат) и производные тиадиазолов(бентазон) [28].
Перспективнымиявляются гербициды, влияющие на синтез органических азотсодержащих веществ, вчастности аминокислот в тканях растений. Сульфонилмочевины нарушают биосинтезвалина и изолейцина, воздействуя на фермент ацетолактатсинтазу, катализирующуюпервый этап этого процесса. Аналогично действуют гербициды новой группыимидазолинонов (арсенал, АС 243997). Биосинтез ароматических аминокислотингибирует раундап, гистидина – амитрол, глютамина – баста (фосфинотрицин).
Отсутствуютгербициды со специфичным действием на процесс дыхания растений. Некоторые препаратымогут подавлять перенос электронов, блокируя отдельные этапы фосфорилирования,другие – разобщать фосфорилирование путем разрыва (гидролиза)высокоэнергетических молекул веществ, участвующих в переносе энергии, чтоприводит к непроизводительному расходованию энергии, освобождающейся придыхании.
Рядгербицидов изменяет активность клеточных ферментов, действуя на них прямо иликосвенно. В первом случае молекулы гербицида взаимодействуют с веществамиклеточных ядер, конкурируют с субстратом за активные места на молекулахферментов, образуют комплексные соединения с ферментами или с их субстратами,что в одних условиях подавляет, а в других – стимулирует активность ферментов.Гербицид может конкурировать с кофакторами ферментативных белков: изменять состояниебелкового кофактора и предотвращать активную связь кофактора с протеиновойчастью фермента.
Косвенноедействие гербицида на ферменты проявляется в торможении поступления в клеткиэнергии, необходимой для реакций образования АТФ, а также исходных материаловдля синтеза коферментов и простетических групп, в изменении условий протеканияферментативных реакций [26].
1.3Краткая характеристика и механизм действия глифосата (раундапа)
Глифосатявляется пестицидом широкого спектра действия, активно применяемым дляуничтожения нежелательных растений, как в сельском хозяйстве, так и внесельскохозяйственных ландшафтах. Большинство продуктов, содержащих глифосат,либо изготовляется, либо используется вместе с поверхностно-активным веществом,помогающим глифосату проникнуть в клетки растений. Поверхностно-активноевещество, используемое в распространенном продукте на базе глифосата (известномпод названием «Раундап»), более токсично, чем сам глифосат, а комбинация этихдвух веществ еще более токсична [29].
Гербициды набазе глифосата, предлагаемые производителями как «мало токсичные идружественные к окружающей среде», могут казаться панацеей при борьбе снежелательными растениями. Между тем, продукты, содержащие глифосат, обладаютострой токсичностью для животных, включая человека. Симптомы: раздражение глази кожи, головная боль, тошнота, оцепенение, повышенное кровяное давление иучащенное сердцебиение. Наблюдения за людьми (в основном фермерами), имеющимиконтакт с глифосатом, показали, что такой контакт ассоциируется с увеличениемриска выкидышей, преждевременными родами и раковой лимфомой.
Препаратвпервые был зарегистрирован в США в 1974 году и применяется для борьбы ссорняками в широком спектре сельскохозяйственных, городских, садово-парковых,водных и лесных ситуаций. Большинство гербицидов содержит изопропиламиновуюсоль глифосата [30].
Глифосатзанимает место среди наиболее распространенных пестицидов в сельском хозяйстве.Наибольшее использование его отмечено при производстве соевых бобов, кукурузы,сена, на пастбищах и на землях под паром. Применение глифосата в настоящеевремя увеличивается, в основном вследствие недавней разработки с помощью геннойинженерии и интродукции растений, толерантных к гербициду.
Глифосат, N –(фосфонометил) – глицин (рисунок 3) является неизбирательным гербицидом,действующим на весь организм, который используется для уничтоженияшироколиственных, травянистых и осоковых видов растений [31].
/>
Рисунок 3 –Структурная формула глифосата
Глифосатхорошо поглощается надземными органами растений и передвигается в глубокозалегающие корни. К нему чувствительны однолетние и многолетние однодольные идвудольные растения, в том числе такие корневищные и корнеотпрысковые, какпырей, свинорой, гумай, острец, осот желтый, бодяк полевой, марь белая идругие. Передвигается глифосат с места нанесения медленно (7–10 дней), но набольшие расстояния (на глубину до 2 м) и вызывает гибель корневищ врадиусе 30 см. Многолетние сорняки подавляются в течение всеговегетационного периода, однолетние – до повторного отрастания новых. Визуальнонаблюдаемый эффект проявляется на однолетних растениях через 2–4 дня, намноголетних – через 7–10 дней, а полная гибель сорняков наступает через 20 днейи более после применения препарата. Прохладная и облачная погода замедляетпроявление фитотоксичности гербицида, а осадки, выпавшие менее чем через 2 часапосле опрыскивания, могут снизить эффективность обработки.
Сорныерастения сначала приобретают светло-зеленую окраску, затем желтеют,обесцвечиваются, теряют тургор, засыхают и через 14–20 дней погибают [16].
Механизмдействия глифосата по данным EPA в настоящее время досконально не изучен. Ноблагодаря исследованиям установлено, что глифосат ингибирует ферментный путь сучастием шихимовой кислоты, не позволяя растениям синтезировать триароматических аминокислоты (триптофан, тирозин, фенилаланин). Ароматическиеаминокислоты выполняют важную роль в клеточном метаболизме. Они входят в составбелков и служат исходными соединениями для метаболизма фенилпропаноидов –«массовой продукции», образующейся в процессе роста растения. В их составвходят пигменты и полимер клеточных стенок – лигнин. Ключевой фермент,ингибируемый глифосатом, называется EPSP синтаза (5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтаза).
Глифосатможет оказывать воздействие на ферменты растения не связанные с участиемшихимовой кислоты. У сахарного тростника он снижает активность фермента,участвующего в метаболизме сахара. Он также ингибирует главныйдетоксифицирующий фермент растений [31].
Фактическикаждый пестицид, кроме так называемого «активного» вещества, предназначенногодля уничтожения растений, содержит также другие ингредиенты. Эти ингредиентынеточно называют «инертными». «Инертные» составляющие предназначены дляоблегчения использования продукта и увеличения его эффективности. Как правило,эти составляющие не указываются на этикетках пестицидных продуктов.
Глифосатявляется представителем органофосфонатов с активированной прямой С-Р связью исоставляет основу многих гербицидов. Их отличает высокая токсичность иустойчивость к разложению. C-P связь органофосфонатов трудно гидролизуемахимическим путем, но может быть разорвана с помощью особых ферментных системмикроорганизмов-деструкторов. Высвобождающийся фосфор используетсямикроорганизмами в качестве единственного источника этого компонента впроцессах биосинтеза и энергетического обмена [32].
Стойкостьглифосата в почве изменяется в широких пределах, и нет однозначного ответа навопрос, сколько времени глифосат остается в почве. Периоды полураспада (время,необходимое для распада или уноса половины исходного количества глифосата),определенные производителем глифосата, составили от 3 до 141 дня [33].
Считается,что глифосат образует прочные комплексы с большинством почв, и поэтому онисключительно иммобилен. Это означает, что маловероятно заражение глифосатомводы и почвы вне участка его применения. Однако эта связь с почвой являетсяобратимой. Например, некоторые исследования показали, что глифосат легкосвязывается с разными видами почв. Однако десорбция, когда глифосатотсоединяется от частиц почвы, происходит также легко.
Глифосат былобнаружен как в поверхностных, так и в грунтовых водах. Стойкость глифосата вводе ниже, чем в почве [34].
Глифосатможет нанести ущерб многим организмам, не являющимся мишенью для пестицида.Имеются также и другие серьезные эффекты, такие, как влияние на редкие видырастений, ухудшение качества семян, снижение способности фиксировать азот,увеличение подверженности растений болезням и уменьшение активности микоризныхгрибов [35].
Качествосемян. Cублетальная обработка хлопка «Раундапом» сильно ухудшает всхожестьсемян и развитие рассады в полевых условиях. При наименьших проверенныхконцентрациях глифосата всхожесть семян уменьшилась в пределах от 24 до 85%, авес рассады – от 19 до 83% [36].
Фиксацияазота. Большинство живых существ не способно усваивать азот в чистом виде иполучают его в виде аммиака и нитратов. Аммиак и нитраты образуются в результатепроцессов, которые называются фиксацией азота и нитрификацией. Эти процессыосуществляются бактериями, живущими в почве и в клубеньках на корнях бобовых инекоторых других растений.
Приконцентрациях, соответствующих типичным дозировкам применения, глифосат снижаетна 70% число азотфиксирующих клубеньков у клевера, посаженного через 120 днейпосле обработки; аналогичная концентрация гербицида с глифосатом снижает на 27%число клубеньков у клевера, выращиваемого на гидропонике. Сходная концентрацияглифосата уменьшает на 20% процесс фиксации азота бактериями в почве. Обработкагербицидом с глифосатом при самой низкой проверенной концентрации (в 10 разменьшей, чем при типичной дозировке его применения) уменьшает число клубенькову клевера на 68–95%.
Микоризныегрибы – это полезные грибы, живущие на корнях и вокруг корней растений. Онипомогают растениям усваивать питательные вещества и влагу из почвы и могутзащитить их от холода и засухи. Обнаруживают токсичность «Раундапа» поотношению к микоризным грибам, ассоциированным с хвойными деревьями, приконцентрациях от 1 части на миллион, что ниже концентраций в почве при типичныхдозировках применения. У орхидных обработка глифосатом меняла полезноевзаимодействие между орхидными и их микоризой на паразитическое взаимодействие(не приносящее пользы растениям) [37].
Болезнирастений. Обработка глифосатом увеличивает подверженность культурныхсельскохозяйственных растений ряду болезней. Например, глифосат увеличилзаболевание корней и стеблей помидоров; снизил способность бобовых растенийзащищать себя от антракноза; увеличил распространение неспецифических гнилей впочве пшеничного поля и снизил пропорцию почвенных грибов – антогонистовгнилевых грибов; увеличил содержание в почве двух возбудителей болезней корнейгороха. Кроме того, обработка соснового питомника ослабила защитную способностьсаженцев противостоять голубой гнили [38].
Для получениямаксимального эффекта от применения глифосатсодержащих гербицидов необходимособлюдать следующие правила:
– передпроведением опрыскивания тщательно и быстро убрать всю солому с поля;
– вмомент обработки сорные растения должны активно вегетировать, так как препаратыпопадают в них через листья и другие зеленые органы. Пырей должен иметь 3–4активно ассимилирующих листа (высота 10–20 см), осоты – 4–5 листьев(диаметр розетки 10–20 см). После сильной засухи можно для стимулированияотрастания осотов и однолетних сорняков провести дискование стерни, дождатьсяпоявления свежих розеток и после этого применить гербицид. Для лучшегоотрастания пырея механические обработки, напротив, нежелательны;
– оптимальнаятемпература воздуха для воздействия препаратов составляет от 15 до 25С. Хотяони работают и при температуре 5С, однако их действие замедляется. Глифосатможно применять за 1–2 недели до наступления первых заморозков. Даже послезаморозков гербициды действуют, хоть медленно, но не менее эффективно, если кмоменту опрыскивания побурение вегетативной массы сорняков вследствие холодовсоставляет менее 25%;
– взасушливых условиях, при низком срезе полегших зерновых культур, длястимулирования отрастания многолетников желательно провести дискование стерни,а через 2–3 недели после него – опрыскивание по отросшим сорнякам;
– таккак глифосат передвигается по всей корневой системе сорняков, полная их гибель(пожелтение и засыхание) происходит в течение 14 – 21 дня;
– осадки,выпавшие через 4–6 ч после обработки, снижают гербицидный эффект;
– оптимальныйрасход рабочей жидкости – не более 100–200 л/га;
– нормывнесения раундапа зависят от видового состава сорняков. Против пырея применяют3–4 л/га, видов полыни – 5 л/га, осотов – 5–6 л/га;
– обработкипочвы возможны уже через 5–7 дней после опрыскивания, но лучше – через 15–21день, после полного отмирания сорняков [39].
Особенно важноиспользование данных гербицидов под зерновые, в том числе и озимые. Озимыечасто располагаются по пласту многолетних трав. Использование глифосатов послеотрастания первого укоса трав и сорняков обеспечивает их полную гибель,соответственно, упрощается разделка пласта трав и запашка, снижаются на 25–30%затраты на выполнение этих операций, отсутствует дальнейшая вегетация растенийтрав в посевах озимых или других культур.
При оценкеэкономической эффективности применения гербицидов – производных глифосата важноучитывать, что при вспашке и подготовке поля экономится до 30% топлива,снижаются и другие затраты. Данное мероприятие является наиболее экологическибезопасным способом подавления многолетних сорняков, так как в моментхимпрополки сельскохозяйственные культуры не вегетируют, удобно работатьмеханизатору, используется небольшой объем рабочей жидкости, гарантируетсяотсутствие многолетних сорняков на 2–3 года. В среднем один рубль, вложенный восенний период, например, в звене севооборота «озимая пшеница после многолетнихтрав», окупается через два года после применения 10, а через три года – 16рублями/га прибыли. На зерновых прибавка урожая составляет не менее 5 ц/гaзерна, на льне – не менее 1–3 ц/га семян и 5–10 ц/га соломы, на люпине – 5 ц/газерна [40].
1.4Биологическая индикация
Общиезакономерности поведения загрязнителей пестицидов в почве достаточно хорошоизучены. Вместе с тем, последствия комплексного воздействия поллютантов набиоценозы и фитопопуляцию в реально встречающихся концентрациях исследованынедостаточно. Остатки агрохимикатов в почве и растениях вступают в сложныевзаимодействия различного характера, включая антагонизм, синергизм,аддитивность.
Для полученияобъективной картины загрязнения агроценоза необходимы исследования в двухнаправлениях. Во-первых, должны совершенствоваться методы инструментальногохимического анализа, во-вторых, целесообразно более широкое использованиебиоиндикаторов.
Применениеорганизмов, реагирующих на загрязнение среды обитания изменением визуальныхпризнаков, имеет ряд преимуществ. Оно позволяет существенно сократить или дажеисключить применение дорогостоящих и трудоемких физико-химических методованализа. Биоиндикаторы интегрируют биологически значимые эффекты загрязнения.Они позволяют определять скорость происходящих изменений, пути и местаскопления в экосистемах различных токсикантов, делать выводы о степениопасности для человека и полезной биоты конкретных веществ или их сочетаний [41–45].
В зависимостиот скорости проявления биоиндикаторных реакций выделяют несколько различныхтипов чувствительности тест-организмов:
I тип – биоиндикаторпроявляет внезапную и сильную реакцию, продолжающуюся некоторое время, послечего перестает реагировать на загрязнитель;
II тип – биоиндикаторв течение длительного времени линейно реагирует на воздействие возрастающейконцентрации загрязнителя;
III тип – посленемедленной, сильной реакции у биоиндикатора наблюдается ее затухание, сначаларезкое, затем постепенное;
IV тип – подвлиянием загрязнителя реакция биоиндикатора постепенно становится все болееинтенсивной, однако достигнув максимума постепенно затухает;
V тип – реакцияи типы неоднократно повторяются, возникает осцилляция биоиндикаторныхпараметров [46].
Дляэкотоксикологического картирования агроландшафта можно использоватьбиоиндикаторы, аккумулирующие загрязнители по безбарьерному типу, т.е.прямопропорционально их концентрации во внешней среде. Например, покровныеткани растений (кора) и животных (шерсть) представляются малоактивнымииндикаторами для этого метода. Листья, цветки и другие органы растенийнакапливают поллютанты по фонобарьерному типу. Подобные органы и тканиприемлемы для биотестирования загрязнения почв, вод и атмосферы.
Прибиоиндикации агроценоза необходимо учитывать и тератогенный эффектзагрязнителей, т.е. способность вызывать у тест-организмов различные порокиразвития. Последствия действия тератогенных загрязнителей различны: в однихслучаях тератогенез может охватывать лишь клеточные органеллы, отдельныеклетки, в других – затрагивает ткани, органы и весь организм. Поэтому следуетучитывать подобные изменения с помощью известных тест-систем, а такжеотрабатывать новые методы биоиндикации тератогенного действия загрязнителей[47].
Биоиндикация,как инструмент для проведения экологического контроля за состояниемагроэкосистемы, может входить в систему экологического нормирования,методической основой которого является биотестирование. Поэтому системабиотестирования должна быть достаточно гибкой, т.к. норма реакции для каждогоагроценоза будет индивидуальной.
Специальныебиотесты для определения загрязнения фитопопуляции солями тяжелых металлов,остатками пестицидов, микотоксинами и другими агентами сводятся к оценкестепени изменения морфометрических, физиологических и биохимических показателейбиоты. Подобные нарушения проявляются в изменении энергии прорастания,всхожести семян, размеров корней, в повреждении растений под воздействиемзагрязнителей.
Классическимтест-объектом на загрязнители является одноклеточная зеленая водоросль хлорелла(Chlorella vulgaris). Ее преимущества для экспресс-анализа загрязненияагроценоза заключаются в коротком жизненном цикле и возможности проводитьоценку по таким показателям, как пигментное секторирование, нарушениеспоруляции клеток и летальность.
Другой методоценки химических веществ, основанный на эффекте замедленной флюоресценции.Этот эффект проявляется у растений при наличии сформированногофотосинтетического аппарата. Гербициды (ингибиторы фотосинтеза) способныизменять интенсивность флюоресценции. Этим способом можно выявить наличиегербицидов ингибиторов реакций Хилла, однако в случае других пестицидов методмалоэффективен.
Существуютдостаточно надежные способы количественной регистрации воздействиязагрязнителей, например, плазмолиз. Для определения количества погибших клетокпользуются методом витального окрашивания. Живые клетки сильно ограничиваютпроникновение в протоплазму органических веществ, и, будучи помещенными враствор ряда красителей, практически не окрашиваются. В мертвые клетки краскапроникает свободно, благодаря чему наличие погибших клеток легко поддаетсяучету.
Методиндукции флюоресценции хлорофилла позволил исследовать активностьфотосинтетического аппарата у ряда растений при изменении внешних условийсреды. Эта особенность хлорофилла была предложена в качестве индикаторногопризнака нарушений, вызванных воздействием поллютантов [48].
Лишайникиявляются надежными индикаторами загрязнения воздуха и традиционно используютсядля целей биоиндикации. Лихенодиагностика позволяет осуществлять картированиетерритории по степени загрязненности атмосферного воздуха. Однако возможностилихеноиндикации ограничены чувствительностью нативных видов, поскольку многиелишайники, аккумулируя загрязнитель из атмосферы при его хроническом воздействии,гибнут от низких концентраций, зачастую не достигающих установленнных длячеловека и теплокровных животных нормативов.
Длябиотестирования отработано немало методов на различных культурах: белой горчице(Sinapis alba L.), озимой и яровой пшенице (Triticum aestivum L.), овсе (AvenaL.), гречихе (Fagopyrum L.), огурце (Cucumis L.), кресс-салате (Lepidiumsativum L.), сое (Glycine L.), льне (Linum L.), еже сборной (Dactylis glomerataL.).
На горчицеучитывают степень ингибирования первичного корешка проростка после обработкисемян противодвудольным гербицидом. Определяют также увядание растений,торможение прироста листьев надземной массы проростков.
Овес и рисиспользуют как индикаторы почвенных противозлаковых гербицидов, так как этонаиболее чувствительные виды среди злаковых культур. При этом основным тестомявляется ингибирование роста зародышевого корня и листа.
Редисявляется традиционным биотестом при исследовании остатков пестицидов в почве иконечной продукции растениеводства, т. к. обладает по сравнению с другимиобъектами наиболее высокой чувствительностью к фитотоксичным препаратам, чтообусловлено высокой энергией прорастания его семян и скороспелостью культуры.
На огурце игречихе тестируют гербициды – производные мочевины и фенилкарбаматы. При этом уогурца учитывают рост первичного корня, у гречихи – утолщение стебля,деформацию зародышевых листьев, а также торможение роста. Кресс-салатиспользуется как тест-объект для оценки загрязнения воздуха и почвы. Тестдлится 10 дней. При наличии вредных веществ снижается процент всхожести иингибируется рост зародышевых корешков.
Видимо,успешное решение проблем биоиндикации во многом будет определяться подбором, аиногда и направленным созданием сортов (линий) культурных растений,чувствительных к загрязнению. К сожалению, в настоящее время подобные сорта илинии отсутствуют. Поэтому усилия исследователей должны быть направлены напоиск перспективных форм и работу с ними [44].
2. Объект,программа и методика исследований
Объектомисследований являлись проростки озимого тритикале сорта «Михась».
Выбор данногосорта в качестве объекта исследований был связан с тем, что данный сортявляется стандартом, районированным по всей республике. Из 350–400 тыс. гапосевных площадей отводимых ежегодно под озимое тритикале до 56% занятопосевами этого сорта.
Предметомнаших исследований являлось изучение влияния глифосатсодержащего гербицида«Раундап» на развитие проростков озимого тритикале и на содержание в ниххлорофилла.
Выборпрепарата «Раундап» для изучения его влияния на развитие проростков озимоготритикале, был основан на том, что согласно отраслевому регламенту возделыванияозимого тритикале (ОР МСХП РБ 0215–2005) данный гербицид может применяться наполях, предназначенных под посев тритикале после уборки предшественника повегетирующим многолетним сорнякам. Учитывая, что период полураспада глифосатасоставляет от 3 до 141 дня, нами была выдвинуто предположение о возможностивлияния остаточных количеств данного гербицида на развитие проростков исследуемойкультуры. На основании этого и была составлена программа исследований.
В программуисследований входили следующие вопросы:
– Изучениевлияния исследуемого гербицида на лабораторную всхожесть семян.
– Изучениевлияния раундапа на развитие проростков.
– Изучениевлияния раундапа на содержание в вегетативной массе проростков хлорофилла.
– Изучениевлияния глифосатсодержащего гербицида «Раундап» на развитие проростков озимоготритикале в динамике.
Методикаисследований
Дляпроведения исследований были отобраны относительно одинаковые по размерунеповрежденные семена озимого тритикале. Масса 1000 семян составляла 49,5 грамм. Семена (по 100 шт.) помещались в пластиковые контейнеры-растильни размером 150х150х110 мм.На дне контейнера находился слой стерильной ваты толщиной 0,5 см покрытыйсверху фильтровальной бумагой. В каждый контейнер было внесено по 70 мл воднойвытяжки из почвы. В почвенные вытяжки вносили гербицид «Раундап» в следующихконцентрациях по действующему веществу: 5,0; 12,5; 25,0; 37,5; 50,0; 100,0;150,0; 200,0; 250,0; 300,0; 350,0; 400,0; 450,0; 500,0; 550,0; 600,0; 650,0;700,0; 750,0; 800,0; 850,0; 900,0; 950,0; 1000,0 мкг/л.
Через 7 днейопределяли лабораторную всхожесть семян. После определения всхожести росткиотделяли от корешков и зерновки и проводили их взвешивание на аналитическихвесах ВЛР-200. Далее производили измерение длины ростков, а затем их высушивалидо воздушно-сухого состояния и повторно взвешивали.
Весовойкоэффициент определяли как отношение суммарной сырой массы проростков к ихсуммарной длине (мг/мм).
Экстракциюхлорофилла проводили 96%-м этанолом. Для экстрагирования отбирали по 100 мгсухих проростков, измельчали их с кварцевым песком в присутствии карбонатакальция. Полученную массу количественно переносили в бюксу с 20 мл этиловогоспирта. Через 24 часа проводили вакуумную фильтрацию вытяжки, а затем доводилиее объем до 50 мл. Оптическую плотность спиртовой вытяжки хлорофилла определялина спектрофотометре «Solar PV 1251C» при l = 649 и 665 нм.Количество хлорофилла рассчитывали по формулам:
CХл а = 13,70´D665 – 5,76´D649
CХл в = 25,80´D649 – 7,60´D665 [49].
Статистическаяобработка результатов исследований проводилась при помощи табличного редактора Excelи пакета статистического анализа STATISTICA 6.0 с использованием практическогоруководства Ю.М. Жученко [50].
Вэксперименте по изучению влияния раундапа на проростки озимого тритикале вдинамике, нами использовались следующие концентрации гербицида в почвеннойвытяжке: 0,05; 0,25 и 0,50 мг/л.
3. Результатыисследований и их обсуждение
3.1Влияние микроконцентраций гербицида «Раундап» на всхожесть семян озимоготритикале
На первомэтапе наших исследований (2006–2007 гг.) было установлено, что препаратгербицидной активности «Раундап» оказывает некоторое влияние на энергиюпрорастания и лабораторную всхожесть семян озимого тритикале, но нам не удалосьустановить закономерности в этом влиянии. Были проведены эксперименты, вкоторых увеличили число повторностей и использовали большее разнообразиеконцентраций пестицида.
Результатынаших исследований по влиянию гербицида «Раундап» на всхожесть семян озимоготритикале представлены в таблице 1.
Таблица 1 –Влияние гербицида «Раундап» на всхожесть семян озимого тритикалеКонцентрация гербицида в питательной среде, мкг/л Всхожесть в процентах относительная (контроль 100%) 1 2 3 Контроль (без гербицида) 95 100,0 5,0 92 96,8 12,5 90 94,7 25,0 94 98,9 37,5 90 94,7 50,0 92 96,8 100,0 90 94,7 150,0 88 92,6 200,0 87 91,6 250,0 88 92,6 300,0 88 92,6 350,0 90 94,7 400,0 90 94,7 450,0 93 97,9 500,0 87 91,6 550,0 91 95,8 600,0 94 98,9 650,0 93 97,9 700,0 90 94,7 750,0 92 96,8 800,0 88 92,6 1 2 3 850,0 87 91,6 900,0 89 93,7 950,0 86 90,5 1000,0 93 97,9
Как видно изпредставленных данных, между всхожестью семян озимого тритикале и концентрациейизучаемого препарата зависимости не установлено (коэффициент корреляции r = – 0,21при уровне значимости р = 0,31). Во всех случаях всхожесть семян культуры нижеконтрольной, но не снижается более чем на 10%.
Такимобразом, нами было установлено, что препарат гербицидной активности «Раундап» вмикроконцентрациях оказывает незначительное влияние на начальные этапы развитияпроростков озимого тритикале сорта «Михась», тогда как в литературныхисточниках указывается отсутствие влияния данного гербицида на всхожесть семянкультурных растений.
3.2Влияние гербицида «Раундап» на развитие проростков озимого тритикале
Влияниераундапа на развитие проростков оценивалась по следующим показателям: сыраямасса проростков, воздушно-сухая масса проростков, содержание воды впроростках, средняя длина проростков и весовой коэффициент развития проростков.Результаты наших исследований по влиянию гербицида на накопление вегетативноймассы представлены в табл. 2.
Таблица 2 –Влияние раундапа на накопление проростками озимого тритикале вегетативной массыКонцентра-ция гербицида, мкг/л Средняя сырая масса одного проростка Средняя воздушно-сухая масса одного проростка Содержание воды в проростках мг
относительная
(контроль 100%) мг
относительная
(контроль 100%) % относительная (контроль 100%) 1 2 3 4 5 6 7 Контроль 66,47 100,0 6,64 100,0 90,01 100,00 5,0 59,84 90,0 5,99 90,2 89,99 99,98 12,5 56,39 84,8 5,74 86,5 89,81 99,78 25,0 62,45 93,9 6,44 96,9 89,69 99,65 37,5 60,00 90,3 6,21 93,5 89,65 99,60 50,0 60,98 91,7 6,18 93,1 89,86 99,83 100,0 63,00 94,8 6,11 92,0 90,30 100,32 150,0 63,52 95,6 6,40 96,3 89,93 99,91 200,0 60,92 91,6 5,89 88,6 90,34 100,37 250,0 71,25 107,2 7,03 105,9 90,13 100,13 300,0 60,51 91,0 6,10 91,9 89,92 99,90 350,0 58,56 88,1 5,47 82,3 90,66 100,73 400,0 61,44 92,4 6,19 93,2 89,93 99,91 450,0 60,54 91,1 6,12 92,1 89,89 99,87 500,0 64,37 96,8 6,37 95,9 90,11 100,11 550,0 64,84 97,5 6,55 98,6 89,90 99,88 600,0 56,76 85,4 5,73 86,3 89,90 99,88 650,0 59,78 89,9 5,87 88,4 90,18 100,19 700,0 62,67 94,3 6,56 98,7 89,54 99,48 750,0 64,18 96,6 6,33 95,2 90,14 100,15 800,0 64,20 96,6 6,81 102,5 89,40 99,32 850,0 64,48 97,0 6,83 102,8 89,41 99,34 900,0 66,52 100,1 6,76 101,8 89,83 99,80 950,0 70,99 106,8 7,33 110,3 89,68 99,64 1000,0 64,52 97,1 6,58 99,1 89,80 99,77 /> /> /> /> /> /> /> /> /> />
Из данныхприведенных в таблице видно, что между концентрацией используемого гербицида инакоплением проростками озимого тритикале вегетативной массы зависимостиустановить не удалось. Отмечается как резкое снижение, так и следующее за нимувеличение сырой и сухой массы проростков. При этом в варианте опыта, гдеконцентрация пестицида составляла 12,5 мкг/л, снижение массы проростков быломаксимально – 84,8% от контроля. Схожие величины снижения массы как сырой, таки воздушно-сухой отмечаются и для вариантов опыта, где концентрации пестицидасоставляли 350 и 600 мкг/л. Сухая масса проростков изменялась в несколькобольшем диапазоне, но существенных отличий от тенденций отмеченных в случаесырой массы не наблюдалось. Этот факт отражает и определенный для этихпоказателей коэффициент корреляции, который составил r = 0,92 при р
Такимобразом, при увеличении концентрации раундапа отмечается незакономерноеколебательное изменение сырой и сухой массы проростков без влияния наобводненность побегов. Исходя из установленного механизма физиологического воздействиягербицида, природу подобного развития проростков мы объяснить не можем.
Результатыисследований по влиянию микроконцентраций гербицида «Раундап» на длинупроростков представлены в таблице 3.
Таблица 3 –Влияние микроконцентраций препарата «Раундап» на длину проростков озимоготритикалеКонцентрация гербицида в питательной среде, мкг/л Длина проростков средняя длина суммарная длина мм относительная (контроль 100%) мм относительная (контроль 100%) Контроль (без гербицида) 89,17 ± 2,40 100,00 8471,00 100,00 5,0 83,00 ± 2,96 93,08 7636,00 90,14 12,5 80,29 ± 3,26
90,04 7226,00 85,30 25,0 86,06 ± 3,07 96,52 8090,00 95,50 37,5 83,14 ± 3,26 93,24 7483,00 88,34 50,0 85,98 ± 2,55 96,42 7910,00 93,38 100,0 88,31 ± 3,24 99,04 7948,00 93,83 150,0 86,49 ± 3,30 96,99 7611,00 89,85 200,0 84,22 ± 3,02 94,45 7327,00 86,50 250,0 96,11 ± 2,01
107,79 8458,00 99,85 300,0 82,84 ± 2,47 92,90 7290,00 86,06 350,0 80,09 ± 2,74
89,82 7208,00 85,09 400,0 83,64 ± 3,00 93,81 7528,00 88,87 450,0 85,59 ± 2,63 95,99 7960,00 93,97 500,0 86,98 ± 2,64 97,54 7567,00 89,33 550,0 88,16 ± 2,75 98,87 8023,00 94,71 600,0 75,17 ± 2,85
84,30 7066,00 83,41 650,0 79,95 ± 2,81
89,66 7435,00 87,77 700,0 83,10 ± 3,12 93,19 7479,00 88,29 750,0 85,78 ± 2,22 96,20 7892,00 93,16 800,0 85,43 ± 2,78 95,81 7518,00 88,75 850,0 87,10 ± 2,55 97,68 7578,00 89,46 900,0 87,74 ± 2,68 98,40 7809,00 92,19 950,0 89,22 ± 2,41 100,06 7673,00 90,58 1000,0 83,96 ± 2,94 94,16 7808,00 92,17
Как видно изпредставленных данных, достоверного влияния раундапа на проростки озимоготритикале не установлено. Как и в случае с накоплением проростками вегетативноймассы, отмечается скачкообразное изменение средней длины проростков, как всторону уменьшения, так и увеличения анализируемого показателя. Наименьшаясредняя длина проростков зафиксирована при концентрации пестицида 600 мкг/л(84,3% к контролю), а наибольшая при 250 мкг/л (107,8% от контроля).
Послепредварительной статистической обработки результатов исследований нами былпроведен однофакторный дисперсионный анализ для установления достоверностиотличий выборок анализируемого показателя. Результаты этого анализа показали,что только при концентрациях 12,5; 250,0; 350,0; 600,0; 650,0 мкг/ланализируемые выборки длин проростков достоверно отличаются от контрольной.Именно к этим выборкам относятся минимальный и максимальный показатели среднейдлины. Только в указанных концентрациях гербицид достоверно стимулирует илиингибирует развитие проростков озимого тритикале.
Суммарнаядлина проростков во всех вариантах опыта оказалась ниже контроля, но, исходя изрезультатов дисперсионного анализа, мы можем оценивать этот показатель только вдостоверно отличимых выборках.
Так какименно суммарная длина проростков является основным критерием при оценкетоксичности, то можно констатировать наличие только ингибирующего влиянияиспользованного гербицида на развитие проростков озимого тритикале. Этопредположение основывается на том, что при концентрации пестицида 250 мкг/лсуммарная длина проростков практически не отличается от таковой в контроле,хотя средняя длина проростков достоверно превышает контрольную почти на 8%.
Отмечаемыерасхождения между двумя анализируемыми показателями (средняя и суммарная длина)дают возможность предположить, что для оценки влияния пестицидов на развитиепроростков необходимо учитывать как среднюю, так и суммарную длину только послепроведения дисперсионного анализа на достоверность отличий выборок.
Кромеприведенных выше характеристик развития проростков нами было введено понятие«весового коэффициента развития проростков», который, на наш взгляд, болееполно отражает развитие вегетативной массы проростков (рисунок 4).
Как видно нарисунке, несмотря на существенный разброс в показателях весового коэффициента взависимости от концентрации, прослеживается тенденция к увеличениюанализируемого показателя. Этот факт является косвенным признакомстимулирующего влияния глифосатсодержащего гербицида «Раундап» на развитиепроростков тритикале.
/>
Рисунок 4 –Зависимость весового коэффициента от концентрации пестицида
3.3Влияние гербицида «Раундап» на содержание в вегетативной массе проростковхлорофилла
Действиемногих ксенобиотиков на высшие растения очень часто выражается в их влиянии нафотосинтетический аппарат. Это отражается на количественном и качественномсодержании пигментов в растениях. В этой связи нами было проведено исследованиевлияния различных концентраций пестицида на содержание в проростках озимоготритикале хлорофиллов.
Результатынаших исследований по изучению влияния гербицида «Раундап» на содержание впроростках озимого тритикале хлорофиллов представлены в таблице 4.
Таблица 4 –Влияние гербицида на содержание в проростках хлорофиллаКонцентра-ция гербицида, мкг/л Содержание хлорофилла хлорофилл a хлорофилл b Хл a + Хл b мг/г
относительное
(контроль 100%) мг/г
относительное
(контроль 100%) мг/г
относительное
(контроль 100%) 1 2 3 4 5 6 7 Контроль 1,77 100,00 0,82 100,00 2,59 100,00 5,0 1,71 96,61 0,79 96,34 2,50 96,53 12,5 1,99 112,43 0,90 109,76 2,89 111,58 25,0 2,05 115,82 0,93 113,41 2,98 115,06 37,5 1,77 100,00 0,83 101,22 2,60 100,39 50,0 1,85 104,52 0,83 101,22 2,68 103,47 100,0 1,95 110,17 0,91 110,98 2,86 110,42 150,0 1,87 105,65 0,79 96,34 2,66 102,70 200,0 1,58 89,27 0,77 93,90 2,35 90,73 250,0 1,88 106,21 0,87 106,10 2,75 106,18 300,0 1,79 101,13 0,81 98,78 2,60 100,39 350,0 1,76 99,44 0,82 100,00 2,58 99,61 400,0 1,52 85,88 0,70 85,37 2,22 85,71 450,0 1,83 103,39 0,89 108,54 2,72 105,02 500,0 1,93 109,04 0,89 108,54 2,82 108,88 550,0 1,70 96,05 0,82 100,00 2,52 97,30 600,0 1,85 104,52 0,83 101,22 2,68 103,47 650,0 1,88 106,21 0,81 98,78 2,69 103,86 700,0 1,66 93,79 0,78 95,12 2,44 94,21 750,0 1,69 95,48 0,64 78,05 2,33 89,96 800,0 1,48 83,62 0,69 84,15 2,17 83,78 850,0 1,57 88,70 0,77 93,90 2,34 90,35 900,0 1,81 102,26 0,89 108,54 2,70 104,25 950,0 1,61 90,96 0,84 102,44 2,45 94,59 1000,0 1,73 97,74 0,86 104,88 2,59 100,00 /> /> /> /> /> /> /> />
Результатыопытов по определению содержания хлорофилла показали, что также как и впредыдущих случаях зависимости между концентрацией пестицида в питательномрастворе и содержанием хлорофилла в проростках нет.
Наблюдаетсяскачкообразное незакономерное колебание содержания как хлорофилла а, так ихлорофилла b. Однако есть незначительный тренд снижения анализируемыхпоказателей в зависимости от концентраций, но установить его достоверность покане представляется возможности. Необходим более детальный анализ данных с учетомдополнительных серий экспериментов. Следует отметить, что максимальныеконцентрации хлорофилла фиксируются в вариантах опыта, где концентрацияиспользуемого гербицида составляла 12,5 и 25,0 мкг/л. В тоже время приконцентрации 750 мкг/л отмечался максимум в соотношении концентрацийхлорофиллов a и b (рисунок 5). Причину данного явления мы пока объяснить неможем.
/>
Рисунок 5 –Отношение концентрации хлорофиллов a и b (контроль 100%) 1 – контроль, 2–25 –варианты опытов с различной концентрацией
Такимобразом, на данном этапе исследований мы не можем использовать содержаниехлорофилла в качестве показателя влияния гербицида «Раундап» на проросткиозимого тритикале.
В ходепроведенных экспериментов было установлено, что озимое тритикале сорта «Михась»является относительно устойчивым к действию микроколичеств глифосатсодержащегогербицида «Раундап». Однако развитие проростков идет неравномерно, особенно впервые дни развития. Следовательно можно предположить, что используемыйглифосатсодержащий ксенобиотик в динамике оказывает несколько более выраженноевлияние по сравнению с результатами экспериментов с выращиванием проростков втечение 7 дней.
3.4Влияние гербицида «Раундап» на развитие проростков озимого тритикале в динамике
Развитиепроростков озимого тритикале мы исследовали на 4-е, 5-е и 6-е сутки послезакладки опыта. Результаты наших исследований по влиянию глифосатсодержащегогербицида «Раундап» на лабораторную всхожесть семян и накопление проросткамивегетативной массы в динамике представлены в таблице 5.
Таблица 5 –Лабораторная всхожесть и вегетативная масса проростков в динамике экспериментаВариант опыта Сроки отбора образцов Лабораторная всхожесть Средняя масса одного проростка, мг сырая воздушно-сухая контроль 4 сутки 80 55,69 5,70 5 сутки 88 76,35 7,29 6 сутки 92 88,28 7,96 0,05 мг/л 4 сутки 84 51,00 5,06 5 сутки 86 81,94 7,83 6 сутки 83 93,58 8,89 0,25 мг/л 4 сутки 83 56,86 5,75 5 сутки 88 76,01 6,96 6 сутки 81 95,70 8,86 0,50 мг/л 4 сутки 78 54,03 5,28 5 сутки 83 74,94 7,52 6 сутки 86 95,03 8,92
Как видно изпредставленных данных, отмечается незначительное снижение лабораторнойвсхожести семян озимого тритикале под действием примененного гербицида, но мыне может утверждать, что это воздействие достоверно. Для подтверждения илиопровержения этого предположения необходимо проведение многократныхэкспериментов с большим количеством повторностей.
Влияниепестицида на накопление проростками вегетативной массы на первый взгляднезначительно и не имеет определенной закономерности. В проростках отобранныхна 4-е и 5-е сутки после начала эксперимента сырая и сухая массы незначительноотличались от контрольной как в сторону увеличения, так и уменьшенияанализируемых показателей массы. Только у проростков отобранных на 6-е суткизафиксировано превышение сухой и сырой массы по отношению к контролю. Этоувеличение не зависит от концентрации пестицида в среде. Сырая масса проростковсоставила 107% от таковой в контроле, а сухая – 112%.
Однако намибыл отмечен существенный момент в интенсивности накопления вегетативной массыпроростками. Так при концентрации пестицида 0,05 мг/л прирост между первым ивторым отбором проростков составил 150% от контроля. На следующие суткиотмечалось резкое снижение прироста, и он составил 98% от прироста вконтрольном варианте. В среднем за 2-е суток прирост в этом варианте опытасоставлял около 130% от такового в контроле. В противоположность этому в вариантеопыта, где концентрация пестицида составляла 0,25 мг/л, прирост между первым ивторым отбором был ниже контрольного (93%), а на следующие сутки резко возрос –до 165% по сравнению с контролем. В среднем за двое суток прирост составил 119%к контрольному. Аналогично с этим вариантом опыта проходило накоплениевегетативной массы в опыте с концентрацией пестицида равной 0,50 мг/л. Здесьсредний прирост фитомассы составил 126% (101 и 168% соответственно по отборам).
Еще болеесущественные различия мы отметили при накоплении проростками сухой массы.Относительные величины прироста составляют от 76 до 283% от контрольноговарианта. Здесь отмечается та же закономерность, что и при накоплении сыроймассы, но она более выражена. В варианте опыта с концентрацией гербицида 0,05мг/л отмечается снижение суточного прироста со 174 до 159% (за 2-е суток – 170%)от контрольного варианта. То есть, в любом случае интенсивность увеличениясухой массы гораздо выше, чем в контроле, хоть и снижается на вторые сутки.
При концентрациипестицида 0,25 мг/л между первым и вторым отбором накопление сухой массыгораздо ниже, чем в контроле (76%), а в следующие сутки происходит резкоеувеличение интенсивности накопления сухой массы – 283% от таковой в контроле.За 2-е суток прирост составил 137% по сравнению с контрольным вариантом. Вопыте с концентрацией ксенобиотика 0,50 мг/л также отмечен более интенсивныйотносительный прирост сухой массы – 140 и 209% соответственно. За 2-е сутокприрост составил 161% по сравнению с аналогичной величиной в контроле.
Следуетотметить, что данные тенденции сохраняются и при использовании в сравнительноманализе отношения не к контрольному варианту, а к относительному приростувнутри самого варианта – в некоторых случаях относительный прирост имеет болееширокий диапазон варьирования.
На основанииэтих данных можно сделать вывод о том, что пестицид влияет не на абсолютныевеличины масс проростков, а на интенсивность их накопления в динамике. Однакообнаруженный эффект нуждается в дальнейшем исследовании для его подтверждения иобъяснения причин.
Нашиисследования по влиянию раундапа на длину проростков представлены на рисунке 6.
Как видно нарисунке, внесение в питательный раствор микроконцентраций гербицида «Раундап»не оказало существенного влияния на длину проростков озимого тритикале. На 4-есутки в вариантах опыта с добавлением 0,05 и 0,50 мг/л пестицида отмечалосьнекоторое снижение анализируемого показателя по сравнению с контролем, а при0,25 мг/л показатель практически не отличается от контрольного.
/>
Рисунок 6 –Влияние препарата «Раундап» на длину проростков Примечание. 1,5,9 – длинапроростков в контроле на 4,5,6 сутки; 2,6,10 – при концентрации 0,05 мг/л; 3,7,11– при концентрации 0,25 мг/л; 4,8,12 – при концентрации 0,50 мг/л
Однако втечение следующих суток наблюдается некоторая диспропорция в интенсивностироста проростков (по аналогии с вегетативной массой). Наибольший приростзафиксирован при концентрации пестицида 0,05 мг/л, а наименьший – приконцентрации 0,25 мг/л. Существенным моментом отмеченного явления является то,что при концентрациях 0,05 и 0,25 мг/л зафиксированы противоположные тенденцииприроста по суткам. Если у первого опыта первоначально прирост составлял около145% от прироста в контрольном варианте, то затем происходило резкое снижениеэтого показателя до 77% от контроля. В среднем за 2-е суток прирост составил115,7% по сравнению с аналогичным показателем в контроле. При использованииконцентрации пестицида 0,25 мг/л наоборот – первоначальный прирост составлялвсего 70,5% от контроля, а на следующий день – 183,0%. В среднем за двое сутоканализируемый показатель составил 118,4% от контрольного. В опыте сконцентрацией пестицида равной 0,50 мг/л был отмечен динамичный прирост,который составил соответственно 109,7 и 118,2% от такового в контроле. Среднийприрост за 2-е суток составил 113,3% по сравнению с контрольным вариантомопыта.
Отмеченныеизменения анализируемого показателя сказываются на весовом коэффициенте (рисунок7).
/>
Рисунок 7 –Весовой коэффициент проростков озимого тритикале в динамическом эксперименте
Как видно изпредставленных данных, при первом измерении (на 4-е сутки) четко прослеживаетсяувеличение весового коэффициента в концентрациях 0,25 и 0,50 мг/л. На 5-е суткитолько в опыте, где концентрация гербицида составляла 0,25 мг/л, коэффициентбыл выше, чем в контроле. При концентрации 0,50 мг/л произошло снижениеанализируемого показателя. Для концентрации 0,05 мг/л весовой коэффициент какна 4-е, так и на 5-е сутки от аналогичной величины в контроле практически неотличался. На 6-е сутки нами было зафиксировано увеличение весовогокоэффициента по отношению к контролю во всех вариантах опыта.
Таким образом,нами было отмечено что, несмотря на отсутствие достоверного закономерноговлияния микроконцентраций глифосатсодержащего гербицида «Раундап» на длинупроростков, он оказывает заметное влияние на прирост растений. Однако резкиеколебания этого прироста за 2-е суток могут свидетельствовать о возможностикаких-то нарушений в морфолого-физиологических процессах у проростков, несмотряна то, что указанный прирост выше, чем в контрольном варианте. Обнаруженныйфакт нуждается в дальнейшем подтверждении и изучении.
Нашиисследования по изучению динамики влияния глифосатсодержащего гербицида«Раундап» на содержание хлорофиллов представлены в таблице 6.
Таблица 6 –Динамика влияния гербицида «Раундап» на содержание в проростках хлорофилловСроки отбора образцов Вариант опыта Содержание хлорофилла хлорофилл a хлорофилл b мг/г
относительное
(контроль 100%) мг/г
относительное
(контроль 100%) 4-е сутки
Контроль
2,273
100,0
0,490
100,0 0,05 мг/л 2,334 102,7 0,443 90,4 0,25 мг/л 2,602 114,5 0,608 124,0 0,50 мг/л 2,353 103,5 0,763 155,6 5-е сутки
Контроль
3,793
100,0
1,313
100,0 0,05 мг/л 3,626 95,6 1,422 108,3 0,25 мг/л 4,202 110,8 1,619 123,3 0,50 мг/л 3,163 83,4 1,305 99,4 6-е сутки
Контроль
3,934
100,0
1,577
100,0 0,05 мг/л 4,558 115,9 1,763 111,8 0,25 мг/л 4,675 118,8 1,756 111,3 0,50 мг/л 4,262 108,3 1,776 112,6
Как видно изтаблицы, раундап оказывает воздействие как на содержание хлорофилла а, так ихлорофилла b. При концентрации пестицида 0,05 мг/л нами отмечено незначительноеснижение содержания хлорофилла а на 5-е сутки с последующим резким возрастаниемна 6-е. Содержание же хлорофилла b изначально было ниже контрольного, но затемпроисходило постепенное увеличение его содержания в проростках.
Приконцентрации пестицида 0,25 мг/л нами отмечено повышенное содержание (поотношению к контролю) хлорофиллов на протяжении всего эксперимента, но на 6-есутки произошло снижение относительного содержания хлорофилла b.
В опыте, гдеконцентрация пестицида составляла 0,50 мг/л, отмечалось резкое колебаниеотносительного содержания пигментов. В наибольшей степени это характерно дляхлорофилла b. Если на 4-е сутки этот показатель почти в 1,5 раза превосходилтаковой в контроле, то на 5-е от контроля не отличался, а к 6-м суткамотносительное содержание его опять выросло. Следует отметить, что в этомварианте опыта зафиксировано и самое низкое относительное содержание хлорофиллаа – на 5-е сутки оно составляло только 83,4% от контроля. Кроме того, на 6-есутки во всех вариантах опыта отмечается повышенное относительное содержаниехлорофиллов в проростках.
Указанныевыше особенности содержания хлорофиллов в проростках отразились и насоотношении зеленых пигментов (рисунок 8).
/>
Рисунок 8 –Динамика индекса хлорофиллов в проростках озимого тритикале
Как видно нарисунке, влияние различных концентраций пестицида на соотношение хлорофилловотмечается только на 4-е сутки. В дальнейшем хлорофилльный индекс практическине отличается от такового в контроле.
Такимобразом, нами было установлено наличие влияния глифосатсодержащего гербицида«Раундап» на содержание в проростках озимого тритикале зеленых пигментов. Ноустановить четкой зависимости между содержанием хлорофиллов и концентрациейпестицида не удалось.
Заключение
В ходепроведенных экспериментов было установлено, что озимое тритикале сорта «Михась»является относительно устойчивым к действию микроколичеств глифосатсодержащегогербицида «Раундап».
Междувсхожестью семян озимого тритикале и концентрацией изучаемого препаратазависимости не установлено. Во всех случаях всхожесть семян культуры нижеконтрольной, но не снижается более чем на 10%.
Приувеличении концентрации раундапа отмечается незакономерная тенденция к снижениюсырой и сухой массы проростков озимого тритикале без влияния на обводненностьпобегов. Только в концентрациях 12,5; 250,0; 350,0; 600,0; 650,0 мкг/л гербициддостоверно стимулирует или ингибирует развитие проростков озимого тритикале.
Былоотмечено, что, несмотря на отсутствие достоверного закономерного влияниямикроконцентраций глифосатсодержащего гербицида «Раундап» на длину проростков,он оказывает заметное влияние на прирост растений. Однако резкие колебанияэтого прироста за 2-е суток могут свидетельствовать о возможности каких-тонарушений в морфолого-физиологических процессах у проростков, несмотря на то,что указанный прирост выше, чем в контрольном варианте. Указанное явлениехарактерно и для накопления проростками вегетативной массы.
Былоустановлено наличие влияния глифосатсодержащего гербицида «Раундап» насодержание в проростках озимого тритикале зеленых пигментов. Но установитьчеткой зависимости между содержанием хлорофиллов и концентрацией пестицида неудалось.
Списокисточников
1 Захаренко, В.А. Защитарастений в третьем тысячелетии. (Материалы XIV международного конгресса позащите растений) / В.А. Захаренко // Агрохимия. – 2000. – №4. – С. 84–93.
2 История развития ипроблемы защиты растений / А.Ф. Ченкин [и др.]; под обш. ред. А.Ф. Ченкина. –М.: РАСХН, 1997. – 331 с.
3 Захаренко, В.А.Пестициды в интегрированной защите растений. Обзоры / В.А. Захаренко //Агрохимия. – 1992. – №12. – С. 92–105.
4 Зексер, Б.Интегрированная защита растений: в ногу со временем / Б. Зексер, А.А. Кириенко //Агрохимия. – 1992. – №11. – С. 8.
5 Данилишин, Б.М.Химизация земледелия: поиски новых альтернатив / Б.М. Данилишин // Вестниксельскохозяйственной науки. – 1992. – №5–6. – С. 157–162.
6 Буга, С.Ф. Защитарастений: учебное пособие для средних специальных учебных заведенийсельскохозяйственного профиля / С.Ф. Буга, Н.И. Протасов, В.Ф. Самерсов. – М.:Ураджай, 2001. – 307 с.
7 Ченкин, А.Ф. Справочникагронома по защите растений / А.Ф. Ченкин, В.А. Черкасов, В.А. Захаренко. – М.:Агропромиздат, 1990. – 367 с.
8 Иванов, В.В.Использование химических и биологических средств борьбы с вредителями леса /В.В. Иванов. – М.: Пушкин: ВНИИЛМЛХ, 1976. – 340 с.
9 Мельников, Н.Н.Поведение синтетических пиретроидов в объектах окружающей среды / Н.Н.Мельников, Н.И. Аронова // Агрохимия. – 1987. – №9. – С. 109–129.
10 Петрушов, А.З.Пиретроидные инсектициды / А.З. Петрушов // Агрохимия. – 1984. – №6. – С. 121–126.
11 Грапов, А.Ф. Успехи вобласти инсектицидов и акарицидов / А.Ф. Грапов, Л.В. Разводовская //Агрохимия. – 1990. – №7. – С. 126–147.
12 Спиридонов, Ю.Я.Проблемы засоренности посевов и борьбы с ней в условиях современного состояниясельского хозяйства России / Ю.Я. Спиридонов // Агрохимия. – 1996. – №10. –С. 75–83.
13 Мельников, М.М.Пестициды и окружающая среда / М.М. Мельников, А.И. Волков, О.А. Короткова. – М.:Химия, 1977. – 240 с.
14 Протасов, Н.И.Гербициды в интенсивном земледелии: учебное пособие / Н.И. Протасов. – Минск:Ураджай, 1988. – 232 с.
15 Амирханов, Д.В. Использованиепиретроидов для борьбы с колорадским жуком / Д.В. Амирханов, Т.Л. Леонтьева,О.П. Черникова // Агрохимия. – 1990. – №6. – С. 91–97.
16 Зинченко, В.А.Химическая защита растений: средства, технология и экологическая безопасность:учебное пособие для вузов / В.А. Зинченко. – М.: КолосС, 2005. – 232 с.
17 Интегрированныесистемы защиты сельскохозяйственных культур от вредителей, болезней и сорняков:рекомендации / Нац. акад. наук Респ. Беларусь, Ин-т защиты растений НАНБеларуси; под общ. ред. С.В. Сороки. – Мн.: Бел. наука, 2005. – 462 с.
18 Жукова, П.С.Регуляторы роста и гербициды на овощных культурах и картофеле / П.С. Жукова,Н.А. Лобань. – Мн.: Беларускi кнiгазбор, 2000. – 483 с.
19 Никончик, П.И.Агроэкономические основы систем использования земли / П.И. Никончик. – Минск:Белорус. наука, 2007. – 532 с.
20 Рекомендации по борьбес сорными растениями в посевах сельскохозяйственных культур: второе изд., испр.и доп. / С.В. Сорока [и др.]. – Минск: РУП «ИВЦ Минфина», 2005. – 104 с.
21 Голиков, Г.П. Методы ипроблемы экотоксикологического моделирования и прогнозирования / Г.П. Голиков.– М.: Пущино, 1979. – 76 с.
22 Лунев, М.И. Пестицидыи охрана агрофитоценоза / М.И. Лунев. – М.: Колос, 1992. – 270 с.
23 Венгорек, В. Влияниепестицидов на урожай и окружающую среду / В. Венгорек // Защита растений. –1992. – №10. – С. 6–8.
24 Федке, К. Биохимия ифизиология действия гербицидов / К. Федке / пер. с англ. – М.: Агропромиздат,1985. – 224 с.
25 Голышин, Н.М. Механизмдействия фунгицидов / Н.М. Голышин // Защита растений. – 1991. – №10. – С. 13–15.
26 Захаренко, В.А.Гербициды / В.А. Захаренко. – М.: Агропромиздат, 1990. – 240 с.
27 Кожуро, Ю.И. Анализцитогенетического действия гербицидов трефлан и зенкор на растения ячменя /Ю.И. Кожуро, Н.П. Максимова // Белорусский государственный университет, г. Минск,Беларусь [Электронный ресурс]. – 2008. – Режим доступа:. – Дата доступа:10.11.2009.
28 Каталог пестицидов иудобрений, разрешенных для применения в Республике Беларусь: Справочное издание/ Р. А. Новицкий [и др.]; – Мн.: Инфофорум, 2005. – 378 с.
29 Применять глифосатправильно [Электронный ресурс]. – 2008. – Режим доступа: www.forest.ru/rus/bulletin/16/5full.html. – Дата доступа:24.10.2009.
30 Лунев, М.И.Фитотоксическое последствие и побочное действие гербицидов / М.И. Лунев, Л.П.Кретова // Защита растений. – 1991. – №7. – С. 22–23.
31 Кокс, К. Глифосат («Раундап»)/ К. Кокс // Журнал пестицидной реформы [Электронный ресурс]. – 1998. – №3.– Режим доступа: www.pesticide.org/gly.pdf. – Дата доступа: 12.01.2009.
32 Берзин, В.Б. Механизмдействия, метаболизм и деградация пиретроидов / В.Б. Берзин // Агрохимия. –1985. – №2. – С. 126–135.