Курсоваяработа на тему:
Основные принципы подбора условий разделения
Передначинающим хроматографистом проблема выбора типа разделительной системы(эксклюзионной, ион-парной, адсорбционной или другой) и подбора условий, скоторыми лучше эту систему использовать для анализа необходимой ему смесивеществ, встает сразу же после того, как он получает эту смесь. Решить этотвопрос тем более сложно, чем менее известно вещество или вещества, с которымипредстоит работать, чем сложнее по составу проба, чем меньше опыт ухроматографиста и его возможность воспроизвести методику, описанную влитературе (отсутствие необходимых колонок и сорбентов, растворителей высокогокачества, детектора, градиента растворителя и т.п.). Многое зависит от того,располагает ли хроматографист такими-то чистыми стандартами, оборудованием иметодиками для очистки сложных по составу проб, особенно медицинских ибиологических, от мешающих анализу примесей (взвесей, полимерных веществ, солейи др.).
Как правило,надо стремиться подбирать условия разделения по принципу — от простого ксложному.
Если вещество,с которым предстоит работать, не является уникальным (они встречаютсядостаточно редко), прежде всего, следует собрать о нем всю возможнуюинформацию: к какому классу веществ относится, какова его формула, молекулярнаямасса, какие есть функциональные группы, в чем растворяется, какова температуракипения, показатель преломления, УФ-спектр, растворимость в различныхрастворителях и другое.
Когдаинформация о веществе или веществах собрана, следует провести тщательныйлитературный поиск с использованием реферативных журналов, оригинальнойлитературы, картотек, каталогов и собрать всю информацию о методиках анализаэтого вещества как ВЭЖХ, так и родственными методами (ГЖХ, ТСХ, колоночнойхроматографией). Попутно необходимо собрать информацию о методах очистки иподготовки проб. Собранную информацию следует заносить на карточки и хранить вкартотеке. Если информация о веществе очень скудна или же полностьюотсутствует, следует собирать информацию о наиболее близких по свойствамклассах веществ. Когда весь собранный литературный материал обработан и систематизирован,нужно выбрать ту из методик, которая наиболее соответствует имеющемусяоборудованию, наиболее проста для исполнения и для воспроизведения которой естьвсе условия (колонки, сорбенты, растворители, реагенты).
Начинатьследует с подготовки хроматографической системы. Ее следует тщательнопроверить, приготовить нужный растворитель, промыть, уравновесить колонку сновым растворителем. Если возможно, после этого ввести тестовую смесь, чтобыубедиться в том, что колонка и вся система в целом наводятся в рабочемсостоянии. Уравновешивание колонки с растворителем следует проводить до техпор, пока параметры удерживания тест-веществ не станут совершенно стабильными.Затем следует перейти к анализу. На начальном этапе работы не следуетувлекаться высокой чувствительностью детектирования, за исключением только техслучаев, когда исследователь не располагает чистыми стандартами и вынужденсразу работать с образцами, чистота которых вызывает сомнение. Однако и в этихслучаях лучше провести очистку до ВЭЖХ, использовав метод ТСХ или другой.
Установив надетекторе среднюю чувствительность, следует по одному ввести в инжекторрастворы всех имеющихся и представляющих интерес чистых веществ (стандартов),фиксируя каждый раз время выхода, форму пика, наличие примесей и все отклоненияот нормы, которые замечены. Если полученные результаты близки к тем, которыеполучены в методике, взятой в литературе, порядок выхода пиков тот же и формаих правильная, следует проанализировать наиболее чистую из проб, с которымипредполагается работать. Если в дальнейшем предполагается работать сзагрязненными пробами, очистка которых затруднена или невозможна, нужнозащитить колонку от возможного загрязнения и выхода из строя путем установкипосле инжектора предколонки. Следует учитывать, что предколонка, заполненнаяпелликулярным материалом, имеет малую емкость по загрязнениям, тогда какзаполненная микрочастицами размером 5 или 10 мкм—существенно большую. Установкапредколонки, заполненной микрочастицами, изменяет время удерживания веществпробы, поэтому при ее установке следует повторить ввод чистых стандартов иидентификацию компонентов в пробе.
Если всевещества, которые вас интересуют, выходят достаточно быстро и с хорошимразрешением, можно переходить к калибровке по искусственным смесям и начинатьколичественную работу. Если же выходят не все вещества, следует попытатьсядобиться их элюирования, увеличив силу растворителя. Полезно, если естьвозможность, для сокращения объема поиска использовать градиент растворителя отслабого до наиболее сильного. При этом не следует забывать два положения:во-первых, колонка должна быть промыта от тяжелых компонентов предыдущих проб,анализировавшихся изократически, сильным растворителем; во-вторых, всегдаследует проверить отсутствие ложных пиков при градиенте, введя вместо пробычистый растворитель. Если исследователь не располагает возможностью применитьградиент, следует использовать метод поиска от самого сильного растворителя кслабому.
Прииспользовании для анализа обращенно-фазного варианта работы, подайте на колонкунаиболее сильный растворитель, например метанол, уравновесьте с ним колонку (ивымойте все остатки от предыдущих проб, анализировавшихся с более слабымрастворителем). Затем введите пробу (еще лучше, стандарт), наиболее трудно элюирующуюся.Если компонент элюируется слишком быстро (например, с нулевым объемом), значит,растворитель слишком сильный.
Уравновесьтеколонку с более слабым растворителем (например, метанол — вода в соотношении80:20) и повторить ввод пробы. Если результат тот же, переходитепоследовательно к соотношениям 60:40, 40:60, 20:80 до тех пор, пока не будетполучено разделение достаточно хорошее с приемлемым временем элюирования всейпробы (k' последнего элюирующегося компонента не должнопревышать 10). Если при этом полученная селективность (разделение некоторыхкомпонентов) вас не удовлетворяет, можно испытать систему ацетонитрил — вода (снесколько меньшим содержанием ацетонитрила по сравнению с системойметанол—вода, в которой получено приемлемое время элюирования) — ееселективность несколько другая. Наконец, можно испытать и системутетрагидрофуран— вода (со значительно меньшим содержанием тетрагидрофурана посравнению с системой метанол—вода), хотя она значительно менее удобна (хужеработает в ближней УФ-области, более склонна к окислению). Наконец, имеяселективность по всем трем системам обращенно-фазных растворителей, можноопределить состав трехкомпонентного (или даже четырехкомпонентного)растворителя, обеспечивающий наилучшее разделение всех компонентов. Этим,однако, на практике пользуются редко, довольствуясь обычно двухкомпонентнымрастворителем наилучшей селективности.
При работе внормально-фазном режиме с привитой фазой или в адсорбционном вариантеуравновесьте колонку с более сильным растворителем, например с системойгексан—изопропанол в соотношении 100:10. Так же, как и в предыдущем случае,вводите пробу при этом составе растворителя; далее повторяйте несколько раз,каждый раз уменьшая элюирующую силу растворителя (ряд соотношений гексан — изопропанол100:3, 100:1, 100:0,3 и 100:0,1 и т.д.) до тех пор, пока не будет достигнуторазделение с k' для последнего элюирующегося компонента8—10. Если полученная при этом селективность вас не удовлетворяет, можнопопытаться повторить эту работу, заменив модификатор на другой (например,ацетонитрил, метиленхлорид, уксусную кислоту и т.д.).
При этомселективность естественно, будет меняться. Можно также попытаться сменитьпривитую фазу на другую, оставив прежним модификатор, и за счет этого добитьсятребуемой селективности.
При работе вионообменном режиме подбор условии осуществляют аналогично, начиная с наиболеесильного буферного раствора и последовательно идя к более слабому.Селективность и элюирующую силу при этом можно менять, изменяя рН буферногораствора, вводя большие или меньшие количества модификатора — органическогорастворителя (метанола, ацуонитрила и др.) или заменяя один буферный раствор надругой.
В случаеиспользования ион-парной хроматографии выбор условий включает те же факторы,которые используют в ионообменной хроматографии. Однако дополнительноселективность можно регулировать, добиваясь нужного разделения, путемувеличения или уменьшения концентрации ион-парного реагента, а также изменяясоотношение полярной и неполярной групп в молекуле ион-парного реагента.
Подвижные фазы для ВЭЖХ и ТСХ
Аналитическая ВЭЖХ уже давноиграет ключевую роль в контроле технологических процессов, контроле качествафармацевтической продукции и анализе объектов окружающей среды.
Серьёзные задачи вынуждают предъявлятьвысокие требования к используемым в качестве подвижной фазы растворителям.
Низкое УФ-поглощение, низкоесодержание механических примесей, низкая кислотность или щёлочность всовокупности с малым количеством сухого остатка после упаривания являются необходимымусловием воспроизводимости разделения. Данным требованиям в полной мереудовлетворяют растворители под торговой маркой LiChrosolv®,которые производятся с использованием специально отобранных реактивов, а затемподвергаются многостадийному процессу очистки, обуславливающему неизменновысокое качество каждой партии растворителей. Растворители LiChrosolv®для ВЭЖХ производятся так, чтобы полностью исключить вероятность их загрязненияследовыми количествами каких либо побочных соединений, способных затруднитьинтерпретацию полученных результатов анализа.
Сочетание классическойжидкостной хроматографии (ЖХ) с масс-спектрометрическим (МС) детектированиембыстрыми темпами становится основным исследовательским инструментом фактическив каждой области химического анализа. ЖХ — МС сочетает в себе преимуществахроматографического разделения с масс-спектрометрическим детектированием:низким пределом детектирования и способностью устанавливать структуруанализируемых соединений (особенно важно при определении и характеризацииметаболитов). Особо чистые растворители марки LiChrosolvхарактеризуются низким УФ-поглощением и низким содержанием ионов металлов.
Благодаря высокому качествурастворителей аналитикам удаётся избежать проведения дорогостоящих повторных анализовили потерь ценных образцов.
Система хранения растворителей
Специальные стальные контейнерыодноразового использования, разработанные компанией Мерк для высокочистыхрастворителей, обладают рядом преимуществ
• Отсутствием взаимодействийрастворителей с материалом контейнера
• Высокой стабильностью
• Меньшими потерямирастворителей
• Возможностью подсоединениядополнительного оборудования
• Меньшим риском попаданиязагрязнений
• Большей безопасностью работы
Растворители дляаналитической хроматографии
В современной аналитической ВЭЖХчасто используется градиентный режим элюирования. Поэтому мы производимрастворители, предназначенные как для изократического, так и градиентногорежимов элюирования. Таким образом, при использовании этих растворителей,например, для разделения энантиомеров на хиральных фазах, негативные эффекты,связанные с градиентным режимом элюирования, сводятся к минимуму.
Что касается высокочистыхрастворителей марки LiChrosolv®, то дополнительно кимеющемуся у нас широкому ассортименту мы предлагаем растворители в стеклянныхсосудах объёмом 1; 2.5 и 4 л, в алюминиевых бутылках объёмом 5 л и стальныхконтейнерах одноразового использования объёмом 10, 30 и 185 л. Более крупныеобъёмы поставляются под заказ. Преимущества данных контейнеров описаны в нашейброшюре, посвящённой растворителям. Идеальная линия растворителей должнанепременно включать удобную и не приводящую к загрязнению систему подачирастворителей. В наличии имеется соответствующая брошюра.
Физико-химические характеристикирастворителей LiChrosolv®Кат. номер Продукт Остаток после упар. [мг/л]
Поглощение [макс. мЕА]
210 235 254
Флуоресценция№
[макс. ppb]
254 365 1.00030 Ацетонитрил 4 2.0 - 0.5 1.0 0.5 1.11727 Этанол 5 - 5.0 2.0 - - 1.06007 Метанол 4 - 2.0 1.0 1.0 1.0 1.01040 2-Пропанол 5 - 2.5 2.0 - - 1.15333 Вода 5 5.0 - 0.5 1.0 0.5
1) 1 ppbсоответствует 1 ppb хинина в 0,05М H2S04
/>
*УФ-спектр ацетонитрила марки LiChrosolv®
Длина оптического пути: 1 смКювета сравнения: вода LiChrosolv®
Информация для заказарастворителей LiChrosolv®Название Каталожный номер Чистота (ГХ) мин.[%] Сухой остаток макс, [мг/л]
Вода макс.
[%] Кислот-ность макс, [мэкв/г] Щёлоч-ность макс, [мэкв/г] Пропуска-емое™ УФ на нм [%] Объём Ацетон 1.00020.1000 1.00020.2500 1.00020.4000 1.00020.5000 99.8 2 0.05 0.0002 0.0002 335(50%) 340(80%) 350(98%)
1л
2.5 л 4л
5л
Ацетонитрил ос.ч. hypergrade для
жх/мс* 1.00029.1000 1.00029.2500 1.00029.9010 1.00029.9030 99.9 1 0.01 0.0001 0.0002 191(25%) 195(85%) 200(96%)
1л
2.5л 10л
30л Ацетонитрил градиентный 1.00030.1000 1.00030.2500 1.00030.4000 1.00030.5000 1.00030.9010 1.00030.9030 1.00030.9185 99.9 2 0.02 0.0002 0.0002 193(60%) 195(80%) 230(98%)
1л
2.5л
4л
5л
10л
30л 185л Ацетонитрил изократический 1.14291.1000 1.14291.2500 1.14291.4000 1.14291.5000 1.14291.9010 1.14291.9030 1.14291.9185 99.8 4 0.05 0.0005 0.0002
195(70%) 200(90%)
240(98%)
1л
2.5л
4л
5л
10л
30л 185л Бензол 1.01768.1000 99.8 2 0.03 0.0002 0.0002 285(70%) 290(90%) 340(98%) 1л нБутанол 1.01988.1000 1.01988.2500 99.8 2 0.05 0.0002 0.0002 230(75%) 240(85%) 310(99%) 1л 2.5л Третбутил метиловый эфир 1.01845.1000 1.01845.2500 99.8 2 0.02 0.0002 0.0002 240(60%) 255(85%) 280(98%) 1л 2.5л Хлороформ, стабилизированный 1.02444.1000 1.02444.2500 1.02444.4000 99.8 5 0.01 0.0002 0.0002 255(70%) 260(85%) 300(98%) 1л 2.5л 4л 1-хлорбутан 1.01692.1000 99.8 2 0.01 0.0002 0.0002 227(60%) 232(80%) 250(98%) 1л Циклогексан 1.02827.1000 1.02827.2500 99.9 2 0.01 0.0002 0.0002 230(75%) 240(90%) 260 (99%)
1л
2.5л 1,2-дихлорэтан 1.13713.1000 99.8 2 0.02 0.0002 0.0002 240(85%) 245(90%) 270(99%) 1л
Дихлор-метан, стабилизи-
рованный 1.06044.1000 1.06044.2500 1.06044.4000 99.9 5 0.01 0.0002 0.0002 240(70%) 245(90%) 260(99%)
1л
2.5л
4л 1,4-диоксан 1.03132.1000 1.03132.2500 99.8 2 0.02 0.0002 0.0002 245(50%) 270(80%) 300(98%)
1л
2.5л Этанол градиентный 1.11727.1000 1.11727.2500 1.11727.4000 99.9 2 0.1 0.0002 0.0002 225(60%) 240(85%) 260(98%)
1л
2.5л
4л Этилацетат 1.00868.1000 1.00868.2500 1.00868.4000 99.8 2 0.05 0.0002 0.0002 260(50%) 265(80%) 270(98%)
1л
2.5л
4л Н-гептан 1.04390.1000 1.04390.2500 1.04390.9010 1.04390.9030 99.3 2 0.005 0.0002 0.0002 210(50%) 220(80%) 245(98%)
1л
2.5л 10л
30л Н-гексан 1.04391.1000 1.04391.2500 1.04391.4000 1.04391.5000 1.04391.9010 98.0 1 0.01 0.0002 0.0002 210(50%) 220(80%) 245(98%)
1л
2.5л
4л
5л
10л Изогексан 1.04335.2500 99.0 2 0.005 0.0002 0.0002 210(60%) 220(80%) 245(98%) 2.5л Изооктан 1.04717.1000 1.04717.2500 99.0 2 0.01 0.0005 0.0002 210(50%) 220(80%) 270(98%)
1л
2.5л Метанол ос.ч. для ЖХ/МС 1.06035.1000 1.06035.2500 99.9 1 0.01 0.0002 0.0002 210(35%) 220(60%) 230(75%)
1л
2.5л Метанол градиентный 1.06007.1000 1.06007.2500 1.06007.4000 1.06007.5000 1.06007.9010 1.06007.9030 1.06007.9185 99.9 2 0.02 0.0005 0.0002 220(55%) 235(83%) 260(98%)
1л
2.5л
4л
5л
10л
30л 185л Метанол 1.06018.1000 1.06018.2500 1.06018.5000 1.06018.9010 1.06018.9030 1.06018.9185 99.8 3 0.03 0.0005 0.0002 225(50%) 240(80%) 265(98%)
1л
2.5л
5л
10л
30л 185л 1-пропанол 1.01024.1000 1.01024.2500 99.8 2 0.02 0.0005 0.0002 230(70%) 240(80%) 270(98%)
1л
2.5л 2-пропанол 1.01040.1000 1.01040.2500 1.01040.5000 1.01040.9010 1.01040.9030 99.9 2 0.05 0.0005 0.0002 220(80%) 230(90%) 250(98%)
1л
2.5л
5л
10л
30л
Четырёххорис
тый углерод 1.02223.1000 99.9 5 0.01 0.0002 0.0002 270(50%) 275(80%) 290(98%) 1л
Тетрагидро
фуран 1.08101.1000 1.08101.2500 1.08101.4000 1.08101.9010 99.9 1 0.02 0.0005 0.0002 260(80%) 270(90%) 310(99%)
1л
2.5л
4л
10л Толуол 1.08327.1000 1.08327.2500 1.08327.4000 99.9 2 0.05 0.0005 0.0002 300(70%) 310(80%) 350(98%)
1л
2.5л
4л 1,2,4-трихлор-бензол 1.15224.1000 99.0 2 0.01 0.002 0.0002 315(50%) 320(80%) 385(98%) 1л Вода градиентная 1.15333.1000 1.15333.2500 1.15333.9010 1.15333.9030 5
1л
2.5л
10л
30л
Новый стандарт растворителейдля ВЭЖХ
Определение полиароматическихуглеводородов (ПАУ) в объектах окружающей среды является одной из наиболеесложных задач, решаемых при помощи ВЭЖХ. Растворители марки LiChrosolv®hypergrade высоко эффективны при обнаружении следовыхколичеств соединений на уровне мкг/л и могут использоваться как дляизократического разделения 6 ПАУ, так и разделения 16 ПАУ с применениемградиентного элюирования в соответствии с международными методами ЕРА 610(анализ питьевой воды) и 550 + бензо(а)пирен + перилен (анализ сточной воды).При использовании флуоресцентного детектирования с переключением длины волныдетектирования надёжность полученных результатов находится в сильнойзависимости от чистоты используемых растворителей.
Растворители марки LiChrosolv® квалификации hypergradeобеспечивают высокую степень надёжности ВЭЖХ анализов с применением техникиградиентного элюирования и последующим спектрофотометрическим илифлуоресцентным детектированием и устанавливают новый стандарт ввысокоэффективной жидкостной хроматографии.
Ацетонитрил LiChrosolv®hypergrade производится с применением современныхвысокоэффективных технологических процессов, высокочувствительные аналитическиеметоды используются для контроля его пригодности в методиках определенияпестицидов и ПАУ при помощи ВЭЖХ. Используемый нами в рамках контроля качестваметод тотальной флуориметрии демонстрирует значительно меньшую интенсивностьфлуоресценции ацето-нитрила в диапазоне длин волн 250 — 700 нм при диапазонедлин волн возбуждения 240 — 600 нм, чем у стандартных растворов хинина (1нг/мл;0.05М H2SO4) и ПАУ (1:100000;Ацетонитрил; NIST SRM 1647b)
Используемая методикаспектрофотометрии в ультрафиолетовом и видимом диапазонах спектра демонстрируетпрактически идеальные значения пропускаемости.
Классическая жидкостнаяхроматография (ЖХ) с масс-спектрометрическим (МС) детектированием сочетаетпреимущества хроматографического разделения и масс-спектрометрии: низкиепределы детектирования и возможность анализа молекулярных структур,достоверность которого зависит от чистоты используемых растворителей.Растворители LiChrosolv квалификации hypergradeобладают высокими значениями пропускаемости в ультрафиолетовой области спектра,обеспечивают стабильную базовую линию при градиентном элюировании, содержатмалые количества ионов металлов.
Физико-химические характеристикирастворителей LiChrosolv® hypergradeНазвание
Чистота
[%]
Сухой
остаток макс.
[мг/л] Вода макс. [%]
Кислотность
макс. [мэкв/г]
Щёлочность
макс. [мэкв/г] УФ-пропускаемость Ацетонитрил 99.9 1 0.01 0.0001 0.0002
191 нм(25%)
195 нм(85%)
200 нм(96%)
215 нм(98%)
230 нм(99%)
Пригодность для ЖХ/МС (Bruker esquire 3000 plus); ESI (+):
TIC (50 — 2000 m/z) Индивидуальные сигналы
Na
К
Метанол 99.9
0.01 0.0002 0.0002
210 нм(5%)
220 нм (60 %) 230 нм(75%) 260 нм(98%)
Информация для заказарастворителей LiChrosolv® hypergradeНазвание Каталожный номер Объём Ацетонитрил 1.00029.1000 1 л Ацетонитрил 1.00029.2500 2.5 л Ацетонитрил 1.00029.9010 10 л Ацетонитрил 1.00029.9030 30 л Метанол 1 л Метанол 1.06035.2500 2.5 л
Подвижные фазы для ВЭЖХ и ТСХ.
Информация для заказа готовыхсмесей LiChrosolv®Название Каталожный номер.
Содержание
ТФУ Объём Ацетонитрил + 0.1% об. ТФУ 4.80448.2500 4.80448.9030 4.80448.9185 0.095-0.105%
2.5л
30л
185л Вода + 0.1% об. ТФУ 4.80112.2500 4.80112.9030 4.80112.9185 0.095-0.105%
2.5л
30л
185л Ацетонитрил + Вода 80:20 4.80159.2500 2.5л
Разделение 16 ПАУ (ЕРА 610/550)+ бензо(а)пирен + перилен с детектированием по флуоресценцииКолонка LiChroCART® 250-4 LiChrospher® РАН, 5мкм Подвижная фаза
А: Ацетонитрил hypergrade LiChrosolv®
В: Вода LiChrosolv® Градиент
0 — 3 мин 60 % А
3 -15 мин 60 % А -100% А
15 — 50 мин 100 %А Расход 1.0 мл/мин Детектирование Программируемое флуоресцентное детектирование: Пик 1, 3, 4 5 6 7 8 9,10 11-15 16,17 18
Возб., нм
280
246
250
280
270
265
290
90
300
Эмисс.нм
330
370
406
450
390
380
430
410
500 Температура 20°С
/>
1) Чистая проба ацетонитрила LiChrosolv® hypergrade приопределении ПАУ в соответствии с методом ЕРА 610
/>
2) Хроматограмма: анализ 16 ПАУ(ЕРА 610/550) Программируемое флуоресцентное детектирование
Растворители дляпрепаративной хроматографии
Для облегчения процессамасштабирования при переходе от аналитического к препаративномухроматографическому разделению были специально разработаны растворители Prepsolv®, отвечающие особым требованиям препаративнойхроматографии. Их характерными особенностями являются предельно низкоеколичество сухого остатка после упаривания (
Физико-химические характеристикирастворителей Prepsolv®Название Чистота (ГХ) мин. (%) Сух. остаток макс.(мг/л) Вода макс. [%]
Кислотность
макс.[мэкв./г] Щёлочность макс.[мэкв./г]
УФ- Пропускаемость
50 % 98% Ацетонитрил 99.8 1 0.05 0.0005 0.0002 220 240 Метанол 99.8 1 0.05 0.0005 0.0002 225 265 2-пропанол 99.8 1 0.05 0.0005 0.0002 220 260
Информация для заказарастворителей Prepsolv®Название Каталожный Номер Объём Упаковка Ацетонитрил 1.13358.2500 1.13358.9030 1.13358.9185 1.13358.9910
2.5л
З0л 185л 1000л
стеклянная бутылка
сосуд одноразового использования из нержавеющей стали сосуд одноразового использования из нержавеющей стали 1000 литровый контейнер из нержавеющей стали Этилацетат 1.13353.9030 З0л сосуд одноразового использования из нержавеющей стали Гексан 1.04394.9030 З0л сосуд одноразового использования из нержавеющей стали Метанол 1.13351.2500 1.13351.9030 1.13351.9185
2.5л
З0л 185л
стеклянная бутылка
сосуд одноразового использования из нержавеющей стали сосуд одноразового использования из неожавеюшей стали 2-пропанол 1.13350.2500 2.5л стеклянная бутылка
Реагенты для аналитическойВЭЖХ LiChropur®
Ион-парные реагенты и солидля буферных растворов
Ион-парные реагенты — что это?
Это сильные гидрофобные ионы,которые образуют нейтральные ионные пары с молекулами образца, несущимипротивоположный заряд. Таким образом возможно одновременное разделениезаряженных и незаряженных молекул образца. Реактивы марки LiChropur®обладают высокой степенью УФ — пропускаемости™ даже при коротких длинах волн.
Какие колонки и подвижные фазыможно использовать с ион-парными реагентами?
Использоваться могут практическивсе типы неподвижных фаз; элюент должен содержать, по крайней мере, 10% воды, впротивном случае возникает опасность выпадения осадка (в особенности, еслиорганической составляющей элюента является ацетонитрил). При примененииион-парных реагентов с длинной углеродной цепью, таких как цетилтриметиламмониягидросульфат или натриевая соль додекансульфоновой кислоты, следуетиспользовать отдельную колонку, так как возможна необратимая адсорбция реагентана неподвижной фазе и, как следствие, изменение разделяющих свойств колонки.
Какие концентрации ион — парныхреагентов можно использовать?
Традиционно ион — парныереагенты с короткой углеродной цепью применяют в концентрации 5 х 10-3моль/л, а реагенты с длинной углеродной цепью — 5 х 10-4 моль/л.
Как приготавливать буферныерастворы?
Инструкции по приготовлениюбуферных растворов из реактивов марки LiChropur®прикладываются к упаковке (в зависимости от условий хроматографированияинструкции могут быть модифицированы).
Информация для заказа ион — парных реагентов для ВЭЖХ LiChropur®Название реагента Каталожный номер Материал упаковки Количество 1-бутансульфоновой кислоты натриевая соль 1.18303.0025 Стекло 25г 1-пентансульфоновой кислоты натриевая соль 1.18304.0025 Стекло 25г 1-гексансульфоновой кислоты натриевая соль 1.18305.0025 Стекло 25г 1-гептансульфоновой кислоты натриевая соль 1.18306.0025 Стекло 25г 1-октансульфоновой кислоты натриевая соль 1.18307.0025 Стекло 25г 1-додекансульфоновой кислоты натриевая соль 1.18308.0025 Стекло 25г 1-додецилгидросульфат натрия 1.18309.0024 Стекло 25г Тетраметиламмония гидросульфат 1.18310.0025 Стекло 25г Тетрабутиламмония гидросульфат 1.18312.0025 Стекло 25г Цетилтриметиламмония гидросульфат 1.18313.0025 Стекло 25г
Соли для буферных растворов
Реактивы для приготовлениябуферных растворов LiChropur® были созданы дляиспользования в аналитической ВЭЖХ и характеризуются высокой степенью УФ — пропускаемости.
Информация для заказа солей длябуферных растворов LiChropur®Название Каталожный номер Упаковка Количество Гидрофосфат калия тригидрат 1.19754.0250 Стекло 250г Гидрофосфат натрия дигидрат 1.19753.0250 Стекло 250г
Подготовка пробы EXtrelut® NT
Наиболее эффективная формажидкостной экстракции
Колонки EXtrelut®NT упрощают процесс жидкостной экстракции и позволяютизбежать использования делительной воронки. Данный метод отличается гораздоболее высокой эффективностью, а также низкими затратами растворителей,реактивов и времени.
Классическая экстракция сиспользованием делительной воронки связана с рядом неудобств: образованиемэмульсии, плохим разделением фаз, высоким потреблением растворителей, низкойстепенью автоматизации.
Жидкостная экстракция сиспользованием колонок EXtrelut® NTлишена этих недостатков. Простой одностадийный метод исключает образованиеэмульсии и, как следствие, приводит к получению более чистых экстрактов с болеевысокими выходами целевых веществ.
Ёмкость наполненных сорбентомколонок EXtrelut® NT для водныхобразцов приведена в полном названии, т.е. EXtrelut® NT1: максимальный объём наносимой водной пробы составляет1мл, EXtrelut® NT3: 3мл и EXtrelut® NT20: до 20мл пробы.
Пробы значительно меньшихобъёмов следует разбавить. При нанесении больших объёмов существует опасностьперегрузки колонки и попадания воды в органический растворитель. Элюированиепроводят объёмом растворителя, в 2-3 раза превышающим объём нанесённогообразца. Проба и элюирующий растворитель могут наноситься на колонку при помощивакуумирующих устройств или самотёком. Специальный наконечник колонкирегулирует поток жидкости соответствующим образом.
В зависимости от требованийметодики можно применять три различных вида колонок:
/>
Диатомит для EXtrelut®NT
Характеристики сорбентов EXtrelut® NTХарактеристики: Специально обработанный широкопористый кизельгур с большим объёмом пор; химически инертный: продукт природного происхождения Максимальный объём наносимой водной пробы: 1мл (EXtrelut® NT1), 3мл (EXtrelut® NT3) и 20мл (EXtrelut® NT20) без проскока диапазон рН: рН 1-13 Неизменное качество от партии к партии
EXtrelut® NT1,EXtrelut® NT3 и EXtrelut® NT20 доступнытакже в формате стеклянных колонок. Использование данного формата целесообразнопри необходимости получения высокочистых экстрактов для последующих анализов.Наполнитель колонки зафиксирован между двумя чистыми бумажными фильтрами.
EXtrelut®NT20 существует в виде специальной полиэтиленовойколонки, исключающей возможность загрязнения пробы, характерного прииспользовании обычных полимерных материалов. Вышесказанное также относится киспользуемым в колонках специальному, не проявляющему адгезии, стекловолокну ибумажным фильтрам.
Информация для заказа готовыхколонок EXtrelut® NTНазвание Каталожный номер. Количество в упаковке EXtrelut® NT1 стеклянные колонки для 0.1 — 1мл раствора пробы 1.15094.0001 100 колонок EXtrelut® NT3 стеклянные колонки для 1 — Змл раствора пробы 1.15095.0001 50 колонок EXtrelut® NT 20 полиэтиленовые колонки, содержащие специальные наконечники, для проб объёмом до 20мл 1.15096.0001 25 колонок
Наборы EXtrelut® NT для повторногозаполнения колонок
Наборы EXtrelut®NT для повторного заполнения колонок обладают такой жесорбционной ёмкостью (г водного образца/г наполнителя EXtrelut®NT) как и стандартная колонка EXtrelut®NT, но чуть большим весом. Количество наполнителярассчитано таким образом, чтобы абсорбировать как минимум 20мл (+10 % запас)водной пробы. Таким образом на одну колонку EXtrelut®NT20 будет полностью израсходован один набор. Индивидуальныенаборы допускается опустошать полностью без остатка. Наборы для повторногозаполнения колонок также содержат стекловолокно (24мм) и чистые бумажныефильтры (10мм) для колонок EXtrelut® NT20.
Также доступен наполнитель дляколонок EXtrelut® NT вупаковках весом 1кг. В этом случае следует сначала установить абсорбционнуюёмкость наполнителя при помощи предварительного тестирования соответствующейпартии. Наполнитель в упаковках весом 1кг является идеальным решением принеобходимости использования колонок с большим объёмом.
Сорбенты EXtrelut® NT
Название Каталожный номер. Количество в одной упаковке Наполнитель для колонок EXtrelut® NT с большим объёмом 1.15092.1000 1кг Набор для повторного заполнения 50 колонок EXtrelut® NT20 (включает запасные бумажные фильтры) 1.15093.0001 50 пакетов
Комплектующие к колонкам EXtrelut® NTНазвание Каталожный номер Количество в упаковке Наконечники для колонок EXtrelut® NT 0.60/30 с переходником типа Луер для колонок EXtrelut® NT1 и NT3 1.15373.0001 100 штук Пробирки для сбора элюата EXtrelut® NT с коническим дном и завинчивающейся крышкой (стандартный объём 15мл) для колонок EXtrelut® NT1 и NT3 1.15622.0001 30 штук Вставки под виалы для автосамплера для карусели EXtrelut®NT 1.10441.0001 5 штук Запасные фильтры для EXtrelut® NT1 (10 мм) 1.14236.0001 100 штук Запасные фильтры для EXtrelut® NT3 (15 мм) 1.14237.0001 100 штук Запасные фильтры для EXtrelut® NT20 (24 мм) 1.14567.0001 50 штук
EXtrelut® NT:принцип работы
Водная проба наносится насорбент EXtrelut® NT,распределяясь в виде тонкой плёнки на поверхности химически инертной матрицы ивыполняя функции своего рода неподвижной фазы. Затем осуществляется элюированиенесмешивающимися с водой органическими растворителями, такими как диэтиловыйэфир, этилацетат или галогенсодер-жащие углеводороды. Все липофильные веществаэкстрагируются из водной фазы в органическую. В течении всего процесса воднаяфаза остаётся неподвижной. Элюат не содержит эмульсий и может быть подверженупариванию для последующего анализа.
Важные параметры экстракцииколонок EXtrelut® NTВид колонки EXtrelut NT® Размеры наконечника Максимальный объём пробы 2) (мл) Время экстракции 3) (перед элюированием) (мин) Рекомендуемый объём элюирования 4) (мл) EXtrelut® NT 1 0.60 x 30мм 1 5-10 6 EXtrelut® NT 3 0.60 x 30мм 3 5-10 15 EXtrelut® NT 20 1) 0.70 х 30мм 20 10-15 40
1) При использовании колонок EXtrelut® NT 20 времена элюированиялежат в диапазоне 5 — 20 мин в зависимости от типа водного раствора, значениярН и органического растворителя. При использовании 40мл элюирующегорастворителя объём элюата составляет 25 мл. Мёртвый объём колонки составляет 15мл. При наличии большого количества гидрофильных веществ в пробе допускаетсяпомутнение элюата. Подобное помутнение не препятствует последующей стадии упаривания(концентрирования).
2) Для предотвращения проскокаводы не перегружайте колонку.
3) Более короткие времена могутсказаться негативно на выходе целевых веществ.
4) Приведены оптимальныезначения, установленные опытным путём. Растворы меньших объёмов следуетразбавлять до получения рекомендуемых значений.
Пример использования колонок EXtrelut® NT
Колонки EXtrelut®NT уже на протяжении долгого времени используются дляподготовки проб мочи, крови, плазмы, сыворотки, желудочного сока, кала,животных и растительных тканей, спиртных напитков. Существует множество другихприменений в области анализа следовых количеств веществ в объектах окружающейсреды, например анализ промышленных, питьевых или сточных вод. С помощьюданного метода возможно также фракционирование кислотных и основных веществ,например лекарственных средств и их метаболитов в биологических жидкостях.
Определениепротивоэпилептических лекарственных средств в сыворотке человеческой крови
/>
*= 17.6 г NaH2PO4,4,5 г Na2HP04 2 H20,1.5г NaN3, растворить в 1 литре воды (рН 6,0 — 6,1)
ВЭЖХ разделение после подготовкипробы с помощью EXtrelut® NT1
/>
Выходы (средние значения для 3опытов)