Приложение к дипломной работе: «Практикум по биохимии для 10 класса». 1. Восстанавливающие свойства моно- и дисахаридов (видео № 1). 1 Цель: ознакомиться с методикой постановки качественных реакций.Оборудование: штатив с пробирками (4 пробирки, водяная баня.Реактивы: 1-%ый раствор глюкозы, 2 -%ый раствор сахарозы, 10 -%ый раствор NaOH, 5 - %ый раствор CuSO4. В основе цветных и качественных реакций, позволяющих отличить отдельные группы углеводородов друг от друга , лежат реакции дегидратации и окисления. Моносахариды и дисахариды, имеющие свободную альдегидную или кетонную группу, восстанавливают CuO и Cu2O, что сопровождается появлением осадка красного цвета. При этом углеводороды окисляются до соответствующих кислот, например:С6Н12О6Глюкоза + СuO = C6H12O7глюконовая кислота + Сu2OГлюконовая кислотаДисахариды, не имеющие свободных альдегидных групп, восстанавливающей способностью не обладают. ^ Ход работы. В три пробирки вносят по 3 – 4 мл раствора глюкозы, сахарозы, добавляют по 1 - 2 мл раствора NaOH и по каплям вносят в раствор СuSO4. Все растворы окрашиваются в синий цвет. Пробирки ставят на водяную баню, наблюдают появление красного осадка в пробирке с глюкозой – углеводами, имеющими свободную альдегидную группу. В пробирке с сахарозой такой осадок не образуется. ^ 2. Ферментативный гидролиз крахмала (видео № 2).2 Реактивы: лед, крахмальный клейстер, йод или раствор Люголя, 5%ый раствор сульфата меди (II), 10%ый раствор гидроксида натрия.^ Ход работы.В качестве фермента, гидролизующего крахмал на составные части (мальтозу и глюкозу), выступает амилаза слюны. Приготовление раствора слюны. Тщательно прополощите рот водой. Наберите 2-4мл слюны в мерный цилиндр, добавьте в цилиндр воды до объема 10мл. Этот раствор содержит фермент амилазу. Результаты опытов оценивают с помощью цветных реакций: йодокрахмальной и реакции Троммера (Восстановление сине – голубого гидроксида меди(II) до кирпично - красного оксида меди(I)). Негидролизованный крахмал дает положительную реакцию с йодом (синие окрашивание) и отрицательную реакцию Троммера. Соответственно продукты гидролиза крахмала не дают реакции с йодом, но дают положительную реакцию Троммера. В две пробирки наливают по 10 капель крахмального клейстера. В одну из них (пробирка №1) внесите 4 капли воды (контроль) а в другую (пробирка №2) 4 капли раствора слюны). Перемешайте и поставьте пробирки на водяную баню на 15 мин. Затем из пробирки №1 возьмите 4 капли исследуемого вещества, которые внесите в две разные пробирки. В одну из них добавьте каплю йода. В другую добавьте 1 каплю раствора сульфата меди (II) и 4 капли гидроксида натрия и осторожно нагрейте до кипения (реакция Троммера). Результат должен показать, что в присутствии воды гидролиз крахмала не происходит, поэтому реакция с Йодом положительна, а реакция Троммера отрицательна. В присутствии амилазы слюны происходит гидролиз крахмала, поэтому реакция с йодом отрицательна, а реакция Троммера положительна. 3. Действие аммиачного раствора оксида серебра на глюкозу (видео № 3).3 Оборудование: штатив с пробирками, водяная баня.Реактивы: аммиачный раствор оксида серебра, раствор глюкозы.^ Ход работы. В пробирку, содержащую 1-2 мл раствора глюкозы, прилейте 1-2 мл аммиачного раствора оксида серебра. Затем, нагрейте пробирку на кипящей водяной бане. Происходит реакция серебряного зеркала.Вопросы: Какая форма глюкозы вступает в реакцию серебряного зеркала? ^ 4. Действие аммиачного раствора оксида серебра на сахарозу (видео № 4) . Оборудование: штатив с пробирками, спиртовка, водяная баня.Реактивы: раствор сахарозы, раствор оксида серебра, серная кислота, гидроксид натрия.^ Ход работы. 1. В пробирку, содержащую 1 – 2 мл раствора сахарозы, прилить 1 – 2 мл аммиачного раствора оксида серебра и нагреть пробирку на кипящей водяной бане. (Сахароза не даст реакцию серебряного зеркала). 2. В пробирку, содержащую 1 – 2 мл раствора сахарозы, добавьте 0.5 мл разбавленной серной кислоты и нагреть на кипящей водяной бане в течении 5 -10 мин. Затем добавить в пробирку раствор щелочи (проба на лакмус). К полученному раствору добавить раствор оксида серебра и нагреть пробирку на кипящей водяной бане. (Реакция серебряного зеркала). Вопросы. Почему сахароза не дает реакцию серебряного зеркала? Какие процессы происходят с сахарозой при нагревании ее раствора с кислотой? 5. Действие гидроксида меди(II) на глюкозу (видео № 5) . Оборудование: штатив с пробирками , штатив, спиртовка.Реактивы: раствор глюкозы, гидроксид натрия, раствор медного купороса, вода.^ Ход работы. В пробирку прилейте 1 мл раствора глюкозы и 2 мл раствора гидроксида натрия. К полученной смеси добавить 1мл раствора медного купороса.К полученному раствору добавить 1 мл воды и нагреть на пламени спиртовки пробирку, предварительно закрепив ее наклонно так, чтобы нагревалась только верхняя часть раствора. Прекратить нагревание, как только начнется изменение цвета (с синего цвета – на оранжево – желтый). Вопросы. 1. Почему образовавшийся в начале осадок гидроксида меди (II) растворяется с образованием прозрачного синего раствора? Наличием каких функциональных групп обусловлена эта реакция? 2. Почему при нагревании происходит изменение цвета реакционной смеси с синего на оранжево - желтый? Что представляет собой желто – красный осадок? Белки. Цветные и качественные реакции на аминокислоты и белки (видео № 6).4 Цель: ознакомиться с методикой постановки качественных реакций на аминокислоты и белки. Оборудование: Штатив с пробирками, спиртовка. Реактивы. Раствор куриного белка, 10%ый раствор NaOH, 1%ый раствор СuSO4, HNO3( конц.). Биуретовая реакция на белки. ^ Ход работы. Вещества, содержащие не менее двух пептидных связей, образуют в щелочной среде с ионами меди комплексы, окрашенные в сине – фиолетовый цвет. В пробирки наливают 1мл раствора белка, прибавляют 1мл 10%го раствор NaOH и несколько капель 1%го раствора СuSO4. Происходит изменение окраски. ^ Ксантопротеиновая реакция.Ход работы. Белки, содержащие бензольное или индольное кольцо, нитрируются концентрированной азотной кислотой с образованием нитросоединений желтого цвета. В пробирку наливают 1мл раствора белка и прибавляют 5 капель концентрированной HNO3. Появляется осадок денатурированного белка. Нагревают пробирку на спиртовке и отмечают цвет осадка. При добавлении 10%ого раствора NaOH окраска переходит в оранжевую. Липиды. Растворимость жиров (видео № 7). Оборудование: штатив с пробирками (3 пробирки), спиртовка, спички, держатель для пробирок, фильтровальная бумага.Реактивы: подсолнечное масло, вода, бензин, спирт. В 3 пробирки наливают по 2 мл воды, бензина и спирта и приливают в каждую из пробирок по 1 мл масла, затем встряхивают пробирки. Что наблюдается?Пробирки, где растворение идет плохо, нагреть на спиртовке. Что происходит?Нанесите несколько капель раствора масла в бензине на фильтровальную бумагу. Что происходит? 1 Биологическая химия 10 – 11 классы. Я.С.Шапиро. 2 Практикум для учащихся 10 – 11 классов по биологии «Профильный уровень» Г.М.Дымшиц, О.В. Саблина. 3 Химия 10, О.С. Габриелян. 4 Биологическая химия 10 – 11 классы. Я.С.Шапиро.