Микромицеты воздуха жилых и нежилых помещений

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ, МОЛОДЕЖИ И СПОРТА ХАРЬКОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени В.Н. КАРАЗИНА Биологический факультет Кафедра физиологии и биохимии растений Микромицеты воздуха жилых и нежилых помещений Допущена к защите « » 2011 г. Дипломная работа Заведующий кафедрой Студентки 5-го курса заочного отделения биологического факультета

Оценка « » Научный руководитель: Председатель ГЭК Доцент Винникова О.И. « » 2011 г. Харьков 2011 АНОТАЦІЯ Робота викладена на 72 сторінках машинописного тексту. Містить 6 таблиць, 6 малюнків, 1 застосування, 61 джерел літератури. Ключові слова мікроміцети, мікрофлора, алергія. Робота присвячена вивченню і аналізу повітряної мікофлори житлових і нежитлових приміщень міста

Харкова. Визначений видовий склад повітряної мікофлори досліджених приміщень. Визначена доля алергенних і умовно алергенних видів микромицетов серед усіх виділених. Виявлені найбільш види микромицетов повітряної мікрофлори приміщень, що часто зустрічаються. Оглавление Введение 1. Обзор литературы 1. Микрофлора воздуха 1. Микромицеты домашней пыли 2. Микромицеты нежилых помещений 2.Группы микотических болезней 18 1.3.

Характеристика заболеваний, вызванных почвенными микромицетами 4. Аллергии, индуцирование микромицетами 5. Краткая характеристика микромицетов, споры, которых обнаружены в воздушной среде 2. Материалы и методы 3. Результаты и обсуждения 4. Характеристика основных источников опасности и угрозы здоровью в лабораториях микробиологического профиля 52 Выводы 60 Приложение А 61 Список использованной литературы 70

ВВЕДЕНИЕ Известно, что присутствие плесневых грибов и их метаболитов в окружающей человека среде может оказывать токсическое действие, способствовать развитию микозов, а также провоцировать развитие аллергических реакций. Кроме того, существует группа заболеваний, объединяемых под общим названием «синдром больных зданий» (sick building syndrome), которыми страдают люди, длительное время находящиеся в «неблагополучных» помещениях, в том числе пораженных плесневыми грибами [3,13].

Многочисленные исследования [13] свидетельствуют о постоянном увеличении числа аллергических заболеваний, включая рост микогенной сенсибилизации. Мнения разных исследователей о роли и степени участия грибов в развитии аллергических заболеваний неоднозначны. Однако, доказано, что грибы являются фактором риска развития сенсибилизации у лиц с генетической предрасположенностью к атопии. По данным разных авторов [13], от 6 до 15% всего населения и от 2 до 30% аллергических больных

сенсибилизированы к микромицетам. Спектр ведущих аллергенов плесневых грибов в разных климатогеографических регионах различен, что напрямую связано с особенностями микобиоты конкретного региона. Несмотря на то, что интерес к плесневым грибам как «климатическим аллергенам» возник в начале XX века, многие проблемы диагностики, лечения и профилактики аллергии на плесневые грибы еще не изучены. Решение этих вопросов требует знания видового состава, биологии и экологии грибов, непосредственно

окружающих человека. Контакт людей с микромицетами происходит постоянно. [17] В настоящее время особенно остро стоит проблема изучения микобиоты различных помещений, в том числе и жилых, где население современных городов проводит значительную часть времени. В первую очередь, это касается детей, поскольку известно, что контакт организма ребенка в первые годы жизни с микогенными аллергенами является решающим фактором для развития сенсибилизации к ним в дальнейшем.

Исследование микобиоты жилых помещений позволит установить закономерности ее формирования и особенности структурной организации, что непосредственно отражается на структуре экспозиции микогенных аллергенов и особенностях сенсибилизации жителей города. В связи с этим целью нашего исследования было изучение микофлоры воздуха жилых и нежилых помещений. Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи: 1. Определить видовой состав микромицетов жилых и нежилых помещений.

2. Выявить процент аллергенных и условно-патогенных видов среди выделенных грибов. 3. Определить зависимость видового состава микофлоры воздуха от условий микроклимата помещений.   Обзор литературы Грибковые инфекции являются важной проблемой клинической медицины. Из потенциальных «болезней будущего» микозы превратились в актуальные «болезни настоящего». Возбудители микозов многочисленны и вызываемые ими заболевания человека и животных весьма разнообразны.

Известное количество видов микроскопических грибов (микромицетов) уже достигает 200 000, ежегодно описывается до 1500 новых видов [3]. Реальное значение для клиницистов в настоящее время имеют около 100 видов грибов. Известно несколько классификаций микромицетов. В основу одной из классификаций положен способ их размножения. Истинные грибы - эумицеты, по Kwon-Chung, подразделяют на 4 класса [8]: • Chytridiomycota (хитридиомицеты), • Zygomycota (зигомицеты), •

Ascomycota (филаментирующие и дрожжевые аскомицеты), • Basidiomycota (базидиомицеты). Хитридиомицеты и зигомицеты относятся к низшим грибам. Хитридиомицеты не патогенны для человека и животных. Среди зигомицетов следует выделить возбудителей микозов у человека – виды родов Mucor, Rhizopus, Absidia, Basidiobolus. К классу аскомицетов относят возбудителей большинства важнейших

микозов: кандидоза, дерматофитозов, гистоплазмоза, бластомикозов, некоторых мицетом. К классу базидиомицетов относятся такие возбудители, как Cryptococcus neoformans, Malassezia spp Trichosporon spp Rhodotorula spp Schizophyllum commune (к базидиальным грибам относятся также микромицеты – шляпочные грибы). Таблица 1. Представители микофлоры, потенциально опасные для человека (по

Марфенина О.Е. и др 1996; Аравийский Р.А. и др 2002) Зачиняева А.В. и др 2003). Отдел Ascomycota Zygomycota Alternaria Nees Aspergillus Link Aureobasidium Viala& G. Boyer Botrytis P. Micheli ex Pers. Candida Berkhout Cladosporium Link Curvularia Boedijn Fusarium Link

Helminthosporium Link Penicillium Link Pityrosporum Sabour Stemphylium Wallr Trichoderma Pers. Mucor Fresen. Rhizopus Ehrenb. По морфологическим признакам микромицеты делятся на дрожжевые и мицелиальные [15]. Дрожжевые грибы состоят из отдельных клеток, которые размножаются бесполым путем — делением или почкованием. Мицелиальные гри¬бы относятся к многоклеточным организмам и представляют собой сеть ветвящихся нитей

— гиф, которые могут образо¬вывать споры. Плесень — это расположенные на поверхности пи¬тательного субстрата органы размножения гри¬бов. Она состоит из переплетенных гиф и спор и пред¬ставляет собой аморфную массу, которая может иметь раз¬ную окраску, форму и консистенцию [2]. Грибы занимают на Земле одно из важнейших мест. Одни из них являются космополитами (Aureobasidium pullulans, многие аспергиллы, пенициллы), другие — эндемиками (Coccidioides immitis и др.).

Они фактически освоили самые различные среды в биосфере, составной частью которой является и человек, находящийся в «окружении грибов», а в некоторых случаях микромицеты вступили (или вступают) с ним во взаимодействие. Одни виды стали нормальными обитателями тела человека, другие - при определённых обстоятельствах - вызывают соответствующие заболевания — микозы, и, наконец, третьи способны сенсибилизировать макроорганизм и индуцировать аллергические состояния — микоаллергозы [5].

Споры (конидии) являются теми грибными структурами, которые, как правило, ответственны за микогенную сенсибилизацию и могут индуцировать развитие микоаллергии . Грибы достаточно хорошо приспособлены к синтрофии с другими организмами и, как правило, обитают в ассоциациях с бактериями, грибами иных видов и родов, а также с более высоко организованными существами, например, из отдела Metazoa, тип Annelida (кольчатые черви) [7].

Плесневые грибы (Приложение А) могут расти практически повсюду. Специфические разновидности и концентрации, представленные в воздухе в различное время зависят от температуры, степени осаждения, преобладания ветров, сезонных климатических факторов, циклических изменений факторов солнечного света и темноты и атмосферной влажности [15]. Способность плесневых грибов быстро занимать и населять подходящие экологические ниши в закрытых помещениях

и на открытом воздухе, продуцировать и рассеивать огромные массы спор, возможно, объясняет их эволюционный успех в природе и их роль как источника аллергии [3]. Грибы растут, умирают и распадаются, и люди почти всегда подвержены различным концентрациям частиц плесневых грибов дома, на работе или на открытом воздухе, который может завершиться сенсибилизацией атопических лиц. Жизнедеятельность грибов в различных условиях зависит также от освещённости [3].

Грибы менее чувствительны к ультрафиолетовому облучению, чем бактерии, однако механизм губительного действия ультрафиолетового облучения при этом остаётся тем же, то есть под его влиянием имеют место спаривания тиминовых остатков в ДНК и свободно-радикальные процессы. Следовательно, увеличение продолжительности действия ультрафиолетового облучения повысит число погибших клеток грибов. Рассеянный солнечный свет менее губителен для микромицетов, чем прямые солнечные лучи.

Однако, отношение разных видов грибов к освещённости не однотипно. Например [3], отдельные представители зигомицетов и аскомицетов обладают положительным фото(гелио)тропизмом (Mucor sp Phycomyces sp Sordaria sp.), отрицательный фото(гелио)тропизм наблюдается у прорастающих уредоспор ржавчинных грибов. Из-за отсутствия хлорофилла большинство микромицетов хорошо развивается в темноте, хотя в период спорообразования возрастание освещённости оказывает благоприятное влияние.

1.1. Микрофлора воздуха Постоянная микрофлора атмосферного воздуха формируется, как правило, почвенными микроорганизмами. Более или менее регулярно в её состав входят Micrococcus roseus, M. flavus, M. candicam, Sarcina flava, S. alba, S. rosea, Bacillus subtills, B. mycoides, B. mesentericus, виды Actinomyces, грибы родов Penicillium,

Aspergillus, Mucor и др. [1]. Временная микрофлора атмосферного воздуха также формируется за счёт микроорганизмов почвы и видов, поступающих с поверхности водоёмов. Находящиеся в атмосферном воздухе микроорганизмы подвергаются солнечному и температурному воздействию, атмосферным осадкам и ветру. Поэтому микрофлора воздуха весьма динамична, непрерывно меняется и обновляется [11]. Контаминация воздуха патогенными микроорганизмами происходит капельным путём; микробы содержатся

в составе аэрозоля, образующегося при разговоре, кашле, чиханьи. Кроме того, микроорганизмы попадают в воздух со слущивающимся эпителием кожных покровов, пылью из загрязнённого постельного белья и заражённой почвы [8]. Аэрозоль — коллоидная система, состоящая из воздуха, капелек жидкости или твёрдых частиц, и включающая различные микроорганизмы. Размер аэрозольных частиц варьирует от 10 до 2000 нм.

При чихании может образовываться до 40 000 капель. В зависимости от размера частиц, электрического заряда, скорости движения в воздухе различают капельную и пылевую фазы аэрозоля, а также капельные ядрышки [8]. Пылевая фаза — крупные, быстро оседающие частицы, в результате, образующие пыль, способную подниматься в воздух [8]. Капельные ядрышки — мелкие капельки аэрозоля (до 100 нм); высыхая, остаются в воздухе

во взвешенном состоянии и образуют устойчивую аэродисперсную систему. В них частично сохраняется влага, поддерживающая жизнеспособность микроорганизмов. Последние в составе капельных ядрышек могут переноситься на значительные расстояния [8]. Воздух — среда, не поддерживающая размножение микроорганизмов; это определяется отсутствием питательных веществ и недостатком влаги. Кроме того, в воздухе более выражено микробицидное действие солнечных лучей

УФ-спектра. Жизнеспособность микроорганизмов в воздухе обеспечивают взвешенные частицы воды, слизи, пыли и фрагментов почвы. Атмосферный воздух и воздух закрытых помещений значительно различаются по количественному и качественному составу микрофлоры. Бактериальная обсеменённость жилых помещений всегда выше, чем атмосферного воздуха; это справедливо и в отношении патогенных микроорганизмов, попадающих в воздух от больных людей, животных и бактерионосителей [12]. Микрофлору воздуха условно разделяют [12] на резидентную (постоянно

обнаруживаемую) и временную (обнаруживают спорадически). Наибольшее количество микробов содержится в околоземных слоях атмосферы. По мере удаления от земной поверхности воздух становится чище. При чиханье, кашле, разговоре из верхних дыхательных путей человека в воздух выкидывается множество капель слизи с эпителиальными клетками и микроорганизмами.

Взвешенные в воздухе капли образовывают стойкий микробный аэрозоль, мелкодисперсные фракции которых способны проникать даже в средние и нижние отделы респираторного тракта человека. Воздушно-капельным путем происходит передача возбудителей респираторных инфекций - гриппу и коре, туберкулеза, коклюша, дифтерии, краснухи, паротита. Микробный аэрозоль может стать причиной развития аллергических заболеваний, особенно при наличии в воздухе плесневых грибов и микромицетов [9].

Разработаны критерии оценки микробиологического состояния воздуха запертых помещений [13]: а) Общее микробное число (ЗМЧ) – количество бактерий в перерасчете на 1м3 воздуха, которые выросли при посеве на поверхность питательного агара. Посевы инкубируют поры при 370С, потом еще поры при температуре ~200С. б) Индекс санитарно-показательных бактерий - количество в перерасчете на 1м3 воздух условно-патогенных микробов дыхательных путей – гемолитических стрептококков, золотистого стафилококка, грамотрицательных

бактерий, дрожжеподобных и плесневых грибов. Большое значение для профилактики гнойных осложнений имеет микробная и микромицетная чистота воздуха в таких местах, как, например, операционные помещения, для которых общее микробное число в 1м3 воздух не должно преувеличивать в операционной 500 [10]. Грибы, являющиеся основными “поставщиками” спор во внешнюю среду, находятся в воздухе изолированно или на частицах растительного и животного происхождения в виде так называемого биоаэрозоля [10].

Число и типы, присутствующих в наружном воздухе микромицетов, зависят от погоды, времени суток, сезонов года, географического места и близости локализации спорообразующих грибов. Общее число спор колеблется от 200 до 2 млн/м3. Для спор характерна циркадная (суточная) периодичность их появления в составе биоаэрозоля. Споры, активно освобождающиеся от (из) спороносных структур при участии воды, обычно более многочисленны в воздухе ночью во время образования росы или дождя; споры,

зависимые от высушивания, более многочисленны ранним утром во время освобождения листвы растений от влаги при солнечной инсоляции. Споры Cladosporium spp. [13] относят к самым распространённым в мире в дневное время, хотя в тёплом сухом климате могут преобладать зародышевые клетки Alternaria sp или, при влажном климате, Curvularia или Drechslera. В пустынных тёплых регионах биоаэрозоль может включать споры патогенных грибов (Coccidioides

immitis, Histoplasma capsulatum) [10,13]. В отличие от спор, находящихся в слизи, репродуктивные клетки многих грибов отделяют прямым дуновением или движением воздуха. Такое сухое рассеивание спор увеличивается в зависимости от скорости воздушных потоков и уменьшается во время дождей, часто достигая пика в солнечный полдень. В это время количество спор грибов Cladosporium, Alternaria,

Epicoccum и Helminthosporium, также как и ржавчинных, головневых грибов и некоторый оомицетов, в атмосферном воздухе значительно возрастает. Сухая дисперсия спор также замечена у Rhizopus, Aspergillus и Penicillium, хотя пиковые уровни их были более низкими. Как переносимые воздухом, на количество спор влияют те же дисперсионные и самоочистительные атмосферные процессы, которые относятся и к пыльце растений. Ассоциации, складывающиеся между микроорганизмами в

природе, называют микробиоценозами, а микробов с растениями и животными именуют биоценозами. Многие исследователи подчеркивают [15], что растительность существенно влияет на содержание спор в отдельных местностях. Вообще, пастбища и поля с зерновыми культурами являются особенно значимыми источники спор Alternaria, Cladosporium, Helminthosporium и Epicoccum. Высокие местные уровни спор ржавчинных и головневых грибов, также как

Ophiobolus и Gibberella, могут быть результатом зараженныя ими зерновых культур. В лесах, черные дейтеромицеты, ржавчинные и головневые грибы встречаются в меньшем количестве, но часто изобилуют споры базидиомицетов, обитающих на гниющей древесине (например, Ganoderma spp.). Точно так же во фруктовых садах осенью может подниматься уровень в воздухе дрожжеподобных грибов и сезонных паразитов типа Venturia inequalis, от которых фрукты свободны весной [11].

1.1.1. Микромицеты жилых помещений Видовой состав и содержание спор грибов внутри жилых и промышленных помещений несколько отличается от таковых в атмосфере [1]. В пробах домашней пыли и воздуха жилых помещений чаще выделяют грибы Aspergillus, Penicillium, Alternaria, Mucor, Candida, Aureobasidium, Cladosporium. На видовой состав и количество спор в воздухе влияет характер жилища или

промышленного предприятия. Споры грибов, растущих внутри помещений, например, Aspergillus и Penicillium, имеют более высокий уровень содержания в воздухе осенью и зимой. В настоящее время нет каких-либо общепринятых нормативов содержания грибов в воздушной среде жилых помещений [4]. Некоторые специалисты условной нормой считают содержание спор в воздухе жилых помещений до 500 спор в м3. В воздухе жилых помещений число и характер спор определяются их продуцентами, обитающими,

например, на сохраняемых продуктах, степенью дезорганизации этих продуктов; наличием, структурой и расположением вентиляционных систем. Концентрация спор в таком воздухе может превышать 100 млн/м3, когда заплесневелые сено и зерно дают, например, домашним животным. Здесь преобладают грибы из родов Aspergillus и Penicillium, равно как и условный патоген — Aspergillus fumigatus, выступающий нередкой причиной астмы и микотаческих абортов у рогатого скота.

Концентрация базидиоспор так называемого “устричного гриба” Pleurotus ostreatus может достигать 27млн/м3 в кормушечных садках, и до 14млн. спор Penicillium sp. освобождается при соприкосновении руками до заплесневелой пробки. Такие концентрации спор могут индуцировать профессиональные аллергии. По данным исследований Соболева А.В Васильевой Н.В. [15,16], в

Cанкт-Петербурге и Ленинградской области основными контаминантами жилых помещений являлись грибы рода Penicillium (64%), Aspergillus (48%), Cladosporium (20%). Реже - Rhizopus (12%) и Alternaria (12%). Разброс концентраций спор грибов в исследуемом воздухе составил от 100 до 10 спор/м3. Наиболее высокое содержание спор грибов выявлено на первых этажах зданий [16]. При аллергообследовании лиц, проживающих в обследованных помещениях, отмечена повышенная чувствительность

к грибам родов Penicillium (37%), Aspergillus (15%), Аlternaria (18%), Rhizopus (7%) [15]. Многие микромицеты, развивающиеся на различных материалах и изделиях из них, на составных элементах разных конструкций и сооружений, оказываются заведомо вредными для людей [18]. К ним относят отдельных представителей из родов Aspergillus, Cladosporium, Epicoccum, Fusarium, Myrothecium,

Paecilomyces, Penicillium, Stachybotrys и многих других. Первоначально сапротрофные они или продукты их обмена могут вызывать патологические процессы, например, инвазивный аспергиллёз, индуцируемый Aspergillus fumigatus; первичный рак печени, вызываемый афлатоксином (продуцент — А. fiavus) и т.д. Подобные микромицеты могут быть причиной аллергических состояний (риниты, бронхиальная астма) у лиц, вдыхающих загрязнённый спорами воздух.

Неинвазивно обитающие в параназальных полостях некоторые грибы способны провоцировать аллергические грибковые синуситы. Первичными этиологическими агентами при этом называются тёмноокрашенные виды из родов Alternaria, Bipolaris, Cladosporium, Curvularia, Nodulosporium, а также Aspergillus, Chrysosporium, Fusarium, Mucor [5]. Как видно из вышеприведенного, ареал грибов, теоретически способных вызывать заболевания

человека или сенсибилизировать его, чрезвычайно велик [15]. Так, в обзоре 1985 года в 6 странах Европы, обнаружение грибковых спор было следующее: Cladosporium, Ascomycetes, Sporobolomyces, Basidiomycetes, Aspergillus и Penicillium, дрожжеподобные грибы, Ustilago (паразитарные грибы на растениях), Alternaria. В компиляции исследований, выполненных главным образом в

Соединенных Штатах, а также в Таиланде, Индии и Австралии Noble J.A Crow S.A Ahearn D.G. and Kuhu F.A [15] распределение было следующим: Cladosporium, Penicillium, дрожжеподобные грибы, Alternaria, Aspergillus, Aureobasidium, Helminthosporium, Fusarium, Epicoccum. По данным голландских исследователей [12] в воздушной среде преобладают споры плесневых

грибов, среди которых чаще встречаются Cladosporium, Botrytis, дрожжеподобные грибы, Penicillium, Basidiomycetes, Aspergillus и Alternaria. Эти грибы составляли 74,3% общей споровой массы. Концентрация спор Cladosporium, Botrytis и Alternaria имели очень широкую сезонную вариабельность обнаружения с максимумом летом и резким снижением зимой. Таким образом, что в

Украине наиболее распространенными в качестве сенсибилизирующих агентов могут оказаться следующие роды грибов: Cladosporium, Penicillium, Alternaria, Aspergillus, Fusarium, Botrytis, Candida, Cryptococcus, Rhizopus [17]. Известно [6], что в воздухе присутствует немало микроорганизмов, которые при дыхании попадают в наши легкие. Микологи решили обследовать городские квартиры, чтобы узнать, какие виды грибов можно встретить

в их воздухе и какие из них могут стать причиной различных заболеваний. За 5 лет (с 1997 по 2002г.) ученые обследовали 227 московских квартир в современных многоэтажных домах с центральным отоплением. Жили в них как люди, страдающие аллергией, с высокой чувствительностью к плесневым грибам, так и здоровые люди. В пробах воздуха из обследованных квартир были обнаружены представители 92 видов микромицетов из 32 родов. На каждую квартиру приходится от 1 до 13 видов, в среднем 7 [7].

Численность пропагул (т.е. мельчайших частиц грибов, из которых при благоприятных условиях могут развиться обширные колонии) в 1 м3 воздуха московских квартир варьировала от нескольких единиц до 7500, а в среднем – около 160. Из общего числа видов грибков, выявленных в воздухе жилых помещений, около 29% отнесены к аллергенным, которые могут вызывать сенсибилизацию, т.е. повышение чувствительности организма или его органов (например, органов чувств), к воздействию каких-либо раздражителей.

А около 46% обнаруженных видов грибков являются условно-патогенными. Это Alternaria alternata, Aspergillus flavus, A. niger, A. penicilloides, A. repens, A. versicolor, Botrytis cinerea, Cladosporium cladosporioides, C. herbarum, Penicillum brevicompactum, P. chrysogenum, Wallemia sebi и другие [8]. Оказалось [9], что постоянным компонентом воздуха в жилищах

горожан являются плесневые грибы, среди которых преобладают представители родов пенициллиум (Penicillium) и аспергиллус (Aspergillus), а также кладоспориум (Cladosporium). Они встречены в 60–90% обследованных квартир. Представители других родов встречаются гораздо реже – не более, чем в 6% квартир. Размер спор у пенициллов и аспергиллов, распространенных в московских квартирах, составляет в среднем 3–4 мкм, что облегчает их проникновение в наши легкие.

Если дышать через нос, то 30–50% спор осядет «по дороге», но 30–40% попадут в альвеолы. Но если нос заложен и воздух поступает через рот, то в альвеолы попадает уже 70% грибковых пропагул [17]. Существуют данные сравнительного анализа состава грибов в пыли и в воздухе квартир [14]. В пыли были найдены представители 108 видов, а всего, таким образом, 143 вида микромицетов из 43 родов. Авторы [1] полагают, что грибки из воздуха и пыли представляют единое

сообщество с определенным постоянством видовой структуры. Во всяком случае, существенных различий между обследованными 227 квартирами из разных районов города не обнаружено. Однако отмечены различия в составе грибков по сезонам – за счет видов, связанных с вегетацией растений в конце апреля – октябре. В это время года в воздухе квартир возрастает встречаемость видов из родов Cladosporium – c 41 до 85%; Alternaria – с 5 до 20%;

Botrytis – с 0 до 31%. Микобиота, т.е. сообщество микроскопических грибков воздуха жилых помещений, отличется от микобиоты наружного атмосферного воздуха как раз преобладанием пенициллиев и аспергиллов, тогда как в воздухе вне помещений чаще других встречаются представители рода Cladosporium [18]. Ученые также сравнили свои результаты с результатами аналогичных исследований, проводимых в других странах. Оказалось [1], что в странах Европы в воздухе и в пыли чаще всего встречаются представители

пенициллов, в Израиле – аспергиллов, а в странах с жарким засушливым климатом возрастает встречаемость кладоспор. Многообразной биохимической активностью обладают виды группы «черный аспергилл» – Aspergillus niger, также присутствующие в московских квартирах [10]. Они вырабатывают разнообразные ферменты, в том числе и разрушающие роговое вещество, хитин и др. Известны случаи микозов, легочных аспергиллезов, бронхопневмонии, причиной которых был все тот же черный

аспергилл A.niger. Токсичными свойствами обладают плесени, развивающиеся на продуктах питания, в особенности на колбасных изделиях [9]. 1.1.2. Микромицеты нежилых помещений В условиях повышенной влажности, сезонных колебаний температур, техногенного загрязнения воздуха, здания разрушаются не только под воздействием абиотических факторов, но и под влиянием микроорганизмов. Антропогенные загрязнители воздуха ускоряют процессы микробиологического повреждения городских памятников,

а поверхностные микробные пленки способствуют накоплению атмосферных загрязнений [1]. Как показали исследования двух последних десятилетий [1], существенную роль в деструкции камня и других строительных материалов играют микромицеты, которые, в отличие от водорослей и бактерий, способны развиваться при более низкой влажности и дефиците питательного материала. Будучи сапротрофами, грибы используют в пищу остатки других организмов (в том числе микробов), а также

полимерные реставрационные материалы. Для грибов материал памятника – субстрат, который они разрушают продуктами обмена веществ: органические кислоты действуют как хелатирующие агенты, что приводит к деминерализации камня; углекислый газ в известковых породах участвует в образовании растворимой соли, легко вымываемой дождем; вода, выделяемая клетками микромицетов, способствует контаминации камня более влаголюбивыми микроорганизмами. Пигменты меняют окраску камня, причем наиболее стойкие из них сохраняются на поверхности

минералов после гибели микробов. Химическая деградация камня под воздействием грибов была показана экспериментально с использованием в некоторых работах штаммов, выделенных из разрушенных памятников [4]. На каменистом субстрате доминируют темноцветные микромицеты из сем. Dematiaceae, известные как обитатели почвы, паразиты растений и человека, а так же, как деструкторы органических материалов [4]. Памятники архитектуры и городская скульптура колонизируются почвенными

грибами [2]. Споры микромицетов воздушными токами заносятся в музей и распространяются внутри интерьеров, заражая воздух и экспонаты. В зданиях с нарушенной гидроизоляцией (поврежденные фундамент, кровля, карнизы, неправильно организованный водоотвод, разрушение дренажа) места протечек или зоны с капиллярной влагой становятся источником увлажнения внутренней среды музея. С повышением влажности ускоряются химические реакции между средой и материалом экспонатов, инициируются

процессы биоповреждения (развиваются колонии грибов, размножаются влаголюбивые насекомые – вредители органических материалов). Микромицеты жизнедеятельны в широком диапазоне температуры, влажности и рН, поэтому в помещениях с нарушенной гидроизоляцией они способны развиваться при комнатной температуре и относительной влажности воздуха выше 70% как на органических, так и неорганических материалах. Споры сухолюбивых видов могут прорастать в диапазоне влажности 65-70 %.

В фондохранилищах при резких перепадах температуры споры могут прорастать за счет конденсационной влаги. По нашим наблюдениям, при кратковременном увлажнении материала рост грибов может не быть явно выраженным, однако после высыхания и гибели мицелия структура материала на пораженном участке экспоната остается ослабленной и с измененной окраской. В музее грибы могут повреждать не только предметы из органики, но и экспонаты, изготовленные из неорганических материалов, используя как источник питания органические

загрязнения, полимерные реставрационные материалы, а в случае живописи – еще и грунты [11]. В городской среде под влиянием антропогенных факторов в почве и сопряженных с нею средах происходит накопление опасных для человека (потенциально патогенных, аллергенных, микотоксичных) видов микроскопических грибов, причем в городских почвах часто в наибольшем количестве по сравнению с другими антропогенно нарушенными экосистемами [15]. На стенах Эрмитажа было обнаружено и идентифицировано 87 штаммов микромицетов,

относящихся к 26 видам [10]. Наибольшее количество штаммов отмечено у Aspergillus versicolor (15), Penicillium aurantiogriseum var.aurantiogriseum (12), Torula herbarum (9), Cladosporium brevi-compactum (7), Chrisosporium pannorum (6), Penicillium commune (5). Большинство выделенных видов известны как биодеструкторы различных материалов, а часть из них – как

патогенные или аллергенные виды. Например, Scopulariopsis brevicaulis поражает кожу, волосы, почки; Penicillium brevi-compactum – дыхательные пути; Cladosporium herbarum вызывает токсикозы у теплокровных, а представители рода Cephalosporium – цефалоспориоз. Эти виды – активные биодеструкторы, мы обнаруживали их внутри музеев, в том числе на экспонатах [10]. По данным Романенко В.Н. и др. [8] в 1м3 шахтного воздуха содержится 60 000 -

150 000 спор грибов, преимущественно из рода Penicillium и Aspergillus. В производственных условиях организм, как правило, подвержен воздействию разноразмерных частиц одного и того же продукта [6]. 1.2. Группы микотических болезней Все микотические болезни подразделяются на две принципиально разные группы: группу микозов и группу микогенных аллергий. Условно-патогенные плесневые грибы могут поражать практически все ткани человека,

но в условиях жилища чаще всего поражаются легкие. На фоне иммунодефицита, в частности, у больных злокачественными заболеваниями, которым проводится полихимиотерапия, могут возникать острые поражения легких, заканчивающиеся гибелью больных. Это может произойти в больнице с неисправной вентиляцией или поражением плесневыми грибами стен и межэтажных перекрытий. Если в палатах сосредоточиваются больные с иммунодефицитами, то именно они заболевают в

первую очередь. В Петербурге уже была массовая вспышка острого аспергиллёза легких в одной из больниц с неисправной вентиляцией, в ходе которой погибло несколько больных еще до постановки диагноза. Гибель следующих больных удалось предотвратить, лишь разобравшись в причинах их заболевания. Это была наиболее тяжелая форма аспергиллеза легких – аспергиллезная пневмония с распадом тканей легких и необратимыми нарушениями функции внешнего дыхания.

Аспергиллезная пневмония не в виде вспышки, а у отдельных больных постоянно регистрируется в больницах города. К сожалению, диагноз у многих таких больных ставится посмертно по причинам отсутствия специалистов и трудностей диагностики [11]. Из хронических форм аспергиллеза следует упомянуть аспергиллёму – полостную форму микоза. При ней в полостях легких самого различного происхождения (туберкулезная каверна, полость после вскрывшегося абсцесса, врожденная киста легкого, бронхоэктазы) образуется шаровидная колония величиной

в несколько сантиметров, вызывающая боли, кровохарканье, иногда повышение температуры тела. При такой форме добиться излечения можно только хирургическим удалением части легкого вместе с грибковым шаром. Правда, бывают и самостоятельные благоприятные исходы – самоизлечение, но только в виде исключения. Аспергиллема развивается длительное время, она служит постоянным потенциальным источником легочного кровотечения, периодически вызывает воспаление окружающей легочной ткани, а у некоторых больных способствует

их злокачественному перерождению [9]. Местные аспергиллезные заболевания органов слуха, зрения, полости рта, придаточных пазух носа могут причинить много неприятностей сами по себе, а также явиться источником “расселения” микроорганизмов по другим тканям и органам, приводя к развитию диссеминированных и генерализованных форм микозов [7]. Дрожжеподобные грибы рода Candida тоже поражают легкие, но у большинства больных они не вызывают глубоких повреждений. Они осложняют течение уже развившегося заболевания, например, хронического

бронхита, бронхиальной астмы и других. Эти грибковые заболевания – кандидозы – не имеют непосредственной связи с влиянием биоповреждений зданий, но в условиях сырости и охлаждения, сопутствующих биоповреждениям, на фоне иммунодефицита кандидоз полости рта, бронхов может существенно нарушать состояние здоровья, способствовать увеличению дней трудопотерь и даже быть причиной инвалидности [17]. Микогенные аллергии – сборное понятие [5], включающее заболевания, в основе которых лежит сходный механизм

– аллергизация организма человека антигенами плесневых грибов. Самая частая форма аллергии, зависящей от влияния биоповреждений зданий – микогенная бронхиальная астма. В России пока нет статистики этого заболевания, а в других странах Европы и Американских континентов от 50 до 80% больных бронхиальной астмой положительно реагируют на пробы с антигенами плесневых грибов. Это означает, что грибы являются основной причиной или являются

компонентом совокупности причин развития данного заболевания. В Санкт-Петербурге 42% детей, страдающих хроническими бронхитами и бронхиальной астмой, проживает на первых этажах зданий с признаками биоповреждений [13]. Кроме бронхиальной астмы, развиваются аллергические микогенные коньюнктивиты, риниты, назофарингиты. Они могут быть самостоятельными или сопровождать бронхиальную астму.

Многие больные, страдающие бронхиальной астмой, помнят о том, что заболевание у них начиналось с хронического насморка, с трудом поддававшегося лечению. Во многих случаях астма присоединяется постепенно, сначала в виде эпизодического бронхоспазма, больной это ощущает как свист в груди, затем в виде выраженного приступа удушья или неуклонно прогрессирующего нарушения дыхательной функции [13]. Аллергические болезни развиваются у лиц со здоровой иммунной системой, особенностью которой является

ее повышенное реагирование на генетически чужеродные для организма вещества антигенной природы, к которым относятся компоненты грибковой клетки. Среди всей человеческой популяции только 20% людей могут заболеть бронхиальной астмой или другими аллергическими болезнями. Этим объясняется то, что не все люди, на которых действуют аллергены, в том числе и живущие в неблагоприятных условиях, заболевают [12]. 1.3. Характеристика заболеваний человека, вызванных почвенными микромицетами

Как известно [9], контакт с грибами условно может вызывать три состояния: включающих так называемое носительство, инвазию и/или аллергическое состояние. В настоящее время признано, что при грибковых заболеваниях основные защитные механизмы связаны с клеточными факторами и меньше - с гуморальними. Неспецифические тканевые реакции на присутствие грибного антигена, препятствующие проникновению патогена в органы и ткани, проявляются в виде развития эпителиоидной гранулематозной

реакции, фагоцитоза, иногда - тромбоза кровеносных сосудов за счет действия грибных протеаз, обеспечивающих ускорение реакций свертывания крови. Для микозов нет специфических патогномоничных изменений тканей - эти изменения, как правило, смешанного характера. Некоторые возбудители грибковых инфекций (например, Histoplasma capsulatum) сохраняются в макрофагах, размножаются в них и способны вызывать диссеминированные

заболевания [9]. При наличии воспалительных реакций, связанных с инвазией грибов, выявляются соответствующие иммунные реакции. В то же время при врожденных и приобретенных иммунодефицитах иммунный ответ несовершенен или совсем не эффективен. При этом возрастает роль, так называемых оппортунистических (глубоких) микозов, вызываемых условно-патогенными грибами. Например [18], при лейкозах возможно развитие аспергиллеза, при лимфоме и СПИДе - криптококкоза, при дисгаммаглобулинемии – кандидоза.

Так, при формировании оппортунистических микозов, вызываемых условно-патогенными грибами рода Candida, имеют место: адгезия клеток грибов к барьерным системам организма, размножение возбудителя с проникновением его через барьерные системы, взаимодействие грибов с клеточными элементами соединительной ткани, внедрение возбудителя в сосудистое русло, диссеминация грибов по организму с образованием в органах кандидозных очагов поражения. В случаях контакта грибкового антигена с клеточным компонентом иммунной

системы при микозах развивается гиперчувствительность замедленного типа, выявляемая через 10-14 дней после заражения, а также накапливаются иммуноглобулины различных классов (антитела). Может также активироваться комплемент по классическому или альтернативному пути. • Altemaria Nees Частая и повсеместно распространенная разновидность, встречающаяся на многих растениях и других субстратах, включая почву, пищевые вещества и ткани.

Известные среды обитания - почва, злаковый силос, гнилая древесина, компост, гнезда птиц и различные лесные растения. Черные точки на помидорах могут быть вызваны альтернарией. Их часто находят в оконных рамах. Они рассматриваются как плесневые грибы открытых пространств и появляются при теплой погоде. А. alternata рассматривается как один из наиболее важных аллергизирующих плесневых грибов. Случаи аллергии возрастают к концу лета [18]. •

Aspergillus Link Это - термоустоучивый гриб со всемирным распространением. Из-за довольно широкого диапазона температур для хорошего роста, он не ограничен средами обитания с постоянно высокими температурами, при том, что об этом очень часто сообщается. Этот гриб найден в почве, листьях и растительном мусоре, гниющих овощах и корнях, птичьем помете, табаке, сладком картофеле, на испорченных продуктах, органических отходах.

По сравнению с другими аэроаллергенами, концентрация спор в воздухе низка, хотя часто там могут быть локализации. Ингаляция конидий и мицелия аспергиллов, может привести к некоторым заболеваниям, серьезность которых зависит от иммунного ответа хозяина, развиваются аллергическая бронхиальная астма, аллергический бронхопульмональный аспергиллез с вовлечением специфических IgE антител. Специфические IgE антитела против A. fumigatus были найдены в 81.8 % случаев с подтвержденной

клинической гиперчувствительностью. Другие заболевания типа аллергического альвеолита (гиперчувствительная пневмония) типа «легкого фермера», инвазивного аспергиллеза, и аспергиллем, также связаны с этим плесневым грибом [9]. • Botrytis cinerea B. cinerea имеет всемирное распространение, но главным образом встречается во влажных, умеренных и субтропических регионах. B.cinerea регулярно обнаруживается в почве, хотя его соотношение в полной популяции грибов не высок. Они могут паразитировать на широком диапазоне растений,

вызывая повреждение или гниение листьев, цветов и плодов. Его называют серым плесневым грибом, поскольку он покрывает распадающиеся ткани конидиофорами, например серая плесень капусты или салата, помидоров. Это особенно заметно на ягодах, например землянике и винограде [9]. • Curvularia lunata Сообщения об обнаружении C. lunata многочисленны [9], главным образом monocotyledonous растениях во многих тропических странах, но также и в

Канаде, Британских Островах, Франции и Нидерландах. Curvularia – факультативно-патогенный гриб, может вызывать повреждение листьев и ростков. Он также отмечается на плодах клещевины, хлопке, рисе, ячмене, пшенице и зерне. Curvularia – плесневой грибок, который ассоциируется с аллергией в литературе и часто сообщается в индексах спор плесневых грибов. Chapman и Williams сообщили, что 7.3 % пациентов с атопией, были гиперчувствительнымк

Curvularia. Было сообщено об аллергическом бронхолегочном заболевании, вызванное Curvularia. Как оказалось, отмечалась обширная перекрестная реактивность между Stemphylium, Curvularia и Alternata. • Epicoccum purpurascens. Epicoccum имеет всемирное распространение [9]. Это – вторичная причина разложения растений, почвы, бумаги и тканей. Он часто встречается в мертвой ткани, где может наблюдаться избыточное спорообразование.

Маленькие черные пустулы E. purpurascens часто обнаруживаются на отмерших частях многочисленных растений. Также он был выделен из хлебных злаков, плодов, загрязненной пресной воды, компоста, насекомых, человеческой кожи и слюны. Содержание конидий в атмосфере оказывается максимальным при спокойной, сухой погоде. • Mucor Fresen. Мукор был одним из первых грибов почвы, обнаруженный и выделенный уже в 1886. Он имеет всемирное распространение, выявляется на всем протяжении

Европы и в Америке от Штата Аляска до Бразилии [9]. Разновидности - прежде всего грибы почвы, но также их находят и в других местах, таких как лошадиный навоз, частях растений, зерне, овощах и орехах. В тропиках его находят высоко над уровнем моря. Также часто его обнаруживают на ягодах, фруктовом соке и мармеладе. Mucor – это также доминирующий плесневой гриб, обнаруживаемый в пыли на полу в зданиях и рассматривается

как внутренний плесневой гриб. В различных клинических исследованиях, Mucor определен как важный аллерген плесневых грибов у пациентов с гиперчувствительностью, определенную в SPT и провокационных тестах. • Penicillium Link Пенициллии очень широко распространены в почве [9], встречаются в умеренных зонах в лесах, полях и пахотных почвах сравнительно часто. Он может быть выделен из разлагающихся листьев и овощей.

Также его находят в заготовленном зерне, сене. Конидии легко выделяются в воздухе и часто учитываются во всех аэромикологических исследованиях. Также он рассматривается как важный плесневой гриб закрытых помещений. В закрытых помещениях, Penicillium - сине-зеленый плесневой гриб, обнаруживаемый на черством хлебе, плодах и орехах и используемый для производства зеленого и синего сыра с плесенью. Penicillium не имеет никаких особых сезонных вариаций, но достигает пиковых концентраций зимой и весной.

Penicillium долго считался одним из плесневых грибов, наиболее часто вызывающих положительные реакции при проведении кожных проб у аллергиков, хотя не были известны его характеристики и мало изучен его аллергенный состав. Специфические IgE антитела были найдены у 90 % пациентов с атопической гиперчувствительностью к P. notatum. • Trichoderma Pers. Триходерма может расцениваться, как один из наиболее широко распространенных из всех грибов почвы. Он обнаружен во всех исследованиях сред обитания на крайнем севере, на альпийских

областях, также как и в многочисленных исследованиях тропических областей. Имеются много сообщений для широкого диапазона лесов, полей и культивируемых земель. Он может расти и на других грибах, обычно обнаруживается на древесине, гобеленах, в сырых помещениях и часто выделяется в кухнях, где растет на не глицерованном кафеле. Trichoderma может вызывать проблемы при искусственном культивировании грибов и луковиц тюльпанов, которые

часто могут инфицироваться [9]. 1.4. Аллергии, индуцированные микромицетами Грибы могут индуцировать все четыре типа аллергических реакций [11]. По клиническим проявлениям аллергические реакции немедленного типа, обусловленные грибами, ничем не отличаются от таковых заболеваний, вызванных бытовыми, пищевыми или другими аллергенами. Кроме спор, вегетирующие грибы могут выделять большое число различных макромолекулярных соединений.

Например, у Aspergillus Link выявлено более 300 антигенных компонентов. Наиболее активной в антигенном отношении являлась фракция антигенов из разрушенного мицелия. Отмечена возможность антигенов, выделяемых грибами рода Аspergillus стимулировать синтез иммуноглобулина Е и эозинофилов. Как указывает Т.Н. Лебедева [12], в последнее время во всех развитых странах мира отмечается неуклонный

рост аллергических заболеваний. Показатели частоты сенсибилизации к грибам варьируют в широких пределах: от 2% до 60% в зависимости от вида гриба и принадлежности пациентов к группам риска развития микогенной аллергии. Грибы, наряду с другими аллергенами, могут вызывать у людей микогенную сенсибилизацию и аллергию. Индукция того или иного типов аллергических реакций во многом определяется исходным состоянием иммунной системы и особенностями поступления аллергена в организм.

Полагают, что аллергия к грибам рода Candida может протекать по любому из 4 типов аллергических реакций соответственно классификации Гелла и Кумбса [18]. К настоящему времени четко доказана возможность развития кандидоаллергии по I, III и 1V типам реакций. Сенсибилизация организма к Candida может развиваться двумя путями: экзогенным и эндогенным. Экзогенный путь является следствием контакта человека с аллергенами грибов окружающей среды, при этом

микогенная сенсибилизация проявляется обычно как профессиональная патология у рабочих предприятий по производству кормовых дрожжей и белково-витаминных концентратов, у жителей селитебных зон (проживающих в районах расположения таких предприятий), а также животноводов, контактирующих с готовыми продуктами производства. Наиболее часто сенсибилизация к аллергену гриба происходит эндогенным путем при хронических формах кандидоза или длительном носительстве грибов рода

Candida в организме. Эндогенная сенсибилизация встречается и как профессиональная патология у медсестер, работников предприятий по выпуску лекарственных препаратов и производства комбикормов, что связано с частым кандидоносительством у лиц этих профессий . На развитие микогенной сенсибилизации и аллергии оказывают влияние многие факторы: наследственная предрасположенность к аллергическим заболеваниям, доза аллергена и длительность контакта с ним, путь поступления аллергена

в организм и др.Наследственность является одним из основных факторов, способствующих развитию микогенной сенсибилизации и аллергии. Среди лиц с профессиональной сенсибилизацией к БВК установлена повышенная частота встречаемости HLA-антигенов В18, Cw4 [18]. У больных аллергозами такими иммуногенетическими маркерами являются HLA-антигены DR7, Cw4 и D8. Для «резистентных» лиц характерна низкая встречаемость

DR7. У рабочих, занятых в производстве гидролизных кормовых дрожжей, имеет место тесная связь возникновения профессиональных аллергодерматозов с антигеном HLA-B16. Многие исследователи придают особую значимость повышенной пролиферации Candida spp. в кишечнике, что, видимо, обусловлено высокой степенью всасываемости аллергенов гриба из желудочно-кишечного тракта. Грибковые аллергены сенсибилизируют организм человека в дозе 1•10-9 – 1•10-6г.

Есть многочисленные данные литературы [9] относительно возможности индуцировать IgE-опосредованную аллергию для следующих микромицетов: Absidia, Alternaria, Aspergillus, Aureobasidium, Botrytis, Candida, Cephalosporium, Chaetomium, Cladosporium, Claviceps, Cryptococcus, Pityrosporum, Curvularia,

Dacrymyces, Diococcum, Epicoccum, Epidermophyton, Erysiphe, Eurotium, Fomes, Fusarium, Geotrichum, Gliocladium, Graphium, HeJrninthosporium, Urocytis, Leptosphaera, Lycogala, Lycoperdales, Macrosporium, Microsphaera, Mucor, Phoma, Mycogone, Neochloris, Neurospora, Nigrpspora,

Paecilomyces, Papularia, Penicillium, Phytophtora, Piptoporus, Pleurotus, Podaxis, Polystictus, Puccinia, Rhizopus, Rhodotorula, Saccharomyces, Scopulariopsis, Serpula, Sphaerotheca, Spondylocladium, Sporobolomyces, Sporotrichum, Stemonitis, Stemphylium Stereum, Tilletiopsis,

Trichoderma, Trichophytpn, Trichothecium, Ustilago, Vergicillium, Xylaria, Hypholoma. Это означает, что диагностика аллергических заболеваний, обусловленных вышеприведенными микромицетами, может строиться на кожных пробах (прик-тест) с соответствующими аллергенами, провокационных тестах и лабораторном определении специфического IgE [9]. Также известна и не-IgE-опосредованная аллергия к грибам [9].

Ее представителем является экзогенный аллергический альвеолит, вызванный Aspergillus и др. [9]. Также было описано выживание спор A. fumigatus в нейтрофилах и альвеолярных макрофагах [9]. Дополнительными факторами вирулентности грибов является продукция различных микотоксинов, которые могут тормозить рост клеток или функционирование клеточных защитных механизмов хозяина.

Ферменты, выделяемые грибами, например эластаза, также может повреждать эпителий. Микромицеты-патогены, способные расти и размножаться при температуре тела человека, могут вызвать заболевания дыхательной системы при снижении защитных сил макроорганизма [18]. В качестве примера можно назвать микромицеты из рода Aspergillus (A.fumigatus), аспорогенные дрожжи рода

Candida (C.albicans, C. tropicalis), Histoplasma capsulatum [9]. Факторы агрессии и патогенности грибов до конца не исследованы. Среди описанных известны ферменты: кислая протеиназа у C. albicans, 6-фосфатдегидрогеназа, супероксиддисмутаза, фосфолипаза В и др. [9]. На фоне респираторной сенсибилизации людей спорами и фрагментами мицелия грибов

Aspergillus spp Саndida spp Fusarium spp Penicillium spp. и др опасность возникновения аллергических микозов заметно возрастает, особенно у лиц, работающих в биотехнологических производствах, основанных на использовании соответствующих микромицетов [9]. В некоторых исследованиях [9] была определена реактивность между аллергенами различных типов плесневых грибов: Alternaria, Stemphylium, Ulocladium и Curvularia, реже – с

Spondylocladium и Drechslera (Helminthosporium). Epicoccum и Fusarium. Stemphylium, Alternaria и Curvularia показали обширную перекрестную реактивность in vitro. Некоторые исследователи [9] предполагают, что Fusarium solani, Penicillium notatum и Aspergillus glaucus имеют несколько одинаковых антигенных аллергенных детерминант. Они также нашли незначительное угнетение или его отсутствие у

Aspergillus RAST к Cladosporium или Alternata. 1.5. Краткая характеристика микромицетов, споры, которых обнаружены в воздушной среде • Candida albicans Дрожжевой грибок C. albicans редко встречается в летучем виде. Он обычно встречается в почве, органических остатках и у людей, где он существует как сапрофит в носоглотке и в фекалиях. Клинически это может приводить к серьезным инфекционным заболеваниям, таким как молочница

новорожденных, кожные инфекционные болезни у пациентов с сахарным диабетом и сепсисом, у иммунокомпрометированных пациентов. Среди видов Candida, вызывающих заболевания человека, отмечают C. albicans, C. Stellatoidea, C. Tropicalis, C. Krusei, C.kefyr, C.parapsilosis (C.parakrusei), (C.pseudotropicalis), C.guilliermondii [9]. • Cladosporium Link Регистрируется во всех частях света, что доказывает, за некоторыми

исключениями, что Cladosporium - наиболее часто встречающийся плесневой гриб в воздухе. Сухие споры легко переносятся по воздуху и транспортируются даже через океаны. Концентрация спор в помещениях в большой степени коррелируют с наружной концентрацией. В зависимости от климатических условий, конидии могут начинать появляться в атмосфере весной и достигать пика к позднему лету или ранней осени [9]. Cladosporium - один из наиболее частых колонизаторов отмирающих

и мертвых растений и также существует в различных типах почв, и на пищевых продуктах. Этот вид плесневых грибов часто обнаруживается в немытых холодильниках, пищевых продуктах, на сырых оконных рамах, в зданиях с плохой вентиляцией, с соломенными крышами, и расположенных в низких, влажных областях. Они были выделены в топливных баках, кремах для лица, красках и тканях [9]. • Fusarium Link F. Link универсальная доминанта, найденная в аэробиологических исследованиях во всем мире.

Она широко распространена на многочисленных травах и других растениях и является очень частым грибом, обнаруживаемом в почве. Часто является причиной заболеваний растений и главным паразитом риса, сахарного тростника, особенно часто на кукурузном зерне. Регулярно обнаруживается на корнях банана и других плодах и овощах, например помидоров и арбузов. Спорообразование происходит при теплой, влажной погоде. В течение зимы или в сухие периоды, гриб выживает в почве и в разлагающихся растениях [9]. •

Helminthosporium Link H. halodes обнаружен во всем мире в аэробиологических обзорах. Helminthosporium почти всегда выявляется сезонно и выделяет споры в сухие, жаркие дни. Разновидности Helminthosporium хорошо известны, как паразиты хлебных злаков и трав. Он часто обнаруживается на зерне, травах, сахарном тростнике, в почве и на тканях [9]. • Pityrosporum orbiculare Pityrosporum – это липофильная форма дрожжей

Malassezia furfur (перхоть), обычно рассматриваемая, как непатогенный сапрофит и может быть найдена на коже более, чем у 80% здоровых взрослых, но редко у маленьких детей. Инфекции, вызываемые Pityrosporum возникают в волосяных фолликулах. Имеются предположения о связи между P. orbiculare и атопической экземой [9]. • Rhizopus Ehrenb. Rhizopus близко связан с Mucor и населяет те же самые экологические ниши.

Ризупус - один из наиболее обычных представителей Mucorales и имеет всемирное распространение, наиболее часто встречается в более теплых областях. Чаще обнаруживается в сухих средах обитания. Споры распространяются в жаркую, сухую погоду. Часто выделяется в лесной и культивируемой почвах. Находят в детских песочницах. Типичные микросреды обитания включают разлагающийся мусор, например,

сосновые иглы и листья. Другие известные субстраты - сладкий картофель, замороженная земляника, вареные фрукты, а также гнезда, перья и помет диких птиц [9]. • Stemphylium botryosum. S. botryosum – повсеместно распространенная разновидность, обычно встречающаяся в умеренных и субтропических регионах. Выделен из почвы лесов, лугов, пшеничных полей, свекольных и цитрусовых культур, плантаций кофе. Также был выделен из загрязненной пресной воды, опавших листьев,

коры и листьев цитрусовых. Как типичный спорообразующий гриб, он обнаруживается на помидорах, пшенице и ячмене. Конидии обильно высвобождаются после понижения относительной влажности в присутствии света [9]. 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Методика выделения и идентификации микромицетов Для изучения микромицетов воздуха использовали метод осаждения (по Р. Коху) в чашки Петри с подкисленными лимонной кислотой до рН 4,0-4,2 и охлажденными до 40°

С питательными средами Чапека, сусло-агар, МПА [202]. Сусло-агар - агаризоване питательная среда состоит из пивного сусла (5-7% сахара по Баллингу) - 1000 мл и 20 г агар-агара; минеральная агаризоване среда Чапека имеет такой состав: сахароза - 30г, NaN03 – 3 г, КН2РО 4 - 1 г, КС1 – 0,5 г, MgSO 4x7 Н20 – 0,5г, FeSO4 – 0,01 г, агар-агар – 20 г, дистиллированная

вода - 1000 мл [35, 36, 37]. Вего было отобрано 48 проб воздуха из восьми помещений, среди которых было 2 – квартиры без цветов, 2 - квартиры с комнатными цветами, 2 аудитории без цветов (3-15 и 7-26) и 2 аудитории с цветами (3-16 и 3-24). Для исследования микромицетов воздуха использовали седиментационный метод Коха [38]. В помещении, где хотят определить микрофлору воздуха, ставят в разных местах чашки

Петри со стерильной питательной средой. Все чашки открывают на 45 минут. Пылинки с микробами оседают на поверхность среды. Во время проведения опыта нужно следить, чтобы не было движения воздуха. Через 45 минут чашки закрывают и ставят их в термостат. Исследования проводили с 2-кратной повторяемостью.

Чашки Петри инкубировали при комнатной температуре (20-22° С) и в течение трех недель большинство колоний перевивали в пробирки для хранения и дальнейшего исследования [35, 39]. Влажность в помещении измерялась психометрическим гигрометром. Идентификацию видового состава микромицетов проводили в живом состоянии в микологически чистых культурах 1-2-недельного возраста. Культуральные признаки колоний микромицетов исследовали на чашках

Петри под микроскопом МБС-9; для определения цвета колоний, реверзума или питательной среды использовали шкалу цветов А.А. Бондарцева [40]. Определение особенностей строения репродуктивных структур микромицетов проводили в препаратах «раздавленная капля» [39]. Идентификацию микромицетов проводили, используя общепринятые определители, отдельные публикации для определения отдельных групп микромицетов [41-45]. Латинские названия грибов и классификация микромицетов поданы согласно «Dictionary of the fungi» [46].

Коэффициент Чекановского-Серенсана: ICk=2A/((A+B)+(A+C)) A – число общих видов для 2-х сообществ; В – число видов встречающихся только на 2 участке; С – число видов встречающихся только на 1 участке. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Всего в воздухе жилых и нежилых помещениях было выделено 39 видов микромицетов, которые принадлежат к 2 родам зигомицетов и 6 родам аскомицетов (Табл.

3.1.) Таблица 3.1 Систематическая структура микромицетов иследованнных помещений Микромицеты Аллергенность* Патогенность* Zygomycota Zygomycetes Mucorales Mucoraceae Mucor hiemalis f. hiemalis Wehmer Rhizopus nigricans Ehrenb. R. microsporus var. oligosporus (Satio) Schspper R. japonicus Vuill. + + Ascomycota Euascomycetes

Eurotales Trichocomaceae Aspergillus eburneo-cremeus Sappa + + A. flavus Link + + A. fumigatus Fres. + + Aspergillus ustus Thom et Church + Aspergillus sp. из секции A. ustus + A. versicolor (Vuill.) Tirab. + + Penicillium citrinum Thom + + P. coeruleo-viride Smith + P. concavo-rugulosum

Abe + P. glabrum (Wehmer) Westl. + Продолжение таблицы 3.1 Микромицеты Аллергенность* Патогенность* Penicillium funiculosum Thom + P. godlewskii Zaleski P. herquei Bain, et Sart P. paxilli Bain P. restrictum Gilman et Abbott P. roqueforti Thom + + P. steckii Zal. + + P. tardum Thom + + P. variabile

Sopp P. varians Smith Penicillium sp. Mycelia sterilia 1 Hypocreales Hypocreaceae Trichoderma atroviride Karsten Tr. aureoviride Rifai Tr. viride Pers. + Verticillium sp. Nees + Pleurosporales Pleurosporaceae Alternaria alternata (Fr.) Keissl. + Alternaria sp. + Cladosporium atroseptum

Pidopl. et Deniak С. cladosporioides (Fresen.) de Vries + + C. herbarum (Pers.: Fr.) Link + + Cladosporium sp. 1 Cladosporium sp. 2 Mycelia sterilia 2 Mycelia sterilia 3 * определяли по данным литературы Количество видов, которые выявлены в воздухе одного помещения, колебались от 9 до 22 видов, что в среднем представляет 16 видов. Этот показатель достаточно высок, потому что по данным литературы контаминованность

помещений в других исследованиях, обычно не превышала 13 видов [60]. Наибольшее число видов микромицетов (22 вида) было выделено в воздухе аудитории без цветов, несколько меньше - в квартирах без цветов (17 видов), следующее место занимали аудитории (14 видов) с цветами (Табл.3.2). Некоторые авторы считают [18], что растения имеют незначительное влияние на число видов в помещениях. Невзирая на то, что число видов микромицетов в домах с большим количеством растений несколько

возрастает в связи с поливкой и опрыскиванием, лабораторными исследованиями все-таки не было доказано рост количества видов микромицетов непосредственно на домашних растениях [18]. Наличие комнатных растений - это присутствие почвы в помещении, а также высокая влажность, которая содействует интенсивному развитию грунтовых грибов. В атмосферном воздухе споры грибов попадают главным образом из почвы и из растений.

Нами было показано, что цветы значительно влияют на количество видов микромицетов в помещении.   Таблица 3.2 Виды микромицетов в исследованных помещениях аудитории 2 + + + аудитории 1 + + + + + квартиры B + + + + + квартиры A + + + микромицеты Mucor hiemalis f. hiemalis Wehmer Rhizopus nigricans Ehrenb. R. microsporus var. oligosporus (Satio) Schеpper

R. japonicus Vuill. Aspergillus eburneo-cremeus Sappa A. flavus Link A. fumigatus Fres. A. ustus Thom et Church Aspergillus sp. из секции A. ustus   Продолжение таблицы 3.2 аудитории 2 + + аудитории 1 + + + + + квартиры B + квартиры A + + + + + + микромицеты Aspergillus versicolor (Vuill.)

Tirab. Penicillium citrinum Thom P. coeruleo-viride Smith P. concavo-rugulosum Abe P. glabrum (Wehmer) Westl. P. funiculosum Thom P. godlewskii Zaleski P. herquei Bai. еt Sart P. paxilli Bain. P. restrictum Gilman et Abbott P. roqueforti Thom P. steckii Zal.  

Продолжение таблицы 3.2 аудитории 2 + + аудитории 1 + + + квартиры B + + + квартиры A + + + + микромицеты Penicillium tardum Thom P. variabile Sopp P. varians Smith Penicillium sp. Mycelia sterilia 1 Trichoderma atroviride Karsten Tr. aureoviride Rifai Tr. viride Pers. Verticillium sp.

Nees Alternaria altemata (Fr.) Keissl. Alternaria sp.   Виды микромицетов в исследованных помещениях цветочный магазин 2 + + + + цветочный магазин 1 + + аудитория 2 + + + аудитория 1 + + + + + квартиры B + + + + + квартиры A + + + микромицеты Mucor hiemalis f. hiemalis Wehmer Rhizopus nigricans Ehrenb. R. microsporus var. oligosporus (Satio)

Schspper R. japonicus Vuill. Aspergillus eburneo-cremeus Sappa A. flavus Link A. fumigatus Fres. A. ustus Thom et Church Aspergillus sp. is секції A. ustus Продолжение таблицы 3.2 - квартиры А – квартиры с цветами - квартиры В – квартиры без цветов -аудитории 1 – с цветами -аудитории 2 – без цветов аудитории 2 + аудитории1 + квартиры B квартиры

A + + + + микромицеты Cladosporium atroseptum Pidopl. et Deniak C.cladosporioides (Fresen.) de Vries C. herbarum (Pers.: Fr.) Link Cladosporium sp. 1 Cladosporium sp. 2 Mycelia sterilia 2 Mycelia sterilia 3 Для оценки флористического сходства микофлоры воздуха исследуемых помещений нами был просчитан коэффициент Чекановского-Серенсена. Оказалось, что максимально подобной была микофлора

воздуха квартир и аудиторий с цветами, а наименее подобной – микофлора воздуха квартир. Табл. 3.3 Флористическое сходство микофлоры исследуемых помещений. Сравнительные объекты Коэффициент Квартиры А и В 0,38 Аудитории 1 и 2 0,63 Квартиры А и аудитории 1 0,52 Квартиры А и аудитории 2 0,73 Квартиры В и аудитории 1 0,43

Квартиры В и аудитории 2 0,58 Также интенсивно влияет на видовой состав микромицетов наличии цветов в помещении. Микофлора квартир с цветами, была представлена 17 видами микромицетов, а микофлора квартир без цветов – 9 (Рис. 3.1). Ядро аэромикоты исследованных помещений формируют представители родов Репісіllium (около 38,5%), Aspergillus (15,4%) и Cladosporium (12,8%) (Рис.3.2). Дальше в порядке уменьшения представлены виды родов

Rhizopus, Alternaria и светлоокрашенных стерильных мицелий. Преобладание родов Репісіllium и Aspergillus в воздухе данных помещений свидетельствует о возможном пути попадания микромицетов – из почвы, т.к. именно эти рода грибов наиболее широко представлены в разных типах биогеоценозов. Рис. 3.1. Число видов микромицетов в исследуемых помещениях. Многими исследователями изучался видовой состав микромицетов разных помещений в разных городах.

Рябушевою Ю. В Петровою Т. А. [47] изученная микобиота помещений Санкт-Петербургского государственного университета. Как и в наших исследованиях, наиболее представленным оказался род Репісіllium (42.5%), представители родов Aspergillus и Cladosporium были выявлены намного меньше - соответственно 10 % и 6.3 % от общего числа видов.

Больше 70% определенных видов, при исследованиях отмеченных авторов, сложили условно-патогенные микромицеты [47]. Рис. 3.2. Систематическая структура микофлоры помещений на уровне родов. В результате исследований жилищных помещений города Москвы были получены несколько отличные результаты [18]. Авторами было показано, что 39,9% от всего видового разнообразия представляют грибы рода

Репісіllium. Однако, достаточно высоким оказался и процент в воздухе аспергилов – 36,7%, представители рода Cladosporium сложили только 8,4%. Данные результаты несколько отличаются от полученных нами, а именно почти равное участие в микофлоре представителей аспергилов и пеницилиев, а также низкое содержание видов темнопигментованных микромицетов. Были получены интересные из научной точки зрения данные относительно видового состава микромицетов воздуха экспозиционных залов и хранилищ

Государственного Эрмитажа. Оказалось, что больше половины определенных видов грибов было представлено видами рода Репісіllium [48]. В отличие от данных вышеуказанных авторов, состав микобиоты воздуха гематологического стационара в значительной степени отличается. В этих помещениях преобладали темнопигментованные грибы (Cladosporium), но частично Репісіllium также была большой - 31% [28]. В литературе есть данные относительно исследования микофлоры атмосферного воздуха.

Согласно исследований приземного воздуха г. Москвы, родом, который доминировал оказался род Cladosporium [14]. Изучалась микофлора воздуха Ферганской долины Узбекистана. Наиболее широко представленным оказался род Репісіllium [12]. Таким образом, анализ оригинальных данных и данных литературы показал, что основными родами микромицетов атмосферного воздуха и воздуха помещений являются:

Репісіllium, Aspergillus, Cladosporium. Разница родового состава микромицетов во всех четырех типах помещений небольшая (Рис.3.3). Везде доминирует род Репісіllium. Однако, в квартирах, где есть цветы, число видов этого рода вдвое больше, чем в других квартирах. И в аудиториях с цветами отмечается большая доля пеницилиев. Нами было установлено, что среди выделенных видов пеницилиев преобладали виды, которые принадлежат

к секции Biverticillata, а по данным литературы [49] представители данной секции более характерны для лесных почв. Что касается рода Aspergillus, нами было установлено, что число видов этого рода в воздухе квартир немного меньше, чем в аудиториях. Микромицеты рода Cladosporium встречались только в трех типах помещений, в воздухе аудиторий с растениями они вообще не были выявлены. В результате наших исследований видов, что доминируют и часто встречаються -

Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. ustus, Penicillium coeruleo-viride, P. glabrum, P. tardum, P. variabile, Cladosporium herbarum (Таблица 3.3). Следует обозначить, что 6 из 8 видов являются аллергентами и условно-патогенными видами; 6 из 8 есть биодеструкторами полимерных материалов[4]. Рис. 3.3. Состав микрофлоры исследуемых помещений.  

Таблица 3.4 Виды микромицетов, наиболее характерных для помещений г. Харькова аудитория 4 + + + аудитория 3 + + + + аудитория 2 + + + + + аудитория 1 + + + + + + + квартира 4 + + квартира 3 + + + + квартира 2 + + + + + + квартира 1 + + + + + + вид Aspergillus flavus Link A. fumigatus Fres. A. ustus Thom et Church Penicillium coeruleo-viride Smith P. glabrum (Wehmer)

Westl. P. tardum Thom P. variabile Sopp Cladosporium. herbarum (Pers.: Fr.) Link   Aspergillus flavus обычно выделяется из почвы, растительного гниющего материала, [16]. Этот вид был выявлен в перегнойно-карбонатных оподзоленых, лугово- песчаных легкосуглинистых, темно-серо оподзоленых почвах под зерновыми культурами, в луговых почвах Полесья и Лесостепи Украины, а также как возбудитель грибных заболеваний совок [50].

Данный вид является возбудителем многих инфекционных заболеваний, в том числе пневмонии, микотоксикозу, который обусловливается афлатоксинами, отиту, синуситу инвазивного микоза и инфаркта [5]. A. fumigatus обычно выделяют из почвы, растительных гниющих остатков, воздуха. Выявленный в перегнойно-карбонатных оподзоленых, лучных песчаных, дерено-подзолистых глеевих почвах, черноземе оподзоленому, темно-серому оподзоленому под зерновыми культурами, лучных почвах

Полесья и Лесостепи Украины, в почвах под плодовыми насаждениями [50]. Вызывает аспергиллез у человека и животных, костную, глазную, сердечно-сосудистую и носовую инфекцию, аллергию [5]. Выделенный из операционного материала больных туберкулезом легких, бронхиальной астмой, кандидозами Лор-органов [51, 52,53]. В результате нарушения функционирования микробного биоценоза и сформированных между ними связей в почвах районов с техногенным загрязнением, доминируют потенциально

патогенные для человека микромицеты, среди которых первое место занимает A. fumigatus. Некоторые ученые считают этот вид индикатором техногенного загрязнения почвы. Кроме того, этот вид при тестировании рассматривается как один из наиболее аллергенных [3]. Микромицети данного вида очень широко распространены на полимерных материалах. Считая высокую активность, агрессивность и способность адаптироваться к разным условиям (способность

выживать при температуре больше чем 50°С этот вид имеет большие потенциальные возможности разрушения полимерных материалов [4]. A. ustus встречается в почвах тропических и субтропических районов. Для нашего региона достаточно редкий вид [5]. Является причинным агентом отита, инфекций при ожогах, диссеминованных инфекций [5]. Выделенный из пораженных ногтей больного онихомикозом [54], кандидозами ЛОР-органов [53], миелобластним лейкозом [55]. В почве встречался под посевами озимой пшеницы, также

в подстилке сосновых насаждений [50]. Очень широко распространенный на полимерных материалах. Способен адаптироваться к широкому кругу материалов разного химического состава [4]. Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. ustus встречались в почвах и приземном слое воздуха г. Москвы [1]. Репісіlliит coeruleo-viride - патогенные свойства этого вида в литературе не отмечены. P. glabrum был выделен из лучной песчаной и темно-серой слабооподзоленой лесной почвы [50].

Известный как возбудитель аллергенного альвеолита. P. variabile был выявлен в почве под зерновыми культурами Полесья и Лесостепи Украины, в почвах под плодовыми насаждениями [50]. P. glabrum и P. variabile встречаются на полимерных материалах [4]. Cladosporium herbatum обычно встречается на отмершем органическом материале, в воздухе; будет поражать

кожу, может быть причиной кератита [5].Активно разрушает целлюлозу, пектин и лигнин [4]. Входит в видовой состав светло-серых, темно-серых оподзолених почв, оподзоленого чернозема Полесья и Лесостепи Украины, выделялся из почв плодовых насаждений [50]. P. tardum был отмечен в почве под посевами озимой пшеницы, в почвах плодовых насаждений [50]. Кроме того, P. glabrum, P. coeruleo-viride и P. tardum были выделены из подстилки и почвы лесных насаждений

боровой террасы р. Северский Донец [56,57]. P.variabile и A. ustus выделены из почвы и ризосферы сосновых и березовых насаждений Задонецкого лесничества Харьковской области [58]. Cladosporium herbarum и P. variabile случаются в растительных ассоциациях географических культур сосны в Изюмском лесхозе [59]. Нам не удалось вывести прямую зависимость числа видов микромицетов от влажности

в помещении. Однако (табл. 3.5), наибольшее видовое разнообразие было выявлено в аудиториях с цветами, где влажность воздуха была наивысшей, сравнительно со всеми другими исследованными помещениями. В квартирах разница значения влажности от аудиторий с цветами небольшая, однако, отличие за количеством видов существует, что является доказательством влияния на состав микофлоры дополнительных факторов. Возможно, одним из таких факторов выступает наличие почвы в горшках цветов в аудиториях с растениями.

В городской среде происходит формирование специфических грибных комплексов, отличных за своим составом от содружеств микроскопических грибов естественного биогеоценоза. Городские почвы характеризуются большим уплотнением, более щелочной реакцией среды, загрязнением токсичными веществами. Растительный покров обеднен. Состав атмосферного воздуха значительно отличается от естественного по составу, количеству пылевых частей, повышенной температуры воздуха.

Сообщества микромицетов в урбанизированных экосистемах имеют свою специфику. Отмечается увеличение случаев ряда потенциально патогенных микроскопических грибов [60]. В помещение грибы попадают из атмосферного воздуха, потому аэромикота помещений имеет подобный состав с атмосферным воздухом с повышенным числом потенциально патогенных микроскопических грибов. В наших исследованиях это в первую очередь представители рода

Aspergillus (A. flavus, A. fumigatus), которые широко распространении в исследованных помещениях. Таблица 3.5 Соотношения влажности и числа видов микромицетов в исследованных помещениях Место отбора проб влажность % число видов квартира 1 88 9 квартира 2 80 9 квартира 3 88 7 квартира 4 84 5 аудитория 1 67 13 аудитория 2 70 10 аудитория 3 90 11 аудитория 4 89 13 Около 33 % всех выделенных видов из исследованных помещений представляло аллергенные (13 видов) и около 39

% (15 видов) – условно- патогенные (Табл. 3.1, Рис.3.4) Рис. 3.4 Процент аллергенных и условно-патогенных микромицетов от общего числа видов. Рис. 3.5 Процент аллергенных и условно-патогенных видов в микрофлоре помещений. К тому же, число аллергенных и условно-патогенных видов было больше в квартирах и аудиториях с цветами (Рис. 3.5). В квартирах с цветами из 17 выделенных видов 11 оказались патогенными, в аудиториях без

цветов - 9 из 14 способно вызывать аллергии и другие заболевания (Рис. 3.6.) В аудиториях с цветами и квартирах без цветов количество аллергенных и условно-патогенных видов оказалось меньше и составила около половины видов. Важным является то, что в антропогенном содружестве исследованных помещений число видов микромицетов, которые являются источниками аллергенов и условно-патогенных видов представляет почти половину всех

выделенных видов. Размер спор широко представленных родов Aspergillus и Репісіlliит в среднем представляет 3-4 мкм, что позволяет им достаточно глубоко проникать в дыхательный тракт человека. Наличие значительного числа видов, относительно которых доказано продуцирование аллергенов, а также возбудители разных грибковых заболеваний, стоит рассматривать как фактор риска развития микогенной сенсибилизации и микозов. Рис.3.6. Соотношение общего числа видов грибов аллергенных и условно-

патогенных видов в микрофлоре помещений. 4. ОХРАНА ТРУДА В ОТРАСЛИ Характеристика основных источников опасности и угрозы здоровью в лабораториях микробиологического профиля Правила безопасности работы в лабораториях (отделах, отделениях) микробиологического профиля ДСП 9.9.5 080-02 1.1. Требования правил обязанности для выполнения всеми организациями/учреждениями (лабораториями) на территории Украины, независимо от ведомственной принадлежности и форм собственности,

которые проводят работу, из БПА I - II групп патогенности согласно требований ДСП N 9.9.5.035-99 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп опасности"; из БПА III - IV групп патогенности : - диагностические, экспериментальные и производственные работы; - ПЛР-диагностику; - диагностические исследования на холеру и ботулиничного токсина, что выполняются с целью профилактики этих инфекций; - иммунологические (серологические) исследования

с целью определения в крови человека антигенов микроорганизмов II группы патогенности (без накопления возбудителя) и/или антител к ним; - экспериментальные и производственные работы с вакцинными штаммами возбудителей I - II групп патогенности. IV группы патогенности : - диагностические и экспериментальные исследования; - иммунологические (серологические) исследования из БПА III группы патогенности без накопления возбудителя; - исследование из контроля качества

продукции на наличие санитарно-показательных микроорганизмов. 1.2. Цель Правил - создание безопасных условий труда, обеспечения индивидуальной и общей безопасности, предотвращения вынесения инфекций за пределы лабораторий, предупреждения несчастных случаев и профессиональные Приказ МОЗ Украины 26.10.2004 N 521 «Медико-биологические исследования производственных штаммов микроорганизмов и токсиколого-гигиеническая оценка микробных препаратов, определение их безопасности и обоснование гигиенических

нормативов и регламентов» 1.1. Методические указания предназначены для специалистов, которые занимаются обоснованием гигиенических нормативов производственных штаммов микроорганизмов-продуцентив и готовых форм препаратов, которые их содержат, в объектах производственной и окружающей сред. Штамм микроорганизмов - это генетически однородная популяция микроорганизмов с определенными стабильными специфическими морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами.

1.2. Методические указания составлены с учетом особенностей токсиколого-гигиенической оценки биологических препаратов на основе производственных штаммов микроорганизмов. Производственный штамм - штамм микроорганизмов, который используется в промышленности при производстве того или другого продукта (биопрепарата). Патогенные микроорганизмы не допускаются к использованию как производственные. Штам-продуцент - штамм микроорганизмов, который продуцирует то или иное вещество (антибиотик,

фермент и др.) и используется для получение конечного продукта (т.е. продукта биотехнологии). Биотехнология – технология производства продуктов при использовании живых клеток организмов (микроорганизмов, растений, животных). 1.3. К производственным штаммам микроорганизмов относятся микроорганизмы различных категорий (грибы, бактерии), являющиесядейственными факторами биопрепаратов или продуцентами биологически активных веществ, которые используются для создания препаратов для различных отраслей народного хозяйства

и здравоохранения (микробиологические средства защиты растений от вредителей и болезней, стимуляторы роста растений и микробиологические удобрения, антибиотики, ферменты, витамины, аминокислоты, субстанции для лекарственных препаратов, кормовые белки, пищевые добавки, деструкторы химических загрязнителей и др.). 1.4. Микробный препарат - это препарат, который содержит в своем составе как действующий ингредиент жизнеспособные микроорганизмы в нативном или высушенном состоянии.

Микробные препараты могут в своем составе иметь как монокультуры, так и ассоциации микроорганизмов различных групп, они могут содержать или только микроорганизмы (например, препараты для пищевойпромышленности) или, кроме микроорганизмов, продукты их жизнедеятельности, разные минеральные и органические наполнители, стабилизаторы, эмульгаторы, консерванты, привлекательные продукты (например, микробные пестициды, стимуляторы роста растений, микробиологические удобрения). В отличие от химических веществ, микроорганизмы являются

живыми объектами, способными сохранять жизнеспособность и размножаться при наличии определенных условий в окружающей среде или в макроорганизме. Продукты биотехнологии, которые содержат в своем составе производственные штаммы микроорганизмов, как правило, не токсичны для теплокровных организмов, но могут вызывать дисбиотическое, сенсибилизирующее, имуномодулирующе или другое специфическое действие. Использование производственных штаммов микроорганизмов и производство препаратов на основании микробного

синтеза осуществляется предприятиями микробиологической промышленности и территориальными биотехнологическими предприятиями различной мощности, биофабриками и биолабораториями. Штаммы, зарегистрированные как возбудители инфекционных заболеваний у людей и полезных животных, к применению как производственные не разрешаются. 1.5. Цель предложенных методических указаний - содействовать получению однородных данных, которые можно сопоставить,

а также выбору и проведению оптимального объема исследований, необходимых для обоснования гигиенических регламентов производственных штаммов микроорганизмов и готовых форм препаратов, которые их содержат. Предусмотренный этими методическими указаниями объем исследования - обязательный минимум для исследователей, однако он не является препятствием для использования других методов при условии ихобоснования. Исследования предусматривают оценку опасности производственного штамма микроорганизмов и продуктов

биотехнологии на их основе при поступлении в организм лабораторных животных путями, адекватными реальным условиям трудовой деятельности и проживания человека, с целью выбора лимитирующего критерия вредности и установления ПДК (предельно допустимой концентрации). 1.6. Проведение токсиколого-гигиенических исследований и определение патогенных свойств новых производственных штаммов микроорганизмов, разработка ГДК штаммов и продуктов биотехнологии на основе микроорганизмов,

определение опасности для здоровья этих продуктов осуществляется лабораториями научно-исследовательских учреждений различных ведомств, которые аккредитованы в установленном порядке Комитетом по вопросам гигиенического регламентирования МОЗ Украины. Гигиеническому регламентированию подлежат штаммы микроорганизмов, которые прошли в указанных учреждениях первичную токсиколого-гигиеническую оценку как действующие факторы биопрепаратов или как

продуценты для микробиологического синтеза и получили в установленном порядке разрешение МОЗ Украины на их использование в технологических процессах, а также готовые формы препаратов, изготовленные на основании этих микроорганизмов или продуктов их метаболизма. 1.7. В случае направления на токсиколого-гигиенические исследования производственного штамма (или группы штаммов) микроорганизмов разработчику (владельцу штамма) необходимо предоставить паспорт штамма со сведениями

о его таксономическом положении, источнике выделения, культурально-морфологические и биохимические свойства, тесты и критерии идентификации, условия культивации, способ применения. В случае направления на исследование готового биопрепарата необходимо предоставить сведения о составе препарата (содержании действующего ингредиента и посторонней микрофлоры, наполнютелей, эмульгаторов и других вспомогательных веществ, агрегатное состояние, назначение, способ производства).

1.8. В последние годы в связи с развитием биотехнологии предлагается промышленное использование генетически модифицированных микроорганизмов. Степень их опасности зависит не только от патогенных свойств штамма-хозяина и рекомбинантной ДНК, способности к выживанию в объектах производственной и окружающей среды, но, особенно, от способности к передаче генетической информации другим организмам. В связи с отсутствием методических подходов к гигиеническому регламентированию таких штаммов и недостаточностью

научных данных для разработки критериев оценки их потенциальной опасности, выброс генетически-модифицированных микроорганизмов в процессе производства в воздух рабочей зоны и в окружающую среду запрещается. При получении необходимых данных это положение может быть пересмотрено. 1.10. При проведении исследований с микроорганизмами следует обязательно соблюдать правила техники безопасности при работе с микроорганизмами целью предотвращения заражения экспериментаторов и лабораторных

животных в соответствии с ГСП 9.9.5-080-02 "Правила устраивания и безопасности работы в лабораториях ВЫВОДЫ 1. В результате исследований состава микофлоры воздуха жилых и нежилых помещений, было выявлено 39 видов грибов, которые принадлежат к 8 родам. 2. Наиболее представленным по числу видов оказался род Репісіlliит, за которым следуют роды Aspergillus и Cladosporium. 3. Наибольшим видовым разнообразием характеризовался воздух аудиторий с цветами, где были

выделены 22 вида микромицетов, несколько меньше - 17 видов, было выявлено в квартирах с цветами. 4. Около 33% всех выделенных видов микромицетов принадлежало к видам, которые способны вызывать аллергию и 39% видов – к условно-патогенным. 5. Число аллергенных и условно-патогенных видов грибов в квартирах и аудиториях без цветов оказалось выше, чем в других исследованных помещениях. ПРИЛОЖЕНИЕ А. Виды микромицетов, наиболее часто встречающиеся в воздухе разных помещений.

Altemaria alternata Aspergillus fumigatus Botrytis cinerea Curvularia lunata Epicoccum purpurascens Mucor racemosus Penicillium notatum Trichoderma viride СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ 1 Аеромикота жилых помещений г. Москвы / Антропова А.Б Мокеева В.Л Биланенко Е.Н. и др. // Микология и фитопатология -

2003 Т. 37 №6 С. 1-11. 2 Антропова А.Б Биланенко Е.Н Мокеева В.Л. и др. Особенности сезонной динамики микромицетов жилых помещений г. Москвы // Материалы І Сьезда микологов. Сб. тезисов Москва, 2002 С. 220. 3 Аспергиллезная инфекция; подходы к ее диагностике и лечению / Елинов Н.П Митрофанов B.C Чернопятова P.M. // Проблеми медицинской микологии -

2002 Т.4, № 1 С. 4-14. 4 Билай . В.И. Микромицеты почв К.: Наук, думка, 1984 264 с. 5 Билай В.И Коваль 3.3. Аспергиллы К.: Наук, думка, 1988 204 с. 6 Билай В.И Пидопличко Н.М. Токсинобразующие микроскопические грибы и вызываемыеими заболевания человека и животных - К.: Наук. думка, 1971. 7 Богомолова Т.С Васильєва

Н.В Горшкова Г.И. Микобиота некоторых жилых помещений в г. Санкт-Петербурге и Ленинградской области // Проблеми медицинской микологии -1999 Т.1,№3 - С.41-43. 8 Бондарцев А.С. Шкала цветов М Л.: Изд-во АН СССР, 1954 27 с. 9 Бурова С.А Курбатова И.В «Редкие» грибковые инфекции. //Материалы І Сьезда микологов.

Сб. тезисов Москва, 2002 С. 351. 10 Василенко О.В Безмельницын Н.В ПЦР-диагностика и описание клинического случая микоза, вызванного A. ustus у пациента с острым миелобластным лейкозом // Материалы І Сьезда микологов. Сб. тезисов Москва, 2002 С. 378-379. 11 Видовой состав микромицетов в некоторых зкспозиционных залах и хранилищах

Государственного Эрмитажа / Смоляницкая О.Л. // Микология и фитопатология - 2004 Т. 38, № 4 С. 51-57. 12 Винникова О.И Шеховцов А.Г. Исследования почвенных микромицетов и водорослей Гомольшанского природного парка // Научные исследования на территориях природно-заповедного фонда Харьковской области Сб. науч. стат Харьков, 2003 С.

67-73 13 Возможные источники инфицирования грибами рода Aspergillus в гематологическом стационаре / Петрова Н.А Клясова Г.А. // Проблеми медицинской микологии - 2004 Т.6, № 2 С. 105-106. 14 15 Грибковая и бактериальная микробиота у больных бронхиальной астмой / Митрофанов B.C Голубева Т.Н Ровкина Е.И. и др. //Проблеми медицинской микологии -

2002 Т.4, № 2 С. 51-52. 16 Егорова Л.Н. Почвенные грибы Дальнего Востока: Гифомицеты Л.: Наука, 1986 192 с. 17 Еланский С.Н Рыжкин Д.В. Грибы и качество воздуха // Материалы І Сьезда микологов. Сб. тезисов Москва, 2002 С. 220. 18 Заболотний Д.И Вольская О.Г Зарицкая И.С

Особенности микобиоты при заболеваниях верхних дыхательньїх путей и уха // Материалы І Сьезда микологов.Сб. тезисов Москва, 2002 С. 382. 19 Заболотний Д.И Вольская О.Г Зарицкая И.С.Особенности состава микобиотн при заболеваниях верхних днхательних путей и уха //Материалы Сьезда микологов. Сб. тезисов Москва, 2002 С. 382. 20

Зигомикоз головного мозга / Аравийский Р.А Баранцевич Е.П СпиринА.Л. и др. // Проблеми медицинской микологии - 2002 Т.4, № 1, с. 17-19. 21 Исторический обзор и современная система рода Trichoderma / Александрова А.В Великанов Л.Л Сидорова И.И. // Микология и фитопатология 2004 Т. 38, вьш. 1

С. 3-19. 22 Кирилленко Т.С. Определитель почвенных сумчатых грибов К.: Наук.думка, 1978. -с. 23 Клиническая иммунологическа характеристика пециломикоза /Ахунова A.M Шустова В.И. // Клиническая медицина - 1991 № З, с. 64-67 24 Клясова Г.А Петрова Н.А Алехина Л. К. Особенности комплексов микроскопических грибов воздуха в отделениях ГНЦ РАМН // Материалы І Сьезда микологов.

Сб. тезисов. — Москва, 2002 С. 220. 25 Литвинов М.А. Методы изучения почвенных микроскопических грибов Л.: Наука 1969 149 с. 26 Лугаускас А.Ю Микульскене А.И Шляужене Ф.Ю. Каталог микромицетов-биодеструкторов полимерных материалов. — М.: Наука, 1987 341 с. 27 Микобиота воздушной среды помещений

Санкт-Петербургского государственного университета / Рябушева Ю.В Петрова Т.А Власов Д. Ю. // Проблеми медицинской микологии - 2004 Т.6, № 2 С. 112-113. 28 Микологическое исследование воздушной среды деревообрабатывающего предприятия / Васильєв О.Д Гоик В.Г Семенова В.В. и др. // Проблемы 29 Микофлора как фактор риска для рабочих комбикормового производства /

Чудновец А. Я. // Лікарська справа - 1998 № 7 30 Микофлора почв географических культур сосны в Южной части Восточной Лесостепи Украины / Шеховцов А.Г Патлай И.Н Винникова О.И. и др. // Микология и фитопатология - 2002 Т. 36, № 3 С.32-36. 31 Микромицеты загрязненных почв Северо-Западного региона России иих роль в патогенезе аллергических форм микозов /

Зачиняева А.В. Лебедева Е.В. // Микология и фитопатология — 2003 Т. 37, № 5. -С.69-74. 32 Микст-микотическое поражение легких, вызванное Aspergillus sp. и Mucor sp. / Аравийский Р.А Митрофанов B.C. //Проблеми медицинской микологии - 1999 Т.1, №3 с. 39-40. 33 Милько А.А. Определитель мукоральных грибов

К.: Наук, думка,1974 303 с. 34 Мишустин Е.Н Пушкинская О.И. Зколого-географические закономерности в распространении почвенных микроскопических грибов // Изв. АН СССР Сер. биология 1960 № 5 С. 641-660. 35 Особенности комплексов микроскопических грибов урбанизированньх территорий / Марфенина О.Е Каравацко Н.М Иванова А.Е. // Микробиология -

1996 Т.65, № 1 С. 119-124. 36 Особенности микробиоценоза и фракционно-дисперсного состава частиц бактериального аэрозоля в производственных помещениях / Воробьев А.А Гарасько Е.В. // Гигиена и санитария - 2002 № 2. 37 Пастернак Н.И Брысин В.Г. Аллергенность плесневых грибов -Ташкент: «Медицина», 1975 63 с. 38 Пидопличко Н.М.

Грибы-паразиты культурних растений: В 3т. /Определитель. -К.: Наук, думка, 1977. -Т.1: Грибы несовершенные. -296 с. 39 Пидопличко Н.М. Грибы-паразиты культурных растений: В 3т./Определитель К.: Наук, думка, 1977 Т.2: Гриби несовершенние. -300 с. 40 Пидопличко Н.М. Пенициллин К.: Наук, думка, 1972 150 с.

41 Пидопличко Н.М Милько А.А. Атлас Мукоральных грибов К.: Наук. думка, 1971 115 с. 42 Пидопличко Н.М Милько А.А. Атлас Мукоральных грибов К.: Наук. думка, 1971. -115 с. 43 Плесени в доме / Митрофанов B.C Козлова Я.И. // Проблеми медицинской микологии - 2004 Т.6, № 2 С. 10-18. 44

Роль биологического фактора в формировании условий труда на объектах агропромышленного комплекса / Цапко В.Г Стеренбоген М.Ю. // Медицина труда и промышленная экология - 1999 № 4. 45 Руководство к практическим занятиям по микробиологии / М.Н.Пименова, Н.Н. Гречушкина, Л.Г. Азова / Под ред. СЕ. Егорова М.: Изд-во МГУ, 1983 221с. 46 Саттон Д

Фотергилл А Ринальди М. Определитель патогенних и условно- патогенних грибов М.: Мир, 2001 468 с. 47 Сергеев А.Ю Маликов В.Е Сергеев Ю.В. и др Aspergillus clavatus: новий возбудитель онихомикоза // Материалы І Сьезда микологов. Сб. тезисов Москва, 2002 С. 339-340. 48 Факторы патогенности плесневых грибов, виделенных от больних с грибковыми заболеваниями

лор - органов / Буркутбаева Т.Н Тастанбекова Л.К. // Проблемы медицинской микологии - 2004 Т.6, №2, с. 64-65. 49 Хронические профессиональные заболевания бронхолегочной системи / Басанец А.В. // Журнал практичного лікаря - 2002 № 3 50 Эколого-гигиенические аспекты организации мониторинга жилой среды /

Губернский Ю.Д Калинина Н.В Мелышкова А.И. // Гигиена и санитария 1997 № 3 С.46-49. 51 Векірчик К.М Мікробіологія, Лабораторні роботи. К.: Вища школа,1976 100 с. 52 Віннікова О.І. Характеристика видового складу ґрунтових міксоміцетів та водоростей соснових насаджень борової тераси р. Сіверський Донець // Вісник Харківського національного аграрного університету

Сер. біологія 2002 № 9 С. 90-95. 53 Глибокий мікоз та рак легень, спричинені темнопігментованими мікроміцетами / Підгаєвська Т.П Суслов Є.І Кузовкова С.Д. // Лікарська справа-2001 № 4 С. 140-143. 54 Мікофлора грунтів соснових, березових і мішаних насаджень / Шеховцов О.Г Малєєва Н.Я Мокрицький В.Н. // Український ботанічний журнал - 1982 Т.38 №1. 55

Bisset, J. (1984) A revision of genus Trichoderma. I. Section sect. nov. -Canadian journal of Botany 62, 924-931. 56 Bisset, J. (1991) A revision of genus Trichoderma. II. Infragenetic classification Canadian journal of Botany 69, 2357-2372. 57 Bisset, J. A revision of genus

Trichoderma. III. Section Pachybasium. -Canadian journal of Botany 69, 2373-2417.) 58 Gorny R.L, Reponen T Willeke K. Fungal fragments as indoor air biocontaminants // Appl. Environment. Microbiol 2002 Vol. 68,№7 P.3522-3531. 59 Hawks worth D.L Sutton B.C Ainsworth G.S. Dictionary of the fungi. -

Kew, 1983 446 p. 60 He fundamentals of mold-related illness / Fung F, William G. Hungson // web exclusive, June 2003, Postgraduate medicine 61 Hunter C.A Grant B Flannigan B. et al. Mould in buildings: the air spora of domestic dwellings // Int. Biodeterior 1988 Vol.24 -P.81-101. SUMMARY 165 air samples from 8 dwelling and undwelling places

were examined from December 2004 to February 2005. Samples were collected by the open Petri dish method. Aeromycota of Kharkov dwellings is represented by at least 39 species and 8 genera of micro fungi. Allergenic species comprised about 33,3% , opportunistic ones - about 38,5 %. The most abundant fungal genera were Penicillium (38,5%) and

Aspergillus(15,4%) followed in abundance by Cladosporium (12,8 %). Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. ustus, Penicillium coeruleo-viride, P. glabrum, P. tardum, P. variabile, Cladosporium herbarum have been dominant species. SUMMARY Ключевые слова микромицеты, микрофлора, аллергия. Работа посвящена изучению и анализу воздушной микофлоры жилых и нежилых помещений города

Харькова. Определен видовой состав воздушной микофлоры исследованных помещений. Определена доля аллергенных и условно аллергенных видов микромицетов среди всех выделенных. Выявлены наиболее часто встречающиеся виды микромицетов воздушной микрофлоры помещений.