Определение активности «Энрофлона®» при бактериальных болезнях птицы. А.Н. Борисенкова, Т. Н.Рождественская, А.Ф. Новикова ВНИВИП Е.Н. ЕлисееваФирма «ВИК – здоровье животных» Антибиотики представляют собой самую многочисленную группу лекарственных средств. Так, в России в настоящее время используют 30 различных групп антибиотиков, а число препаратов (без учета дженериков) приближается к 200. На сегодняшний день, серьезной альтернативой антибиотикам широкого спектра действия, является фторхинолоны. Одновременно с появлением на российском рынке зарубежных препаратов на основе фторхинолонов, компанией «ВИК - здоровье животных» в 1994 году начато производство отечественного препарата, не уступающего по своему качеству зарубежным аналогам, под названием Энрофлон - действующим веществом которого является энрофлоксацин. Все антибиотики, несмотря на различия химической структуры и механизма действия, объединяют уникальные качества. Во-первых, в отличие от большинства других лекарственных средств, их мишень-рецептор находится не в тканях животных, а в клетке микроорганизма. Во-вторых, активность антибиотиков не постоянная, а снижается со временем, что обусловлено формированием лекарственной устойчивости (резистентности). Антибиотикорезистентность - неизбежное биологическое явление, и предотвратить ее практически невозможно. В-третьих, антибиотикорезистентные микроорганизмы представляют опасность не только для пациента, у которого их выделили, но и для многих других макроорганизмов, даже разделенных временем и пространством. Поэтому борьба с антибиотикорезистентностью в настоящее время приобрела глобальные масштабы. Основой терапевтического действия антибактериальных препаратов является подавление жизнедеятельности возбудителя инфекционной болезни в результате угнетения более или менее специфичного для микроорганизмов (прокариот) метаболического процесса. Угнетение происходит в результате связывания антибиотика с мишенью, в качестве которой может выступать фермент или структурная молекула микроорганизма. В последние годы накапливаются данные о широком распространении среди грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов устойчивости, связанной с активным выведением хинолонов. У штаммов с высоким уровнем устойчивости к фторхинолонам этот механизм часто сочетается с модификацией мишеней. Для каждого возбудителя инфекции необходимо определять его чувствительность к антибиотикам в том случае, когда она не может быть достоверно предсказана на основании идентификации микроорганизма и знаний о его природной чувствительности или резистентности к антимикробным препаратам. Современные способы определения чувствительности к антибиотикам основаны на двух основных принципах: серийных двойных разведениях антибиотика в жидкой или твердой питательной среде; диффузии антибиотика в агар (диско-диффузионный метод и метод Е-тестов). Оба эти метода использовали для определения чувствительности 61 культуры 10 видов микроорганизмов к энрофлоксацину, производимому фирмой «ВИК – здоровье животных» и известному под торговой маркой «Энрофлон®». Для проведения работы взяли культуры, выделенные от здоровых кур (смывы с тушек в убойном цехе), из пораженных органов от вынужденно убитых птиц, из трупов, групповых проб помета от живых кур и музейные культуры, хранящиеся в отделе микробиологии ВНИВИП. Были представлены Escherichia coli - 22, Salmonella enteritidis - 6, Сitrobacter freundii –7, Klebsiella pneumoniae – 7, Providensia stuartii – 1, Pseudomonas aeruginosa – 1, Proteus vulgaris – 9, Staphilococcus aureus – 5, Streptococcus zooepidemicus – 2, Pasteurella multocida - 1 культура.При диско-диффузионном методе использовали диски с энрофлоксацином, изготовленные промышленным способом в Научно - исследовательском центре фармакологии (НИЦФ). По данным фирмы – производителя, в одном диске содержится 5γ активного вещества. В качестве питательной среды применяли мясо-пептонный агар (рН 7,2) в чашках Петри по 25 мл в одной чашке. Посевным материалом служили 20 - часовые бульонные культуры. На поверхность агара наливали 1 – 2 мл бульонной культуры, равномерно распределяя ее, после чего 15 минут приоткрытые чашки подсушивали при комнатной температуре. После 18-часовой инкубации в термостате при 37 ºС учитывали диаметр зоны задержки роста. Из представленных в таблице данных видно, что 13 культур микроорганизмов (25%) имели зону задержки роста от 25 до 35 мм, 20 (38,5%) - 18 - 24 мм, 13 (25%), в основном из групповых проб свежего помета цыплят и кур, - 14-16 мм, 6 (11,5%) – 11-13 мм. Наибольшую зону задержки роста выявили у Klebsiella pneumoniae, Str. zooepidemicus и музейных штаммов E. coli и S. еnteritidis. При вычислении процентов результаты чувствительности протея были исключены. Средние статистические данные по видам микроорганизмов получили математической обработкой данных. С этой целью использовали компьютерную программу расчета средних значений – М, среднеквадратических отклонений ошибок оценки средних значений – σ, доверительного интервала для среднего значения – m и проверки достоверности различия средних значений по критерию Стьюдента (Г.Ф. Лакин,1980). Методом серийных разведений определили МПК культур E. coli, S. enteritidis и Staph. aureus (музейные штаммы, давшие зоны задержки 26-28 мм при оценки методом дисков) и одной культуры E.coli, выделенной из помета, с зоной задержки 15 мм. Для этого использовали 10%-ный раствор Энрофлона®, сделали 21 разведение от 5% (10 000γ активного вещества) до 0,000032% (0,0625γ активного вещества). У 3 культур (E. coli, S. enteritidis, Staph. aureus), которые дали зону задержки 26-28 мм, МПК была в 2 раза выше и составляла 0,00025 % (0,125γ). В пробирках, следующих за теми, где разведение препарата соответствовало МПК, отмечали менее интенсивный рост культур, чем в контрольных (без добавления Энрофлона®). При подсчете колоний из этих пробирок установили, что в 1 мл E.coli cодержится 17,3 · 105 м.к., S. enteritidis – 24 · 105, Staph. aureus 48 · 104 м.к. против 8 · 106 - 1· 108 м.к. в контроле. Очевидно, что при уменьшении дозы Энрофлона® отмечают бактериостатический эффект. Таким образом, 88,5% штаммов чувствительны и высокочувствительны к энрофлоксацину и только 11,5% штаммов были малочувствительны. Исключение представляют культуры Proteus vulgaris, которые оказались нечувствительны к препарату. Оптимальная доза для животных (свиньи, телята, ягнята) составляет 2,5 мг на 1 кг массы тела. Повышение дозы в два раза, до 5 мг на кг, приводит не к двукратному, а менее чем 1,5 кратному увеличению концентрации Энрофлона в крови. Поэтому только при очень тяжелом течении болезни целесообразно увеличивать дозу до 5 мг на кг веса. В птицеводстве Энрофлон применяется цыплятам в 1-3 сутки жизни в дозе 0,5 г/л воды и далее курс лечения необходимо повторять исходя из эпизоотических данных, клинической картины и результатов серодиагностики и патологоанатомического вскрытия что позволяет существенно сократить прямые потери и значительно снизить затраты на применение Энрофлона.Важной особенностью Энрофлона является возможность его использования до выделения и типирования возбудителя заболевания, применения при смешанных инфекциях. Энрофлон хорошо всасывается из мест введения. Максимальная концентрация его в органах и тканях достигается уже через 1-2 часа, а на терапевтическом уровне сохраняется 24 часа, что позволяет вводить его раз в сутки. ЭНРОФЛОН производится в нескольких формах: 10% порошок, 10% оральный раствор, 2,5 %, 5% и 10% инъекционный раствор, что позволяет максимально адаптировать введение препарата к технологии выращивания животных и птицы, значительно облегчаяя работу ветеринарного врача. Несмотря на полученные хорошие результаты чувствительности у некоторых микроорганизмов имеется тенденция развития резистентности к фторхинолонам, к ним относятся Klebsiella, Pseudomonas, некоторые виды Enterococcus и Staphilococcus. При назначении препарата в каждом конкретном случае необходимо проверять его чувствительность к исследуемым культурам.Применение Энрофлона®, произведенного фирмой «ВИК – здоровье животных», в птицеводстве перспективно, так как 88,5 % штаммов чувствительны и высокочувствительны. Применение препарата в строгом соответствии с наставлением при основных бактериальных болезнях птицы позволит замедлить развитие резистентных штаммов и продлить его эффективность.Более подробную информацию по препаратам фирмы «ВИК – здоровье животных» можно получить по тел.: (095) 777-60-81, (095) 937-72-30.^ Определение чувствительности к энрофлоксацину методом дисков Виды культур Число культур ^ Диаметр задержки, мм E. coli 1 26 1 25 1 24 1 22 1 21 7 19 2 18 Mm 20,51,43 3 16 4 15 1 12 Mm 150,92 S.enteritidis 1 26 1 25 1 21 Mm 243,05 1 15 1 14 Mm 14,670,66 ^ P. stuartii 1 27 1 28 Staph. aureus 1 19 Mm 23,59 1 15 1 12 1 11 Mm 12,672,9 C.freundii 1 24 1 21 1 19 1 18 Mm 20,5 1 15 2 14 Mm 14,670,66 ^ K. pneumoniae 1 35 1 32 1 30 1 26 1 14 1 13 Mm 13,51 ^ P. aerugiosa 1 22 P. vulgaris 6 0 P.mirabilis 1 11 2 7 Mm 8,32,6 Strep. zooepidemicus 2 26 P. multocida 1 20