--PAGE_BREAK--35 Оценка спермы по густоте и подвижности спермиев
Для исследования спермы под микроскопом от общего объема берут 2-3 мл в стерильный флакон из-под антибиотиков. Микроскопическая оценка спермы проводится на определение подвижности, концентрации и выживаемости спермиев.
Стерильной пипеткой или стеклянной палочкой наносят на чистое сухое предметное стекло каплю спермы и накрывают ее покровным стеклом, переносят на предметный столик микроскопа, помещенный в специальный термостат с температурой 40-42°С, или на нагревательный столик, и оценивают сперму при увеличении микроскопа в 200-300 раз. В одной капле спермы под микроскопом одновременно определяют густоту и подвижность спермиев.
Густота спермы, определяемая при глазомерной микроскопической оценке, дает приблизительное представление о количестве спермиев в 1 мл эякулята. Это субъективная оценка, ошибка может достигать 25-30%.
Густая сперма(условное обозначение Г) соответствует концентрации 200 млн. и больше спермиев в 1 мл — все поле зрения микроскопа густо заполнено спермиями.
Средняя сперма(условное обозначение С) соответствует концентрации от 100 до 200 млн. спермиев в 1 мл – заметны промежутки между спермиями.
Редкая сперма(условное обозначение Р) соответствует концентрации менее 100 млн. спермиев в 1 мл – заметны большие промежутки между спермиями.
Глазомерная оценка концентрации спермы по густоте расположения спермиев ориентировочна и по ней не может быть установлена степень разбавления спермы.
Оценку спермы по подвижности спермиев проводят по десятибалльной системе. Оценка спермы в баллах отражает процент подвижных спермиев.
Наивысшую оценку – 10 баллов дают сперме в том случае, если все спермии обладают поступательным движением; при оценке 9 баллов 9 спермиев из 10 обладают прямолинейно-поступательным движением, при оценке 6 баллов – 6 из 10 и так далее.
Для искусственного осеменения используют свежеполученную и сохраненную при 00С сперму производителей с подвижностью в баллах:
баран — 10-8
бык — 10-8
жеребец — 10-6
хряк — 10-7
Сперма быка, хранившаяся при температуре –1960С в жидком азоте, должна иметь активность не ниже 3 баллов.
Сперма с манежными и колебательными движениями спермиев балльной оценки не получает. Сперму только с колебательными движениями спермиев обозначают буквой К, мертвую сперму — буквой Н (некроспермия).
37 Оценка качества спермы по интенсивности их дыхания (по Н.П. Шергину) и подсчет процента живых и мертвых спермиев методом дифференцированного окрашивания (по В.А. Морозову)
Оценка спермы по интенсивности дыхания
Необходимые для этого приборы и материалы.Микроскоп, стеклянная трубка диаметром 0,8-1,0 мм (можно использовать трубку от шприца-катетера), предметные стекла, 2 глазные пипетки, стеклянные палочки, песочные часы, 0,01%-ный раствор метиленовой синьки, белая бумага, салфетки.
Активность спермы оценивают по скорости обесцвечивания (восстановления) метиленовой синьки, смешанной со спермой (методика Н.П.Шергина).
При дыхании спермии потребляют кислород, растворенный в смеси, в результате этого синька обесцвечивается. Интенсивность дыхания зависит от концентрации и активности спермиев. Спермии, способные к прямолинейно-поступательному движению, имеют более высокую активность жизненных процессов и дыхания. Следовательно, чем выше концентрация спермиев и чем большее их количество способно к прямолинейно-поступательному движению, тем быстрее расходуется кислород, скорее происходит обесцвечивание метиленовой синьки и, соответственно, выше качество спермы.
Оценку качества свежеполученной спермы по скорости обесцвечивания метиленовой синьки проводят при температуре 18-220С, т.к. понижение температуры замедляет интенсивность энергетических процессов и дыхания спермиев. При снижении температуры на 100С интенсивность дыхания уменьшается примерно вдвое, а при 00С почти прекращается.
Приготовление 0,01%-ного раствора метиленовой синьки. 0,5 г синьки растворяют в 200 мл 1%-ного раствора хлористого натрия и настаивают три дня. Затем готовят рабочий раствор: к 1 части раствора синьки добавляют 9 частей 1%-ного раствора хлористого натрия.
На предметное стекло глазной пипеткой нанести по одной капле краски и спермы и быстро смешать их стеклянной палочкой. Смесь набрать в стеклянную трубочку, чтобы столбик ее был длиной около 2 см. Трубку положить на лист белой бумаги и наблюдать за обесцвечиванием синьки. Обычно она обесцвечивается в середине столбика. На концах столбика могут оставаться голубые кольца, т.к. с концов смесь постоянно обогащается кислородом воздуха. О качестве спермы судят по показателям, приведенным в табл.1
Таблица 1
Качество спермы
Время обесцвечивания метиленовой синьки (мин.) спермиями
быка
барана
Хорошее
5-10
3-7
Среднее
11-30
8-12
Плохое (непригодное для искусственного осеменения)
более 30
более 12
Для оценки качества спермы жеребца и хряка этот метод не используется, поскольку обесцвечивание смеси метиленовой синьки со спермой затягивается до 60 минут.
Определение процента живых спермиев
Приборы и материалы.Микроскоп, обезжиренные предметные стекла, шлифованные покровные стекла, пипетки, стеклянные палочки, раствор эозина, 96%-ный спирт, салфетки.
Оболочка спермиев, у которых энергично протекают обменные процессы, не пропускает в протоплазму лабораторные краски, поэтому живые спермии не окрашиваются. Мертвые и ослабленные с колебательным движением спермии легко пропускают краску внутрь и, следовательно, окрашиваются этой краской.
Наличие в сперме мертвых и патологически измененных спермиев снижает качество спермы.
Наличие в сперме патологических (уродливых) форм спермиев выше допустимого называется тератоспермией.
Выделяют две группы патологических форм спермиев:
1) с изменением величины и формы головки – гигантские, карликовые, двухголовые, с круглой, грушевидной головкой и др.;
2) с изменениями формы хвоста. Можно также обнаружить спермии с утолщением в области шейки, тела и хвоста в виде протоплазматической капли (незрелые сперматозоиды).
Способы подготовки обезжиренных стекол.
1. Чистые стекла выдерживают в смеси спирта и эфира (соотношение 1:1) в течение суток. Затем извлекают и протирают насухо.
2. После тщательного мытья в растворе детергента предметные стекла промывают в дистиллированной воде, протирают, заворачивают в бумагу и выдерживают в сушильном шкафу не менее 30 минут.
3. Полевой способ. На холодную поверхность электроплиты помещают в один слой чистые стекла. После того как стекла раскалятся, плиту выключают. Дают стеклам остыть.
продолжение
--PAGE_BREAK--