Введение
МЗРФ
ДВГМУ
Кафедра общей, физической и коллоиднойхимии
Реферат
Тонкослойная хроматография. Применение в фармации
Выполнил: студент группы 201-Ф
Данилов Д. И.
Проверил: НемовВ. А.
г. Хабаровск, 2005
ПЛАН:
Введение
Физико-химические основы ТСХ
Распределительная хроматография на бумаге
Основы тонкослойной хроматографии сорбенты растворители подготовка пластин техника нанесения исследуемых растворов
Хроматографирование
·
·
·
· Сушка пластин.Идентификация разделенных веществ
Применение метода ТСХ вфармацииКоличественное определение тритерпеновых сапонинов методом ВЭТСХ с использованием сканирующей денситометрии Изучение липидного и флавоноидного состава образцов некоторых видов рода Чина (Lathyrus.)
Заключение
ЛитератураВведение
Тонкослойная хроматография(ТСХ, TLC) — один из наиболее используемых методов хроматографического анализа,но наименее популяризируемый.
Несмотря насуществовавшие до недавнего времени существенные недостатки, она широкоиспользуется для качественного анализа смесей, в основном, за счет дешевизны искорости получения результатов. Тонкослойнаяхроматография (ТСХ) первоначально была разработана для разделения липидов. Хотяхроматография на бумаге быстрее, чем хроматография на колонке, к недостаткам ееследует отнести то, что бумага может быть изготовлена только из материалов наоснове целлюлозы, что не позволяет применять ее для разделения неполярныхвеществ. Тонкослойная хроматография сохраняет все преимущества хроматографии набумаге, но при этом позволяет использовать любой материал, который можно тонкоизмельчить и получить затем однородный слой. Это могут быть неорганическиевещества, например силикагель, окись алюминия, диатомовая земля и силикатмагния, а также органические вещества, в частности целлюлоза, полиамиды ипорошок полиэтилена.Физико-химические основы тонкослойнойхроматографии.
Основойтонкослойной хроматографии является адсорбционный метод, хотя также встречаетсяметод распределительной хроматографии.
Адсорбционныйметод основан на различии степени сорбции-десорбции разделяемых компонентов нанеподвижной фазе. Адсорбция осуществляется за счет ван-дер-вальсовских сил,являющейся основой физической адсорбции, полимолекулярной (образованиенескольких слоев адсорбата на поверхности адсорбента) и хемосорбцией(химического взаимодействия адсорбента и адсорбата).
Для эффективныхпроцессов сорбции-десорбции необходима большая площадь, что предъявляетопределенные требования к адсорбенту. При большой поверхности разделения фазпроисходит быстрое установление равновесия между фазами компонентов смеси и эффективноеразделение.
Еще одним видомиспользуемом в методе тонкослойной хроматографии является распределительнаяжидкостная хроматография.
В распределительнойхроматографии обе фазы — подвижная и неподвижная — жидкости, не смешивающиесядруг с другом. Разделение веществ основано на различии в их коэффициентахраспределения между этими фазами.
Впервые методтонкослойной хроматографии заявил о себе как «Бумажная тонкослойнаяхроматография», которая основывалась на распределительном методеразделения компонентов.Распределительнаяхроматография на бумаге.
В связи с тем,что используемая в этом методе хроматографическая бумага (специальные сортафильтровальной бумаги) содержат в порах воду (20-22%), в качестве другой фазыиспользуются органические растворители.
Использованиехроматографии на бумаге имеет ряд существенных недостатков: зависимостьпроцесса разделения от состава и свойств бумаги, изменение содержания воды впорах бумаги при изменении условий хранения, очень низкая скоростьхроматографирования (до нескольких суток), низкая воспроизводимостьрезультатов. Эти недостатки серьезно влияют на распространение хроматографии набумаге как хроматографического метода.
Поэтому можносчитать закономерным появление хроматографии в тонком слое сорбента — тонкослойной хроматографии.Основытонкослойной хроматографии.
В методе ТСХхроматографирование веществ происходит в тонком слое сорбента, нанесенного натвердую плоскую подложку. Разделение в этом методе в основном происходит наоснове сорбции-десорбции.
Использованиеразличных сорбентов, позволило значительно расширить и улучшить этот метод.
В начале появленияметода пластины приходилось изготавливать самостоятельно. Но на сегодняшнийдень в основном используются пластины заводского изготовления, имеющиедостаточно широкий ассортимент как по размерам и носителям, так и по подложкам.
Современнаяхроматографическая пластинка представляет собой основу из стекла, алюминия илиполимера (например политерефталат). В связи с тем, что стеклянная основастановится менее популярной (часто бьется, нельзя разделить пластинку нанесколько частей не повредив слой сорбента, тяжелая по весу), наибольшеераспространение получили пластины, в качестве основ которых используюталюминиевую фольгу или полимеры.
Для закреплениясорбента применяют гипс, крахмал, силиказоль и др., которые удерживают зернасорбента на подложке. Толщина слоя может быть различна (100 и более мкм), носамый важный критерий — слой должен быть равномерный по толщине в любом местехроматографической пластинки.Сорбенты
Наиболеераспространенным сорбентом является силикагель.
Силикагель — гидратированная кремниеваякислота, образующаяся при действии минеральных кислот на силикат натрия исушкой образовавшегося золя. После размалывания золя используют фракциюопределенной зернистости (указанную на пластинке, обычно 5-20 мкм).
Силикагель являетсяполярным сорбентом, у которого в качестве активных центров служит группы -ОН.Он легко сорбирует на поверхности воду и образует водородные связи.
Окись алюминия. Окись алюминия является слабоосновным адсорбентом и используется в основном для разделения соединенийслабоосновного и нейтрального характера. Недостатком пластин на окиси алюминияявляется обязательная активация поверхности перед использованием в сушильномшкафу при высокой температуре (100-150 0С) и низкая, по сравнению ссиликагелем адсорбционная емкость слоя.
Кизельгур — адсорбент, полученный из природныхминералов: диатомовых земель. Сорбент обладает гидрофильными свойствами, ноболее низкой адсорбционной емкостью слоя по сравнению с силикагелем.
Кремнекислый магний менее полярный чемсиликагель и обычно используется в случаях, когда более полярные адсорбенты недали эффективного разделения.
Целлюлоза — тонкослойные пластины с нанесеннойцеллюлозой очень эффективны для разделения сложных органических молекул.Адсорбент представляет собой в основном шарики целлюлозы диаметром до50 мкм,закрепленные на носителе крахмалом. Но как и в бумажной хроматографии, подъемфронта растворителя происходит очень медленно.
В ионообменных хроматографических пластинках вкачестве адсорбента используют ионообменные смолы, содержащие четвертичныйаммоний или активные сульфогруппы, участвующие в ионном обмене. Тонкослойнаяхроматография с такого типа пластинками, проводится с подвижными фазамисодержащими сильные кислоты или щелочи. Данные пластинки эффективны дляразделения высокомолекулярных и амфотерных соединений.
Вышеперечисленныесорбенты являются наиболее распространенными, но помимо этих существуютмножество веществ, используемых как сорбенты. Это тальк, сульфат кальция,крахмал и т.д..
В то же время дажеуже указанные сорбенты могут быть модифицированы для придания им новыхсорбционных свойств (пропитка сорбентов реактивами, например AgNO3,создание пластин с обращенной фазой). Именно такое разнообразие возможных фазпри минимальных затратах позволяют использовать ТСХ для хроматографированияогромного числа веществ.Растворители
В тонкослойнойхроматографии, в качестве подвижной фазы используют либо чистые вещества(этилацетат, бензол и т.п.), либо смеси веществ (системы) в определенномсоотношении.
Подбор подвижнойфазы (системы) проводится по следующим правилам:
·
·
·
·
·
·
·
Эти рекомендациидают предварительную оценку выбранной системы. Последнее слово все равноостается за экспериментом.Подготовкапластин
Прииспользовании приобретенных пластин, для хроматографирования их необходимопредварительно подготовить. Это связано с тем, что адсорбенты пластин прихранении сорбируют не только влагу, но и другие вещества, содержащиеся ввоздухе. При использовании неподготовленных пластин в процессехроматографирования появляется фронт «грязи», который может мешатьопределению веществ, имеющие большие значения Rf, а некоторые вещества,например вода, может изменять состав подвижной фазы, изменяя тем самымполучаемые значения Rf.
Предварительная подготовка пластин заключается в разгонке пластин чистымрастворителем на всю высоту пластинки (метанол, бензол, диэтиловый эфир), споследующей сушкой пластины в сушильном шкафу при температуре 110-120 0С втечении 0,5-1 часа. Таким способом можно подготовить сразу несколько пластин ипри хранении их в сухом герметичном месте, сохраняют свои свойства несколькомесяцев.Техникананесения исследуемых растворов.
Как оказывается,нанесение исследуемого вещества не такая сложная операция, но вместе с тем, онаочень влияет на получаемые результаты хроматографирования.
Часто, исследованиюподвергаются либо жидкие анализируемые вещества, либо растворы твердых веществ,без какой либо предварительной пробаподготовки.
Поэтому необходимовсегда помнить ряд моментов, серьезно влияющие на результаты разделения.
Наиболее важнымявляется концентрация наносимых веществ. В ТСХ принято наносить концентрациирастворов около 1%. Но с другой стороны чувствительность метода позволяетопределять вещества с гораздо меньшими концентрациями.
Если в исследуемомвеществе неизвестна общая концентрация компонентов, или известна концентрацияно такого типа вещества еще не хроматографировали, нужно определить какоеколичество исследуемого раствора достаточно для качественного хромаграфирования.Существуют несколько приемов, позволяющие это определить.
Для началанужно нанести несколько пятен хроматографируемых растворов, равные по размеру,но с различным количеством (например 1, 2, 5 мкл) и после хроматографированияизучить форму и размеры разделенных пятен.
Так при правильноподобранной концентрации форма разделенных веществ такая же, как и формананесенной на линии старта. Если разделенные пятна имеют большие размеры, чемпятно на старте, то нанесенная концентрация слишком велика. Появление«хвостов», неправильная форма разделенных пятен на пластинке тожеможет говорить о высокой концентрации, но может быть вызвана неправильноподобранной хроматографической системой, либо химическим взаимодействиемразделяемых компонентов.
Подбором количествананесенного вещества и системы растворителей можно добиться полного разделенияна одной пластинке до десяти компонентов в исследуемых веществах. Удобно наноситьобразцы на специальном столике с трафаретами и подогревом. Нанесение пятенпроводят на «линии старта» 1-2 см от нижнего края пластинки. Этонеобходимо для того, чтобы при опускании пластинки в систему не происходилорастворение в ней образцов, а все нанесенное вещество подверглосьхроматографированию.
Нанесение растворовпроводят либо микрошприцом, либо отградуированными капиллярами. Размернаносимого пятна не должен превышать 4 мм. Это связано с тем, что при большемразмере пятна, происходит изменение формы под действием физических сил, да играницы разделенных компонентов могут перекрываться.
Нанесение напластины исследуемых веществ не должны сопровождаться разрушением сорбента (чтодовольно сильно влияет на качество разделения), поэтому капля должна наноситьсякасанием иглы или капилляра о слой сорбента, а не надавливанием. На размеробразующегося пятна влияет не только количества наносимого раствора, но и отполярности растворителя и его температуры кипения. Так при нанесении одного итого же вещества в различных растворителях, образовавшееся пятно в котором вкачестве растворителя использовался метанол будет больше, чем пятно от растворахлороформа. с другой стороны при подогреве подложки испарение растворителейбудет интенсивнее и размер пятна также уменьшается.
Конечно, прощеиспользовать при нанесении для подсушивания пятен фен, но только в том случае,когда есть полная уверенность, что наносимые вещества не будут окисляться поддействием горячего воздуха.
Расстояние междунаносимыми пятнами должно быть около 2 см.
Иногда прихроматографировании на пластинках наблюдается краевой эффект, в результате чегопятна располагаются не на одной линии а имеют вид подковы, либо по диагонали.Для устранения этого эффекта каждое пятно можно «снабдить» своейдорожкой, отделив нанесенный образец от других путем удаления линии сорбента.Это лучше всего делать под линейку острым предметом (типа скальпеля) ноосторожно, чтобы не удалить слишком много сорбента.
После нанесенияисследуемых веществ на пластинку, необходимо добиться полного удалениярастворителей, так как даже небольшое содержание растворителя в исследуемомвеществе может повлиять на разделение и даже изменить состав хроматографическойсистемы.
Удалениерастворителей обычно проводят естественной сушкой пластин 5-10 мин, либо принагревании феном или в сушильном шкафу.Хроматографирование
Тонкослойная хроматография имеет несколько способов, связанных, в основном,с видом движения растворителей.
·
·
·
· Восходящая тонкослойная хроматография
Этот видхроматографии наиболее распространен и основан на том, что фронтхроматографической системы поднимается по пластинке под действием капиллярныхсил, т.е. фронт хроматографической системы движется снизу-вверх. Для этогометода используется наиболее простое оборудование, так как в качествехроматографической камеры можно использовать любую емкость с плоским дном иплотно закрывающейся крышкой, в которую свободно помещается хроматографическаяпластинка.
Метод восходящей тонкослойнойхроматографии имеет ряд своих недостатков. Например, скорость поднятия фронтапо пластинке происходит неравномерно, т.е. в нижней части она самая высокая, апо мере поднятия фронта уменьшается. Это связано с тем, что в верхней частикамеры насыщенность парами растворителя меньше, поэтому растворитель схроматографической пластинки испаряется интенсивнее, следовательно уменьшаетсяего концентрация и скорость движения замедляется. Для устранения этогонедостатка по стенкам хроматографической камеры прикрепляют полоскифильтровальной бумаги, по которым поднимающаяся хроматографическая системанасыщает парами камеру по всему объему.
Некоторыехроматографические камеры имеют на дне разделение на две ванночки. Этоусовершенствование позволяет не только уменьшить расход хроматографическойсистемы (для получения необходимой высоты хроматогратографической системытребуется меньший объем) но и использовать дополнительную кювету длярастворителя, увеличивающего давления насыщенных паров в камере.
Недостатком такжеможно считать необходимость следить за фронтом растворителя, так как возможно«убегание» лини фронта растворителя до верхнего края. В таком случаеопределить действительное значение Rf уже не представляется возможным.Нисходящая тонкослойная хроматография
Этот методхроматографии основан на том, что фронт хроматографической системы опускаетсяпо пластинке в основном под действием сил тяжести, т.е. фронт подвижной фазыдвижется сверху вниз.
Для этого метода вверхней части хроматографической камеры крепится кювета с хроматографическойсистемой из которой с помощью фитиля на хроматографическую пластинку поступаетрастворитель, который стекает и происходит хроматографирование исследуемогообразца.
К недостаткам этогометода можно отнести усложнение оборудования. Этот метод используется восновном в бумажной хроматографии.Горизонтальная тонкослойная хроматография
Этот методнаиболее сложен в аппаратурном оформлении но наиболее удобен. Так, вхроматографической камере пластинка размещается горизонтально и подача системыпроисходит на один край пластинки с помощью фитиля. Фронт растворителя движетсяв противоположную сторону.
Есть еще один прием,позволяющий предельно упростить камеру. Для этого хроматографическую пластинкуна алюминиевой основе слегка изгибают и помещают в камеру. В данном случае системабудет поступать с двух сторон одновременно. Для этой цели подходят толькопластины с алюминиевой подложкой, так как пластиковая и стеклянная основа«несгибаема», т.е. не сохраняет форму.
К достоинствамэтого метода можно отнести то, что в горизонтальной кювете насыщениепарами системы происходит гораздо быстрее, скорость движения фронта постоянная.А при хроматографировании с двух сторон, фронт не «убегает»Радиальная тонкослойная хроматография.
Радиальнаятонкослойная хроматография заключается в том, что в центр пластинки наноситсяисследуемое вещество и туда же подается система, которая движется от центра ккраю пластинки.Сушкапластин.
После процессаразделения исследуемых веществ, пластинки сушат. Это тоже немаловажный процесс,так как при наличии на пластинке даже следов растворителя, возможно получитьнеправильные результаты хроматографирования.
Еслихроматографическая система имела в своем составе только легкокипящиекомпоненты, то достаточно естественной сушки в течении 3-5 минут. Если же всостав системы входят высококипящие жидкости (спирты, вода, органическиекислоты и т.д.), сушку пластин нужно проводить не менее 10 мин или помещатьпластинку в сушильный шкаф.Идентификация разделенных веществ.
Высушеннаяпластинка является хроматограммой исследуемых веществ. Если вещества являютсяокрашенными, то идентификация начинается с определения цвета разделенныхвеществ.
Но в большинствеслучаев разделяемые вещества бесцветны и простое визуальное сравнениеневозможно.
Для тонкослойнойхроматографии существует несколько видов качественного анализа (идентификации)разделенных веществ:
·
·
·
·
Рассмотрим подробнее каждый вид качественного анализа в тонкослойнойхроматографии.Физические методы
Визуальныеметоды используются в основном, для определения местоположения пятенразделенных веществ на хроматографической пластинке. Для этого пластинкурассматривают как в видимом свете, так и используя ультрафиолетовый свет (восновном свет с длиной волны 366 и 254 нм)
Это первый этапидентификации, на котором определяется качество подобранных условий иполученных результатов хроматографирования.
Так, определивкачество хроматографирования (отсутствие «хвостов» разделяемыхвеществ или перекрытие их пятен, правильную форму и размеры, отсутствие слиянияхроматографических дорожек и т.д.) и признании пригодным проведенногоразделения для дальнейшего исследования, определяют Rf выявленных пятен.Значение Rf.
Одним изосновных показателей в ТСХ является показатель Rf. Этот параметр являетсяаналогией времени удерживания и зависит как от свойств разделяемых веществ,состава подвижной фазы и сорбента, так и от физических параметров.
Определениезначения Rf проводят как отношение расстояния прошедшего веществом красстоянию, прошедшего фронтом растворителя
Rf = L/L0
Значение Rf — величина безразмерная и имеет значение от 0 до 1. Однако в литературе нередковстречается такие показатели как hRf, Rf×100, которые являются тем же Rf,но умноженными на 100, для того, чтобы не оперировать десятичными значениями.
На значение Rf невлияет расстояние пройденное фронтом растворителя, однако во многих методикахописывается прохождение фронта на расстояние 10 см. Это используется только дляоблечения расчетов Rf.
На практике, вначале определяют расстояние прошедшее фронтом растворителя: от линии старта (ане от края пластинки) до места, где находился фронт в момент окончанияхроматографирования. Затем определяют расстояние от линии старта до пятнаразделенного вещества. Во тут и оказывает влияние размер пятна! Ведь если пятноимеет круглую форму и небольшой размер, то полученное Rf имеет четкое значение.А если полученное пятно имеет большой размер или неправильную форму, то приопределении Rf такого пятна, ошибка может достигнуть 0,1!
В случаераспределительной хроматографии коэффициент распределения вещества и его Rfсвязано соотношением:
где Sп и Sн -площади поперечныхсечений подвижной и неподвижной фазы.
Как мы видим,Коэффициент распределения, при постоянном отношении Sп/Sн есть величинапропорционально зависящая от Rf, и может быть определена через него.Цветные реакции.
Цветные реакциив тонкослойной хроматографии используются чрезвычайно широко. Они служат нетолько для определения местоположения разделенных компонентов (обработка сернойкислотой, парами йода), но и определения как класса веществ, так иидентификации (при наличии индивидуальных реакций).
Мы не будем здесьрассматривать это огромное разнообразие цветных качественных реакций, скажемлишь, что при совпадении всех качественных реакций и совпадении полученныхзначений Rf вещества в трех различных системах с литературными данными,вещество идентифицировано. Хотя, на мой взгляд, необходимо дополнительноеподтверждение исследованием другим физико-химическим методом. Сравнение со свидетелем.
При проведенииисследований веществ с предполагаемым составом, применяют методхроматографирования со свидетелем — известным веществом. Этот методиспользуется кода трудно выдержать условия хроматографирования, нетлитературных данных Rf для данной системы или адсорбента, использованиеградиентного метода и т.д. Да и при проведении цветных реакций можно сравнитьне только цвета, но и оттенки исследуемых веществ и свидетелей, что такженемаловажно.
С другой стороныэтот метод требует дополнительных расходов на свидетели. Физико-химические методы идентификации.
Прелестьтонкослойной хроматографии состоит в том, что после хроматографирования каждоеразделенное вещество можно в дальнейшем исследовать другими методами гораздопроще. И дело тут не в том, что другие методы хроматографирования не могутэтого. Дело тут в сложности выделения и материальных затратах на специальныеприспособления, у которых только одна задача — выделить вещество.
В тонкослойнойхроматографии есть только одна трудность — снять слой сорбента и вымыть из неговещество. В дальнейшем можно его исследовать с использованием ИК иУФ-спектрометрии, рентгено-структурными методами, ЯМР и т.д.
Поэтому, используятонкослойную хроматографию для разделения смесей, можно не только исследоватькаждый компонент различными методами, но и наработать небольшое количество, втом числе и для свидетелей. Методыколичественного анализа
Количественныйанализ в тонкослойной хроматографии имеет несколько видов, характеризующийкаждый этап развития метода. И хотя некоторые методы можно применять только какполуколичественные, они до сих пор применяются на практике.
Методвизуального сравнения. Как говорилось выше, интенсивность окраски пятна иего размер от количества хроматографируемого вещества. Поэтому визуальноеколичественное определение построено на нескольких приемах.
Методразбавления. Этот метод заключается в том, что для каждого веществаопределяют предельную концентрацию, при которой вещество не может бытьопределено хроматографическим методом. При хроматографировании исследуемоговещества поводят разбавление до тех пор, пока оно перестает проявляться напластинке.
Содержание веществаС, определенное таким методом находят по формуле:
C=an
где n-разбавление, а-концентрациявещества, при котором оно не проявляется при хроматографировании.
Методопределения площади пятна. Если наносить одинаковые объемы исследуемыхвеществ и свидетелей, то получившиеся после хроматографирования площади пятенпропорциональна логарифму концентрации вещества. S=alnc + b
где а и b — эмпирические коэффициенты,определяемые экспериментальным путем.
Если пятноразделенного вещества имеет резкие границы, то площадь пятна можно определитьвесовым методом (вырезать пятно и взвесить), замеряется планиметром. Этот методдает ошибку до 10-15%.
Однако он имеет рядсущественных недостатков. Первый и самый существенный в том, что таким образомможно определять концентрацию окрашенных веществ или имеющих флуоресценцию в УФобласти (254, 366 нм). Этот недостаток можно устранить добавлением всорбент различных люминофоров, то при этом увеличивается погрешностьопределения.
Обработка пластинпроявляющими веществами (реактивами) также может быть использована (напримериспользование фильтровальной бумаги пропитанной проявляющим реагентом споследующим контактом с хроматографической пластинкой и дальнейшим определениемна ней площади проявленного вещества), но погрешность определения также высока.
Необходимость болеедостоверного результата количественного определения привела к использованиюинструментальных методов.
Методэлюирования. Этот метод заключается в том, что разделенное вещество смываютс сорбента растворителем и определяют его концентрацию уже другими методами — фотометрическими, полярографическими и т.д. Это достаточно точный метод, нотолько при условии количественного выделения разделенного вещества. Из-завысокой трудоемкости метод используется достаточно редко и неприемлем прибольшом количестве исследуемых образцов.
Фотографическийметод определения заключается в фотографировании пластинок с разделеннымвеществом и дальнейшим определением степени почернения, с использованиемдесинтометров.
Радиографическийметод аналогичен фотометрическому, только с той разницей, что определяетсяпочернение пластинки, вызванное излучением разделенного вещества. Этот методиспользуется только при определении веществ с меченными атомами.
Фотодесинтометрическийметод может быть использован без выделения вещества с пластинки и основанна определении не только площади пятна, но и его интенсивности.
Это наиболее точныйметод определения концентрации веществ, так как позволяет при использованиикалибровочных графиков, проводить достаточно точные количественные определениявсех разделенных веществ (до 2-10%) непосредственно на пластинке за короткийпромежуток времени.
Неудивительно, чтопри развитии тонкослойной хроматографии, применение десинтометровувеличивается, чувствительность и, следовательно, точность определенияконцентрации разделенных веществ повышается и приближается к точностивысокоэффективной жидкостной хроматографии.
Рис.1. Типичная камера для проявления хроматографической пластинки с тонким слоем
крышка стеклянная камера пластинка ТСХ сорбент место нанесения пробы растворитель ТипичнаяТСХ хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот.
Нахроматограмме FAME = fatty acids methyl esters = метиловые эфиры жирныхкислот. Start = точка нанесения разделяемых смесей.
Хроматограммавыполнена на пластинке Sorbfil. Система — бензол. Проявление — обугливаниепосле опрыскивания серной кислотой.
Точка 1 — метиловые эфиры жирных кислот. Точка 2 — продукты метилирования общихлипидов.
Стрелкой показано направление движения фронта растворителя(системы). Фронт растворителя при хроматографировании двигался до верхнего краяпластинки.
Применение метода ТСХ в фармации
Большоезначение хроматографических методов для фармации связано с тем, что при производстве лекарств во многих случаяхтребуется предварительное выделение природных или синтетических продуктов вчистом виде. Проведение анализов также часто основано на разделении смесей накомпоненты. Рассмотрим два примера применения метода ТСХ, доказывающих его значимость в анализе ипроизводстве лекарственных веществ.
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИТЕРПЕНОВЫХ САПОНИНОВ МЕТОДОМВЭТСХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СКАНИРУЮЩЕЙ ДЕНСИТОМЕТРИИ
Тритерпеновые сапонины (гликозиды)являются действующимн веществами многих лекарственных препаратов.
Большая часть применяемых в настоящеевремя методик количественного определения тритерпеновых сапонинов основана накислотном гидролизе последних с дальнейшим определением агликона чаще всеготитрометрическими, реже — спектральными методами анализа.
Подобные методики, основанные наразрушении молекул сапонинов, имеют ряд недостатков. Они длительны, непозволяют количественно оценить соотношение индивидуальных сапонинов всуммарных сапонинсодержащих препаратах.
В большинстве случаев авторыограничиваются, как правило, качественной оценкой, используя метод ТСХ,наиболее доступный и простой хроматографическнй метод анализа. Применение ТСХдля определения количественного содержания компонентов сдерживаетсяотсутствием сканирующих денситометров.
В настоящей работе приведенырезультаты количественного ТСХ-определения некоторых тритерпеновых сапонинов,производных олеаноловой кислоты, в фармпрепаратах и извлечениях израстительного сырья.
В качестве объектов исследования намибыли выбраны тритерпеновые сапонины аралии маньчжурской (аралозиды).качественное определение которых в различных объектах освещено в работах, атакже тритерпеновые сапонины сахарной свеклы — вещества с предварительноустановленной фармакологической активностью. И те, и другие являютсяпроизводными олеаноловой кислоты с небольшим (не более четырех) количествомсахарных остатков, что предполагает их сходное поведение в тонком слое сорбента
В качестве стандартов использовалисумму аралозидов, выделенных из таблеток «Сапарал» и сумму сапониновсахарной свеклы, выделенных из свежеубранных корневищ. Для нанесения напластину готовили водно-спиртовые (80 % по этанолу) растворы сапонинов ссодержанием последних 0,4 — 2,0 мг/мл. Хроматографирование проводили сиспользованием пластин для ТСХ «Силуфол» (Чехия) 15 х 15 см,«Армсорб» для ВЭТСХ (Армения) 6 х 10 см и «Сорбфил»(Россия) 10 х 10см. Высота подъема фронта, достаточная для полного разделения,