На правах рукописи Скуридин Геннадий Михайлович Анализ сопряжённой изменчивости количественных признаков облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.)Генетика – 03.00.15Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наукНовосибирск – 2007 Работа выполнена в лаборатории экспериментального мутагенеза Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск. Научный руководитель: доктор биологических наукПривалов Григорий Фёдорович Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессорВасильева Любовь Антоновна Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.доктор биологических наук, профессорЦильке Регинальд Александрович Новосибирский Государственный аграрный университет, Сибирский НИИ растениеводства и селекции, г. НовосибирскВедущее учреждение: Центральный Сибирский ботанический сад СО РАН, г. Новосибирск.Защита диссертации состоится «____» _____________ 2007 г. на утреннем заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание учёной степени доктора наук (Д – 003.011.01) в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале института по адресу: 630090, Новосибирск-90, Проспект Лаврентьева, 10. Телефакс: (383)-333-12-78, е-mail: dissov@bionet.nsc.ruС диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.Автореферат разослан «____»_________________ 2007 г. Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Груздев А.Д.^ Общая характеристика работы Актуальность проблемы. Интерес к селекции облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.) не ослабевает в связи с уникальностью её лечебно-профилактического значения. Создание нового сорта облепихи традиционными методами по времени сравнимо с продолжительностью человеческой жизни. Отбор по генетически коррелированным признакам позволяет существенно ускорить этот процесс, о чём свидетельствует опыт выдающихся селекционеров прошлого - Л. Бербанка, И.В. Мичурина и других, широко применявших интуитивно найденные закономерности генетического сопряжения признаков. Цель и задачи работы: выявление и содержательный анализ закономерностей сопряжения количественных признаков, обусловленного генетическим и экологическим фактором изменчивости вида Hippophae rhamnoides L. Для достижения этой цели решались следующие задачи:Разработка эффективной химико-аналитической базы по важнейшим параметрам селекции.Выбор корректного приёма стандартизации разнородных данных.Выявление корреляционных закономерностей, обусловленных генетической и экологической вариацией признаков.Факторный анализ корреляционных закономерностей.Интерпретация выявленных закономерностей, рекомендации для практики.Научная новизна исследования. Впервые для выявления генетической и экологической корреляции количественных признаков облепихи использован случайный массив разнородных данных. Впервые выявлены закономерности генетического и экологического сопряжения количественных признаков облепихи, определены узловые признаки корреляционных плеяд. Впервые методом факторного анализа выделены генетические и экологические факторы сопряжения признаков облепихи и дана их биологическая интерпретация. Создана уникальная методика химического анализа, предназначенная для серийной оценки селекционного материала по комплексу биологически активных веществ (авторские свидетельства №785764, №967483 и №1354106).Положения, выносимые на защиту. Использованный приём линейной коррекции данных по факторам изменчивости позволяет выявлять генетические и экологические закономерности сопряжения признаков, скрытые в фенотипе, что существенно повышает информационную отдачу исходных данных. Выявленные закономерности допускают содержательную интерпретацию, что позволяет дать обоснованные рекомендации для возделывания и селекции облепихи.Научно-практическая значимость работы. Выявленные генотипические закономерности сопряжения определяют ключевые признаки, по которым можно вести отбор с прогнозом эффекта по другим признакам. Так, отбор на высокое содержание сухих веществ должен благоприятствовать выявлению форм, перспективных по другим показателям качества – содержанию сахаров, суммы липидов, каротинов и других неомыляемых веществ. Отбор на высокое содержание каротинов (уровень пигментации плодов) повышает долю растений с высокой фармакологической активностью их масла, обусловленную всем комплексом неомыляемых веществ. Экологические корреляционные закономерности дают обоснование для создания оптимальной технологии возделывания облепихи. Снятие основных лимитирующих факторов роста масличности плодов: освещённости и водного дефицита в первой половине вегетации, должны обеспечить более полную реализацию генетического потенциала сортов облепихи по другим биологически активным липидам: каротинам, стеринам, токоферолам и т.д.Апробация работы. Материалы диссертации были представлены в виде докладов на III международном симпозиуме по облепихе (1998, Улан-Удэ), международной конференции по генетическим коллекциям, изогенным и аллоплазматическим линиям (2001, Новосибирск), международной конференции по прикладным проблемам (2001, Новосибирск), на I Конгрессе Международной Ассоциации по облепихе (Берлин, 2003) и на 38-м международном рабочем совещании по передовым технологиям (Сендай, Япония, 2006). Публикации. По теме диссертации опубликовано 36 печатных работ, включая 3 авторских свидетельства на изобретения.Объём и содержание диссертации. Диссертация изложена на 102 страницах машинописного текста, включает 15 рисунков, 10 таблиц, список литературы из 189 наименований, в том числе 21 на иностранном языке. Она состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования и полученных результатов, обсуждения, заключения и выводов.^ Содержание работы Закономерности генетической сопряжённости признаков у облепихи до сих пор не исследованы. Для их выявления необходимо обеспечить генетическую вариацию признаков в неких «средних» стандартных условиях. При этом единичного исследования разных генотипов (типа «один год - одна делянка») недостаточно. В другой год всё тот же набор генотипов может показать принципиально иную корреляцию из-за эффекта смены параметров внешних условий. Тривиальный путь выявления генетической сопряжённости – организация полномасштабного многомерного эксперимента, в котором набор градаций по каждому фактору изменчивости должен формировать репрезентативную выборку. Однако из-за непомерного числа требуемых наблюдений этот путь мало реален. Реально осуществимый путь заключается в исследовании многомерного массива случайных данных, который формируется случайным образом по результатам независимых экспериментов. Рандомизированная выборка, как известно, даёт адекватную оценку всех параметров генеральной совокупности [Налимов, 1971]. Важно, что в этом случае оценка эффектов каждого фактора верна и при неодинаковом числе наблюдений. Для описания совместного действия основных факторов биологической изменчивости на значение количественного признака использована линейная модель [Allard, 1960]:pij = + gi + ej + (gi · ej), где pij – значение признака в фенотипе у i-го генотипа в j-х условиях, – фенотипическое среднее значение признака в популяции, gi – эффект i-го генотипа, ej – эффект j-й среды, компонент (gi · ej ) – статистическое взаимодействие этих факторов. В соответствии с этой моделью, генотипическое значение признака оценивается как среднее по результатам испытания i-го генотипа в варьирующих условиях, например в виде средней урожайности вегетативно размноженного сорта, при этом ej 0. Клонирование генотипа вегетативным путём решает задачу соблюдения генетической идентичности отдельных растений. Экологическое значение признака есть среднее значение признака в конкретной j-й экологической ситуации по множеству генотипов (gi 0). Например, его можно представить в виде среднегодового значения признака в гетерогенной естественной популяции.Выбранная модель позволяет выявлять генотипическую и экологическую корреляцию признаков на основе косвенной стандартизации факторов биологической изменчивости. Такая модель ограничена следующими допущениями: 1. Факторы биологической изменчивости качественно различны и независимы друг от друга ( gi · ej 0 ).2. Вариация признака линейно зависит от вариации фактора изменчивости. 3. Выборочные генотипические и экологические средние являются несмещёнными оценками их генеральных значений. Эта модель изображена на рис. 1 для трёх идеальных случаев: эффекты факторов равны и положительны (вариант А), противоположны по знаку (вариант В) и отрицательны (вариант С). Закономерности сопряжения группы признаков выявлялись методом корреляционных плеяд и методом факторного анализа.^ Материалы и методы Исследована сопряжённая изменчивость 8 основных селекционно-значимых признаков химического состава плодовой мякоти облепихи: общего содержания сухих веществ, водорастворимых сахаров, органических кислот, аскорбиновой кислоты, суммы каротинов, суммы биологически активных неомыляемых липидов, общих липидов плодовой мякоти («масличность»), а также массы плодов. Использованы как собственные, так и литературные данные. В общей сложности в данное исследование включено 398 (3341) генотипов и 57 (81) экологических ситуаций. ^ Анализ химического состава. Для проведения серийных анализов химического состава плодов была разработана комплексная методика, основанная на разделении гидрофильных и липидных соединений непосредственно в пробе свежего гомогената плодов. Она включает 3 оригинальных метода: количественного определения аскорбиновой кислоты, содержания суммы липидов (масличности плодов) и содержания неомыляемых липидов. Методы анализа остальных веществ общепринятые. Методика позволяет определять в одной пробе более 10 параметров. Её схема изображена на рис. 2. Химический состав определялся в момент наступления ботанической зрелости плодов.^ Статистический анализ данных. Массив исходных данных состоит из однородных выборок (ячеек массива) с разным числом наблюдений. Каждая такая выборка представляет собой ряд наблюдений над одним генотипом (т.е. вегетативным клоном) в одинаковых погодно-почвенных условиях. Эти выборки, будучи однородными внутри, различаются по выборочным средним значениям признака, которые вызваны конкретным сочетанием факторов изменчивости. Исследования разных авторов независимы, поэтому попадание наблюдения в ячейку принято случайным. Для ослабления эффектов асимметрии формы распределения и статистического взаимодействия факторов (компонент gi · ej ) исходные числовые данные логарифмировались.Вычисление фенотипической корреляции. Этот показатель вычислялся без стандартизации исходных данных по общепринятой формуле выборочного коэффициента корреляции: r = где n - число наблюдений; xi и yi - выборочные наблюдения признаков «X» и «Y»; xср и yср – общие средние. Статистическая значимость коэффициента оценивалась по t–критерию Стьюдента.^ Вычисление генотипической корреляции. Как показано выше, фенотипическая изменчивость признака «X» в однородных экологических условиях и в фиксированный момент времени определяется только эффектом i-го генотипа (gxi): xi.. = x + gxi Для признака «Y» у того же объекта yi .. = y + gyi Поэтому выявление генотипической корреляции между признаками «X» и «Y» сводится к вычислению коэффициента линейной корреляции (см. выше) по выборкам генотипических средних {xi..} и {yi..} .Вычисление экологической корреляции. Все расчёты ведутся по экологическим средним: x .j. = x + exj y .j. = y + eyjЛинейная корреляция по выборкам экологических средних {x.j.} и {y.j.} определяет коэффициент экологической корреляции между признаками «X» и «Y». Здесь используется всё тот же исходный массив случайных наблюдений.Полученные корреляционные матрицы исследованы методом построения корреляционных плеяд и методом факторного анализа. Из-за отсутствия полных данных по корреляции признака «Неомыляемые липиды», он не участвовал в факторном анализе. В связи с варьированием числа парных наблюдений в исходных выборках плеяды формировались по заданному уровню значимости, который составлял не менее 0,95. Факторный анализ корреляционных матриц проводился по модели ортогональных (независимых) факторов. Для предварительного определения числа факторов, корреляционные матрицы факторизовались методом главных компонент до уровня остаточной корреляции не более 0,10. Затем полученное решение преобразовывалось к многофакторному виду методом максимума правдоподобия с вращением факторов по методу «Varimax» [Харман, 1972].^ Результаты и обсуждениеРезультаты вычисления корреляции в исходном массиве данных (фенотипическая корреляция) и после стандартизации факторов изменчивости представлены на рис. 3 и табл. 1- 4.^ Фенотипическая корреляция. Общее число корреляционных связей заданного уровня значимости (p 0,05) равно 14 (рис. 3). Они образуют 4 плеяды с узловыми признаками «Масса плодов» (1), «Общее содержание кислот» (4), «Содержание аскорбиновой кислоты» (5) и «Содержание суммы каротинов» (8). Фенотипическую корреляционную матрицу детерминируют четыре независимых фактора (табл. 1).Табл. 1. Факторное отображение фенотипической корреляции количественных признаков облепихи. Значения ≥ 0,60 выделены жирным шрифтом. Признак Выделенные ф а к т о р ы Ph-I Ph-II Ph-III Ph-IV 1. Масса плодов2. Сухие вещества3. Сумма сахаров4. Сумма кислот5. Аскорбиновая кислота6. Масличность плодов7. Сумма каротинов - 0,81*0,62- 0,78 0,16 0,13 0,12 0,01 - 0,20- 0,70 0,11 0,180,93 0,05 0,07 0,24 0,09- 0,120,78 0,10- 0,63-0,05 0,06- 0,02- 0,05 0,32- 0,09 0,09- 0,83 Фактор Ph-I. Основная нагрузка ложится на 3 признака: «Масса плодов», «Сумма сахаров» и «Сухие вещества».^ Фактор Ph-II. Фактор нагружен в обратном отношении 2 признаками: «Сухие вещества» и «Аскорбиновая кислота».Фактор Ph-III. Основную нагрузку несут 2 признака: «Сумма кислот» и «Масличность». ^ Фактор Ph-IV. Он почти полностью нагружен признаком «Каротины». Фенотипические корреляционные закономерности рис. 3 частично воспроизводят закономерности, установленные другими авторами. Так, подтверждается тенденция к большему содержанию БАВ в мелкоплодных формах и есть прямая связь содержания аскорбиновой кислоты и общей кислотности плодов. Тем не менее, полученные результаты не дают оснований полагать, что эти закономерности, выявленные в ходе исследования фенотипа, обусловлены генетически. Дальнейший анализ показал, что они как правило представляют собой своеобразный результат комбинации эффектов отдельных факторов.^ Генотипическая корреляция признаков. Экологическая стандартизация данных не привела к исчезновению связей признаков 1-8, 2-3, 3-4 и 7-8, поэтому они идентифицируются в фенотипе как генотипические корреляции. Кроме того, выявились четыре скрытые генетические взаимосвязи признаков 1-4, 2-4, 2-6 и 2-8, а 10. В итоге общее число генотипических взаимосвязей значимого уровня стало равно восьми. Они образуют три корреляционные плеяды узловых признаков «Сухие вещества», «Сумма кислот» и «Сумма каротинов» (рис. 3). Эти центральные признаки могут служить ориентирами при селекции облепихи по разным направлениям: - Отбор по общему содержанию сухих веществ перспективен при создании сортов технического (консервного) направления. При этом будет достигаться повышение содержания масла и каротинов с одновременным улучшением вкусовых качеств плодов. - Отбор по содержанию каротинов перспективен при создании сортов лечебно-профилактического направления с повышенным содержанием комплекса биологически активных неомыляемых липидов. - Сочетание в модели сорта интенсивной окраски, улучшенного вкуса и высокого содержания БАВ не встречает генетических ограничений. Однако при этом не следует ожидать выдающейся крупноплодности. - При создании крупноплодных сортов будут проявляться генетические ограничения, проявляющиеся в относительной обеднённости химического состава и слабой окраске плодов.- Независимо от общего направления селекции, создаваемые сорта могут без ущерба сочетать свои признаки с высоким содержанием аскорбиновой кислоты. Об этом свидетельствует отсутствие генетической сопряжённости её содержания с другими признаками. Генотипическая корреляционная матрица адекватно аппроксимируется 3 независимыми генетическими факторами (табл. 2).Табл. 2. Факторное отображение генотипической корреляции количественных признаков облепихи. Значения ≥ 0,60 выделены жирным шрифтом. Признак Выделенные факторы G-I G-II G-III 1. Масса плодов2. Сухие вещества3. Сумма сахаров4. Сумма кислот5. Аскорбиновая кислота6. Масличность плодов7. Сумма каротинов 0,000,63 0,04 -0,21 0,000,88 0,10 -0,86 0,18 0,01 0,32 0,05 0,00 0,28 0,09 0,380,83 -0,49 0,04 0,03 0,06 Фактор G-I («Качество плодов»). Основная нагрузка в его структуре ложится на признаки «Сухие вещества» и «Масличность». ^ Фактор G-II («Размер плодов»). Нагружен признаком «Масса плодов». Фактор G-III («Вкус плодов»). Нагружен признаком «Сумма сахаров». Эти факторы интерпретируются как независимых группы генов, принимающих участие в формировании величины плодов, вкусовых качеств и содержания масла. Они могут быть обусловлены как естественным отбором, так и прошедшей селекцией облепихи по трём главным направлениям: увеличению размера плодов, повышению содержание масла и улучшению вкусовых качеств.^ Экологическая корреляция признаков. Стандартизация по генотипическому фактору привела к элиминации ряда связей, а сохранившиеся корреляции 1-2, 1-6, 1-8, 4-6, 4-8 и 6-7 идентифицируются как экологические. Проявились экологические взаимосвязи, скрытые в фенотипе: 1-4, 2-6, 6-8 (рис.3). Общее число экологических корреляций значимого уровня равно девяти. Обнаружена корреляция 1-4, имеющая противоположный знак в зависимости от фактора изменчивости. Это объясняет феномен отсутствия этой корреляции в фенотипе за счёт эффекта взаимной маскировки факторов. Эти закономерности дают следующие основания для оптимизации технологии возделывания облепихи:- Для более полной реализации генетического потенциала по биологически активным липидам: каротинам, стеринам, токоферолам и др. целесообразно использовать приёмы возделывания, повышающие масличность плодов, например обеспечение высокой инсоляции. При этом следует ожидать также некоторого роста содержания сухих веществ с одновременным снижением размера плодов и их кислотности. - Экологические факторы, ведущие к росту размера плодов, способствуют падению концентрации БАВ и сухих веществ. Факторный анализ экологической корреляционной матрицы выделяет 4 независимых экологических фактора (табл. 3). Признак Выделенные ф а к т о р ы E-I E-II E-III E-IV 1. Масса плодов2. Сухие вещества3. Сумма сахаров4. Сумма кислот5. Аскорбиновая кислота6. Масличность плодов7. Сумма каротинов - 0,490,98 0,20- 0,20 0,080,73 0,05 - 0,11- 0,16- 0,97 0,27 0,24 0,34 0,03 0,29- 0,03 0,000,91 0,07- 0,50 - 0,14 - 0,29- 0,07- 0,00- 0,17 0,02 0,170,94 Табл. 3. Факторное отображение экологической корреляции количественных признаков облепихи. Значения ≥ 0,60 выделены жирным шрифтом. ^ Фактор E-I («Влагообеспеченность»). Основная факторная нагрузка признаках «Сухие вещества» и «Масличность». Фактор очевидно обусловлен уровнем влагообеспеченности растений. Критический период синтеза липидов в запасающих тканях – начало вегетационного периода. Максимальная реализация генетического потенциала облепихи по содержанию липидов возможна при технологии, предусматривающей максимальную влагообеспеченность в этот период. Этот элемент входит в новую интенсивную технологию НИИСС (г. Барнаул) по выращивания облепихи Она обеспечивает пятикратное повышение продуктивности насаждений без снижения качества плодов. Вместе с тем, избыточная влажность во второй половине вегетационного периода при снижении синтеза приводит к росту массы плодов при падении общей концентрации компонентов плодовой мякоти, что обусловлено механическим растяжением клеток паренхимы плодов. Такое явление наблюдается регулярно. ^ Факторы E-II («Фотосинтез») и E-III («Эффект затенения»). Их структура обусловлена вторым по значимости лимитирующим физиологическим фактором – уровнем фотосинтеза. При росте освещенности в тканях светолюбивых видов, к которым относится облепиха, резко растёт доля углеводной и липидной фракций и падает доля органических кислот. ^ Фактор E-IV («Хромопласты»). Он нагружен признаком «Сумма каротинов». Учитывая пластидное происхождение пигментов плодов облепихи, можно предположить, что данный фактор сформирован внешними условиями, которые через фитогормональные механизмы определяют интенсивность перехода функционально активных делящихся хромопластов в терминальную стадию геронтопластов, накапливающих каротины. Выводы Показано, что анализ фенотипической сопряжённой изменчивости 8 важнейших количественных признаков облепихи крушиновидной (^ Hippophae rhamnoides L.) выявляет 14 значимых корреляционных связей. Установлено, что в результате стандартизации исходных данных выявляются закономерности, обусловленные отдельными факторами биологической изменчивости, что позволяет их каузально интерпретировать. По генетическому фактору выявлено 8 элементов сопряжения, по экологическому - 9 элементов. Обнаружение корреляций противоположного направления в зависимости от фактора изменчивости объясняет феномен отсутствия корреляции в фенотипе. С помощью метода факторного анализа выявлено три генетических фактора, формирующих структуру генотипической сопряжённости признаков. Показано, что узловым признаком по генетическому фактору изменчивости является содержание сухих веществ. Этот признак может служить в качестве ориентира при селекции на повышение содержания липидов и улучшение вкусовых качеств плодов. Впервые обнаружена прямая генотипическая корреляция между содержанием каротинов и неомыляемых. липидов. Это позволяет использовать признак пигментации плодов в качестве маркерного при селекции на фармакологическую активность. Факторный анализ экологической сопряжённости признаков показал, что её структура аппроксимируется четырьмя факторами, которые можно интерпретировать эффектом двух лимитирующих средовых факторов: уровнем влагообеспеченности растений и уровнем освещённости. Впервые обнаружена прямая экологическая корреляция между общей масличностью и содержанием неомыляемых липидов. Это является дополнительной предпосылкой повышения масличности плодов и лечебной активности масла за счёт оптимальной технологии возделывания.Создана новая методическая база химического анализа плодов облепихи. Она позволяет вести серийную оценку исходного селекционного материала одновременно по 10 количественным признакам. Три метода обладают патентной новизной (авторские свидетельства №785764, №967483 и №1354106 ).^ Список основных работ, опубликованных по теме диссертацииСкуридин Г.М. Определение аскорбиновой кислоты в плодах облепихи методом потенциометрического титрования. // Известия СО АН СССР, Сер.Биол. наук, Вып.3, - 1980, № 15 - с.122-127.Привалов Г.Ф., Скуридин Г.М., Солоненко Л.П. Индивидуальная и групповая изменчивость химического состава плодов, индуцированная этилметансульфонатом в М1 у контрастных форм облепихи родственного происхождения. // Генетика, 1986, т.22, №10 - с. 2477-2484.Скуридин Г.М., Лбова М.И., Привалов Г.Ф. Взаимосвязь некоторых показателей морфологии и химического состава у облепихи. // Частная генетика сельскохозяйственных растений. Новосибирск, 1989 - с.169-177.Скуридин Г.М., Кукина Т.П. Метод количественного определения неомыляемых липидов облепихи. // Новое в биологии, химии и фармакологии облепихи. Новосибирск, 1991 - с.99-102.Скуридин Г.М. Выявление компонент взаимосвязи показателей химического состава плодов облепихи. // Генетика, 1994, т. 30 - с.146.Привалов Г.Ф., Солоненко Л.П., Скуридин Г.М. Соотносительная изменчивость признаков облепихи и её влияние на элиминацию и естественный отбор растений. // Генетика, 1996, т. 32, № 6 - с.856-859.Skuridin G.M., Baginskaya N.V. Revealing genotype, modification and seasonal components of correlations of sea-buckthorn signs. // Material of International symposium on sea-buckthorn (Hippophae rhamnoides L.). Novosibirsk, 1998 - p. 131-134.Skuridin G.M., Baginskaya N.V. Evaluation of genotype, modification and seasonal components of correlations of sea-buckthorn signs. // The 18th International Congress of Genetics. Abstracts. Beijing, China, 1998, 8P155 - p.162.Скуридин Г.М. Биологические особенности облепихи. // Облепиха в лесостепи Приобья. Новосибирск, 1999 - с. 6-28.Скуридин Г.М., Багинская Н.В. Экологическая корреляция количественных признаков облепихи. // Сельскохозяйственная биология, 2001, № 3 - с.62-67.Skuridin G.M., Baginskaya N.V. Correlation Database Analysis using the method of Factor Corrections. // Genetic Collections, Isogenic and Alloplasmic Lines. Novosibirsk, 2001 - p. 280-284.Скуридин Г.М., Коваль С.Ф. Идентификация генотипа по фенотипу с помощью корреляций. // Вестник ВОГИС, 2002, №19 - с.12-18.Скуридин Г.М., Коваль С.Ф. Корреляционный метод в создании модели сорта. // Материалы 1-й Международной Центрально-Азиатской конференции по пшенице (1-ЦАКП), Алматы, 2003 - с. 87-89Skuridin G.M., Baginskaya N.V. Studies of character correlation in srabuckthorn. А Review. // Seabuckthorn – a Resource of Health, a challenge to Modern Technology. Berlin, 2003 - р. 200-209.Skuridin G.M. Multifunctional New Berry: Cultivation of Oblepikha (Sea-buckthorn) species. // The Proceedings for the 38th ISTC Japan Workshop on Advanced technologies in Russia. ISTC, Tohoku Univ., 2006, P. 29-60.Скуридин Г.М. Способ количественного определения аскорбиновой кислоты. Авт. свид. СССР № 785764. // Бюлл. изобретений, 1980, № 45.Скуридин Г.М. Способ получения облепихового масла. - Авт. свид. СССР № 967483. // Бюлл. изобретений, 1982, № 39.Скуридин Г.М. Способ количественного определения неомыляемого остатка в жирах. Авт. свид. СССР № 1354106. // Бюлл. изобретений, 1987, № 43.Подписано к печати 27. 07. 2007 г.Формат бумаги 60 х 90 1/16. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 0,7Тираж 100 экз. Заказ 80_____________________________________________________Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН630090, Новосибирск, Пр-кт акад. Лаврентьева, 10. 1 В скобках указано число собственных наблюдений