На правах рукописиВасильевДмитрий БорисовичТеоретические и методологические основы ветеринарной герпетологииСпециальность: 16.00.02 – патология, онкология иморфология животныхАВТОРЕФЕРАТДиссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наукМОСКВА – 2007Работа выполнена на кафедре незаразных болезней ГОУ ВПО Московский государственный университет прикладной биотехнологии и в отделе герпетологии ГУК «Московский зоопарк». Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор^ Уша Борис Вениаминович Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессорБрагин Геннадий Иванович доктор ветеринарных наукПаршин Павел Андреевич доктор биологических наук, профессор^ Дроздов Николай НиколаевичВедущая организация: ГОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина.Защита диссертации состоится « » 2007г. в часов на заседании диссертационного совета Д – 212.149.03 при Московском государственном университете прикладной биотехнологии (109316, Москва, ул. Талалихина, д. 33)С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГУПБ.Автореферат разослан « » 2007г.Ученый секретарьдиссертационного совета д.в.н., профессор Смирнова И.Р.^ 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫАктуальность темы. Болезни мелких и экзотических животных являются одной из важнейших проблем современной ветеринарии. Теоретические и методологические основы ветеринарной науки были разработаны ранее для большинства социально значимых категорий непродуктивных животных. При этом за рамками ветеринарной дисциплины остался целый класс наземных позвоночных – рептилий, не представлявших ранее актуального прикладного значения и выделявшихся значительными анатомо-физиологическими особенностями. Однако в современной ситуации роль этой группы животных существенно возрастает. Разведение рептилий (герпетокультура) и содержание их в неволе в последние годы бурно развиваются в связи с проблемами сохранения биоразнообразия, а также использованием их как лабораторных животных и животных-компаньонов. При перемещении коммерческих партий этих животных требуется строгий контроль, мониторинг и прогнозирование эпизоотической ситуации. В условиях недостаточной изученности болезней рептилий, исследование этиологии и патогенеза заболеваний, имеющих зоонотический риск, является особенно актуальным. Контроль над зооторговлей предусматриварет не только введение ограничительных мер в странах-экспортерах и ужесточение контроля над ввозом/вывозом животных, но и максимальное ограничение изъятия животных из дикой природы и удовлетворение потребностей рынка за счет разведения рептилий. Роль зоокультуры сейчас возрастает и в сельскохозяйственном производстве. Фермы по разведению рептилий создаются за пределами тропического пояса - в Европе, США, Израиле, Японии и т.д. В последние годы рептилии занимали второе место после птиц на рынке экзотических животных. В России данные о ежегодном ввозе рептилий не публикуются, но по статистике США (D’Aoust et al., 1990; Glynn, 2001), в эту страну с 1994 года ввозят около 260-800 000 игуан ежегодно, и одновременно по стране содержится около 4,5 млн. рептилий. В Москве в частном секторе содержится одновременно свыше 300 000 рептилий, в основном черепах (Васильев Д.Б., 1999). Большинство этих животных нуждается в квалифицированной ветеринарной помощи, что требует научно обоснованной программы подготовки специалистов соответствующего профиля. В ветеринарии до последнего времени не существовало специального направления исследований, изучающего патологию рептилий. Соответственно, на сегодняшний день не разработаны теоретические подходы к изучению закономерностей развития патологических процессов, механизмов возникновения, течения и исхода внутренних болезней, этиологии и морфогенеза инфекционных и инвазионных процессов, хирургической патологии рептилий. Отсутствие теоретических основ не позволяло разработать целостную систему в методологии ветеринарной медицины рептилий. Из-за значительной специфики в биологии этой группы животных прямые экстраполяции опыта, накопленного в ветеринарии теплокровных, оказались неприемлемыми. Патогенез при многих заболеваниях рептилий совершенно не изучен. Не существует репрезентативного списка болезней рептилий, и многие нозологические единицы недостаточно обоснованы или являются формальной калькой, заимствованной из медицины или ветеринарии млекопитающих. Из-за несовершенства терминологии в научной литературе параллельно существуют термины из медицинской, ветеринарной и зоологической номенклатуры. Подавляющее большинство методов изучения патологии, разработанных в ветеринарии, не унифицированы и требуют модификаций для рептилий. Сегодня не существует ни одного лечебного препарата, специально аннотированного для рептилий. Большая часть зарубежной специальной литературы в этой области носит справочный характер или посвящена описанию частных случаев заболеваний. На русском языке выпущено лишь несколько переводных изданий, носящих прикладной характер (Ланде, Ярофке, 1999; Кирк, Бонагура, 2005) и единственная отечественная монография, посвященная исключительно болезням черепах (Васильев Д.Б., 1999). Не существует также ни одного учебника по ветеринарии рептилий или пособия, построенного по дидактическому принципу, что является препятствием для развития этого направления в ветеринарии, включая учебно-методический процесс и подготовку специалистов соответствующего профиля. В связи с этим возникает необходимость создания целостной системы теоретических подходов и методологических основ ветеринарной герпетологии как нового актуального направления ветеринарной науки. ^ Цель и задачи исследований. Целью работы явилась разработка теоретических основ и методологических подходов к изучению морфо-функциональных изменений при различных видах патологии рептилий и выявление самостоятельных нозологических форм заболеваний. Исходя из целей исследования, были поставлены следующие задачи: исследовать закономерности патологического процесса при развитии, течении и исходе внутренних незаразных болезней рептилий, таких как заболевания опорно-двигательного аппарата, желудочно-кишечного тракта, печени, урогенитальной сферы и др.; изучить этиологию и патогенез метаболических болезней, таких как гипо- и гипервитаминозы, макро- и микроэлементозы и разработать научно обоснованную схему профилактики гиповитаминозов и нарушений минерального обмена; изучить морфологический, функциональный и биохимический атипизм опухолей у рептилий; проанализировать особенности клинико-анатомических проявлений инфекционных болезней, вызванных бактериями, грибами и простейшими; изучить особенности течения патологического процесса при инвазионных болезнях рептилий и предложить эффективные и безопасные средства профилактики гельминтозов рептилий; выявить особенности морфо-функциональных и клинико-анатомических изменений при хирургической патологии и разработать специфические для рептилий методы хирургических процедур; модифицировать существующие в ветеринарии методы прижизненных и постмортальных исследований патологического процесса и терапевтические процедуры применительно к заболеваниям рептилий; на основании обобщений и анализа закономерностей развития патологических процессов при заболеваниях разной этиологии выявить и классифицировать самостоятельные нозологические формы у рептилий.^ Научная новизна. Впервые исследован патогенез и дана патоморфологическая характеристика заболеваний печени, почек, опорно-двигательного аппарата и нарушений минерального обмена рептилий. Предложена теория кальцифилаксической сенсибилизации при развитии нефропатий у игуановых ящериц и теория гиперурикемического патогенеза этих заболеваний у черепах. Разработаны методы дифференциальной диагностики сложных нозологических комплексов, таких как вторичный гиперпаратиреоидизм, остеопролиферативные заболевания, энтероколиты, кожные болезни и др. Впервые описаны такие новые для рептилий нозологические формы, как идиопатическая фиброзная остеодисплазия игуановых ящериц, оссифицирующий спондилит, идиопатический илеус у игуан, лептомонозный колит у хамелеонов, амилоидоз у кайманов, хондросаркома, паростальная саркома, липидно-гигантоклеточная опухоль, папиллярный рак щитовидной железы и злокачественная гемангиоперицитома у ящериц. Нами также впервые описана ганглионейробластома у хамелеона на основании электронномикроскопического и иммуногистохимического исследования, что позволило установить нейроэктодермальный гистогенез опухолей, ранее не отмеченный у рептилий. Впервые разработаны методологические основы исследования патологического процесса при заболеваниях рептилий. Предложен алгоритм общеклинического осмотра и сбора анамнеза. Разработаны методы фиброэндоскопического исследования ЖКТ ящериц, ультрасонографического мониторинга беременности у рептилий, пищеводного отведения при электрокардиографии у змей, контрастной рентгенографии у ящериц и черепах. Модифицированы применительно к рептилиям методы взятия и исследования мочи, крови, кала и костного мозга. Получены собственные серийные данные о большинстве лабораторных показателей мочи, кала и крови рептилий, позволяющие установить для них норму реакции и использовать в диагностике заболеваний. Впервые установлены пределы изменчивости для таких показателей крови ящериц, как триглицериды, ЛДГ, ГГТ и гормонов щитовидной железы. Изучение анатомических и клинико-морфологических особенностей при хирургической патологии рептилий впервые позволило рекомендовать оптимальные хирургические доступы при полостных операциях у ящериц, характеризующихся различным планом строения, и описать оригинальные методики оперативных вмешательств, таких как остеосинтез трубчатых костей у мелких ящериц, грудо-поясничная ламинэктомия и корподез, остеотомия с пластикой нижней челюсти у игуан, колотомия и колопексия, веномаденэктомия у аспидовых змей, ринопластика и др. Обоснованный и внедренный нами метод мануального эндотрахеального наркоза позволил значительно расширить возможности ветеринарных клиник, не имеющих соответствующего анестезиологического оборудования. Нами также разработаны методы катетеризации кровотока у ящериц и расчеты объема замещения, необходимые при проведении инфузионной терапии. Впервые на основе большого серийного материала проведен анализ бактериологического и гельминтозного статуса в крупных многовидовых ассоциациях рептилий зоопарков, выделено ядро основных патогенов при заболеваниях бактериальной и паразитарной этиологии. На основании анализа показателей МИК90 предложены препараты выбора при эмпирической и специфической антимикробной терапии рептилий, разработаны новые терапевтические схемы лечения амебиаза, криптоспоридиоза, лептомоноза, гельминтозов ЖКТ и пентастомозов.^ Практическая значимость. Полученные результаты явились основой для разработки научных и практических рекомендаций при исследовании этиопатогенеза основных болезней рептилий. Методы клинической, лабораторной и инструментальной диагностики, модифицированные нами для рептилий, внедрены в практику ветеринарных клиник Москвы, Санкт-Петербурга, Киева, Калининграда, Ставрополя, Екатеринбурга и других городов, а также зоопарков СНГ- членов ЕАРАЗА. Опубликована и получила распространение оригинальная техника многих хирургических вмешательств. Для экстраполяции терапевтических схем предложен метод аллометрического скейлинга, что позволяет математически рассчитывать дозы химиопрепаратов, ранее не применявшихся для рептилий. Разработанные нами рекомендации «Меры профилактики паразитарных болезней рептилий», одобренные Секцией «Инвазионные болезни животных» РАСХН, внедрены в практику зоопарков. Впервые разработаны совместно с ООО «Научно-внедренческий центр Агроветзащита С.-П.» и внедрены 4 препарата серии «Рептилайф», специально аннотированные для рептилий. Инструкции по применению препаратов утверждены Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитарному надзору Минсельхоза России от 14.11.06г. «Рептилайф порошок» является витаминно-минеральной добавкой для обогащения рационов рептилий витаминами, макро- и микроэлементами (Регистрационный номер ПВР-2-4.6/01761). «Рептилайф-плюс» - лекарственное средство в форме суспензии для инъекций, предназначенное для лечения и профилактики нематодозов, цестодозов и пентастомозов у змей и ящериц (Регистрационный номер ПВР-2-4.6/01699). «Рептилайф-суспензия» - лекарственное средство для перорального применения, предназначенное для лечения и профилактики нематодозов и цестодозов у черепах, ящериц и змей (Регистрационный номер ПВР-2-4.6/01698). «Рептилайф мультивитаминный комплекс для инъекций» - лекарственное средство для профилактики и лечения гиповитаминозов и заболеваний, развивающихся на их фоне, у рептилий (Регистрационный номер ПВР-2-4.6/01780). Опубликованные результаты исследований используются в учебном процессе ряда отраслевых ВУЗов, а также в программах последипломного ветеринарного образования. ^ Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и одобрены на секции «Инвазионные болезни животных» РАСХН (Москва, 1999); научных конференциях по проблемам гельминтологии и паразитологии ВИГИС (Москва, 1996,1997,1998,1999); Международной школе-семинаре ЕАРАЗА «Иммобилизация диких животных» (Санкт-Петербург, 1998); Всероссийской научно-практической конференции «Морфометрия в диагностике болезней» (Москва, 1999); Межрегиональной «Конференции по проблемам травматологии и онкологии мелких животных» (Москва, 1999);1-й Московской межрегиональной научной конференции «Животные в городе» (Москва, 1999); 7-й Международной конференции по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Москва, 1999); Всероссийской конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины» (Санкт-Петербург, 2000); 3-й Международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных на Северном Кавказе» (Персиановский, 2000); Всероссийском «Семинаре по болезням мелких домашних и экзотических животных» (Москва. 2001); 1-й Межрегиональной конференции «Проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Казань, 2001); 4-й Межрегиональной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины мелких домашних животных и лошадей на Северном Кавказе» (Ставрополь, 2001); Международной научной конференции ветеринарных врачей зоопарков AAZV (Вороново, 2001); Межрегиональной конференции «Здоровье животных – здоровье людей» (Нягань, 2002); Международной школе-семинаре ЕАРАЗА «Ветеринарные методы в герпетологических коллекциях зоопарков» (Москва, 2003); 3-й и 5-й Международной конференциях по проблемам ветеринарной безопасности (Москва, 2002, 2004); 7-м Международном симпозиуме «Pathology and Medicine of Reptiles and Amphibians» (Берлин, 2004); Международной школе-семинаре ЕАРАЗА «Вопросы кормления диких животных» (Москва, 2005); IX, X, XI, XII, XIII Международном Московском ветеринарном конгрессе по болезням мелких домашних животных (Москва, 2000, 2001, 2002, 2003, 2004, 2005); 1-м Международном ветеринарном фестивале (Сочи, 2006); 2-й Российско-американской конференции по болезням диких животных (Москва, 2007).^ Основные положения, выносимые на защиту:особенности клинико-диагностических методов для выявления патологии при внутренних незаразных болезнях рептилий;патоморфологическая характеристика и нозологическая система болезней опорно-двигательного аппарата, пищеварительной, выделительной и половой систем рептилий;этиопатогенез при нарушении обменных процессов у рептилий и клинико-морфологическая характеристика основных нозологических единиц;специфичность и клинико-морфологическая характеристика опухолевых процессов у рептилий; клинико-анатомические особенности при хирургической патологии рептилий;особенности патоморфологических проявлений при основных инфекционных и инвазионных болезнях рептилий.Публикации. По материалам диссертации опубликовано 53 научных работы, в том числе статьи в журналах «Ветеринария», «Ветеринарная патология», «Архив патологии», «Вопросы онкологии».^ Структура и объем работы. Монография изложена на 480 страницах типографского текста (53 авторских листа), издана тиражом 1000 экземпляров, состоит из 5 глав. Работа иллюстрирована 149 цветными, 207 черно-белыми фотографиями, 43 рисунками и схемами, 54 таблицами. Список литературы приводится отдельно для каждой главы и суммарно включает 790 источников, в том числе, 747 иностранных.^ 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1 Материал и методы исследований Работа выполнена в 1988-2006 гг. на кафедре незаразных болезней ветеринарно-санитарного ф-та МГУПБ и в отделе герпетологии Московского зоопарка. Использованы данные клинического осмотра более 3400 особей 187 видов рептилий из коллекций Московского, Ленинградского зоопарков, Тульского зооэкзотариума, ферм по разведению рептилий Terraria Indonesia и CV-Prestasi (Индонезия); а также результаты 2800 копроскопических, 314 общеклинических и 684 биохимических исследований крови; 34 исследований костного мозга; 28 электрофоретограмм; 617 бактериологических и микологических исследований; 437 рентгенограмм, включая 64 контрастных; 417 ультрасонограмм; 83 эндоскопических исследований. Вскрыто 1027 рептилий, павших в Московском зоопарке, и более 800 особей из других организаций и частного сектора. Органы 297 особей 114 видов исследованы гистологически, верифицировано 47 случаев опухолей. Диагностические мероприятия включали сбор анамнеза и клинический осмотр по оригинальному алгоритму, исследование мочи с помощью тест-полосок HEPTA PHAN, световой, фазово-контрастной и поляризационной микроскопии. Кровь брали в объеме до 0,7% от массы тела из вентральной или дорзальной хвостовой вены, ОКА крови проводили на анализаторе ABS Micros, подсчет клеток – в гемоцитометре по методу Natt, Herrick (1952). Биохимическое исследование сыворотки крови проводили на анализаторах Humolyzer Gunior (Human) по стандартным методикам, уровень гормонов щитовидной железы определяли иммуноферментным методом на анализаторе Humareader (Human). Цитологическое исследование аспиратов, пунктатов и мазков-отпечатков проводили методом световой микроскопии после окраски Diff Quick, RAL-555, PAS. Гельминтоовоскопию проводили методом флотации по Калантарян, копроскопические исследования и идентификацию протозойных паразитов по оригинальным модификациям, с использованием окрасок по Цилю-Нильсону, PAS, RAL-555, Trichrom. Микологические исследования проводили по стандартным методикам на базе лаборатории микозов ВГНКИ в соавторстве с к.б.н. М.Г. Маноян, бактериологические – на базе бактериологических центров 1-й ГКБ и инфекционной б-цы им. И.М.Боткина в соавторстве с к.м.н., В.И.Карабаком. Рентгенологические исследования проводили методами стандартной, контрастной и маммографической съемки на аппаратах Toshiba Porta 100, маммографической установке SENO 500T (GE). Ультрасонографию проводили на аппаратах Logic 100 PRO и Acuson-128 XP, с использованием линейных датчиков 7 и 7,5МГц и микроконвексного датчика 6,6МГц. Эндоскопическое исследование проводили с помощью лапароскопов Karl Stortz и Volf по рекомендациям Hernandez-Divers с соавторами (2004), фиброэндоскопию ЖКТ – с помощью бронхофиброскопа Olympus BF P40 по оригинальной модификации в соавторстве с к.м.н. О.А. Суриковой. Электрокардиографию проводили с помощью стандартного и оригинального пищеводного отведения на кардиографе Schiller AT-1 VET. Патоморфологические исследования проводили на базе сектора патоморфологии ВНИИЭВ, отдела патологической анатомии опухолей человека РОНЦ РАМН, лаборатории развития нервной системы ИМЧ РАМН. Материал фиксировали в 10% буферном формалине, после выполнения стандартных гистологических процедур окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван Гизону, Ван Косcа, PAS и исследовали на микроскопах ЛЮМАМ Р8, Motic B1, Olympus BX 51. Для определения гистогенеза опухолей в отдельных случаях проводили иммуногистохимическое и электронномикроскопическое исследование в соавторстве с д.м.н., профессором, академиком РАМН Ю.Н. Соловьевым. Хирургические вмешательства проводили под эндотрахеальным наркозом изофлураном с использованием оригинального мануального метода или наркозного аппарата BME OX 86 TJ. Диагностическую и коррегирующую терапию болезней рептилий проводили по терапевтическим схемам, разработанным на основании анализа зарубежных литературных данных, клинических экспериментов и межвидовых экстраполяций по методу аллометрического скейлинга (Hainsworth, 1981; Sedgwick, 1986). Имеющийся цифровой материал был обработан методами вариационной статистики (Лакин С.Ф., 1990).^ 2.2 СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ2.2.1 Клиническая диагностика.2.2.1.1 Анамнез. Разработанный нами алгоритм сбора анамнеза включает вопросы о происхождении рептилии, поле и возрасте, времени существования в неволе, устройстве террариума, рационе и режиме кормлений, наличии и типе подкормок с оценкой поступления кальция (недельный дефицит, по нашим расчетам, составляет для растительноядных и насекомоядных видов 300-350 мг/кг) и др.2.2.1.2 Общий осмотр и физикальное исследование. Рекомендуемый нами протокол внешнего осмотра включает наблюдение за движением и позой незафиксированного животного, взвешивание и оценку соответствия линейных размеров и массы тела (для среднеазиатских черепах выведенная нами формула соответствия М=0,3L3, где М-масса тела (г), L-длина (см), N=220), фиксацию животного, опасных рептилий фиксируют в соответствии с разработанным нами руководством для зоопарков (Васильев Д.Б. и др., 1997). Осмотр начинают с головы и заканчивают исследованием клоаки. Затем аускультируют легкие через влажную ткань, бимануально пальпируют органы брюшной полости. Нами разработан метод пальпации почек, яичника, нисходящей ободочной кишки через шейку мочевого пузыря у видов соответствующего размера с развитым мочевым пузырем.^ 2.2.1.3 Лабораторная диагностика.Исследование мочи. Согласно полученным нами данным, из-за особенностей строения почек рептилий клиническое значение имеют не все параметры, важные для теплокровных. Достоверно при заболеваниях почек и мочевого тракта изменяются следующие параметры: плотность мочи (1003-1012; при олигурии и после зимовки 1008-1017, параметр более постоянен у уреотеликов и уреоаммониотеликов); кислотность (рН 5,5-6,0 снижается при голодании, у активных растительноядных видов в норме повышается до 8,0-8,5); белок (в норме до 0,3 мг/л, при гломерулонефрите повышается до 1-3 мг/л); глюкоза (0-5 мг/л, повышается при кахексии, желточном перитоните, гепатоклеточном липидозе до 10 мг/л, до 20-50 мг/л при сахарном диабете). Уровень кетонов, кетоновых тел, билирубина, мочевины статистически достоверно не изменяется. Микроскопия нативного (фазовоконтрастная и поляризационная) или окрашенного (световая) мочевого осадка позволяет выявить лейкоцитурию (до 8-10 клеток в п/зр) и гематурию, патогенную микрофлору и протистофауну, атипичные кристаллы (игольчатые и крупнокристаллические друзы уратов, оксалаты, струвиты, фосфаты кальция и магния). ^ Исследование крови.Общеклинический анализ крови. На основании проведенной нами клинической оценки методов венепункции, кровь у рептилий брали в объеме 0,6-0,8% от массы тела, у змей, ящериц и водных черепах из вентральной хвостовой вены, у сухопутных черепах из дорзальной хвостовой и яремной вены, у крокодилов – из постзатылочного синуса. Для подсчета эритроцитов и лейкоцитов использовали одинаковое разведение реактивом, содержащим фиксатор и витальный краситель, после чего клетки вручную подсчитывали в гемоцитометре. Оказалось, что при использовании автоматизированных методов ядерные элементы одинакового размера подсчитываются как единый тип клеток, например, мелкие лейкоциты и тромбоциты, что, вероятно, определяет аномально завышенные данные об уровне лейкоцитов в крови рептилий, опубликованные в некоторых зарубежных источниках (Ланде, Ярофке, 1999; Ippen et al., 1985). В литературе предлагается несколько методов подсчета лейкоцитов, таких, как модификация с реактивом Тюрка (Васильев Д.Б., Балакина О.В., 1999), непрямой метод с флоксином В (Campbell, 1996), модификация метода Natt, Herrick, 1952 (Frye, 1991), метод Rees, Ecker (Lawton, Divers, 1999), подсчет лейкоцитов по мазку (LEVS, Fudge, 2000) и др. Сравнительный анализ показал, что наименьшую погрешность дает метод Натта-Херрика, использованный в данной работе. При приготовлении тонкого мазка мы не рекомендуем использовать любые антикоагулянты. Определение уровней гемоглобина, фибриногена и гематокритной величины проводили по стандартным методикам. Данные ОКА крови зеленых игуан приведены в таблице 1. ^ Общее количество эритроцитов (х 106/мкл) 1,41±0,59 Гемоглобин (г/дл) 4,46±1,04 ^ Гематокритное число (%) 30,5±6,44 Фибриноген (мг/дл) 122±38 ^ Общее количество лейкоцитов (х 103/мкл) 7,7±3,2 Гетерофилы (%) 41±13 Лимфоциты (%) 48±8 Моноциты (%) 3±1 Эозинофилы (%) 1±1 Базофилы (%) 4±3 Азурофилы (%) 15±7 Таблица 1. Нормальные гематологические показатели, установленные для зеленых игуан (N=164)^ Биохимическое исследование крови. Нами оценено влияние артефактов на результаты анализа. Выяснено, что при добавлении гепарина происходит диагностически значимое снижение уровня общего кальция (до 0,4-1,0 ммоль/л, рТаблица 2. Нормальные биохимические показатели крови игуан (N= 232) ^ Натрий (ммоль/л) 154,8±6,4 Калий (ммоль/л) 3,4±0,9 Хлор (ммоль/л) 124±4 Кальций (мг/дл)(ммоль/л) 10,2±1,72,6±0,8 Фосфор (мг/дл)(ммоль/л) 6,5±1,82,1±0,6 Мочевая кислота (мг/дл)(ммоль/л) 1,9±1,3109±80 Креатинин (мг/дл)(мкмоль/л) 0,17±0,0716±7 Азот мочевины, BUN (мг/дл) (ммоль/л) 3,42±3,122,6±2,4 Глюкоза (мг/дл)(ммль/л) 181±389,8±1,9 Общий белок (г/дл) 4,9±1,7 Альбумины (г/дл) 2,6±0,8 ^ Глобулины (г/дл) 4,3±1,1 А/Г-индекс 0,7±0,2 Холестерол (мг/дл)(моль/л) 145±493,7±1,2 Триглицериды (ммоль/л) 1,4±0,4 ЛДГ (ЕД/л) 906±894 АлАТ (ЕД/л) 18±13 АсАТ (ЕД/л) 29±24 ГГТ (ЕД/л) 10,2±7,9 ЩФ (ЕД/л) 101±79 КФК (ЕД/л) 661±573 Т3 (пкг/дл) 48±6 ^ Т4 (мкг/дл) 2,1±0,2 Исследование костного мозга. Результаты наших исследований показывают, что у крокодилов и крупных (более 1,5 кг) ящериц оптимальным методом получения костного мозга является интрамедуллярная аспирация большеберцовой кости, у черепах – эксцизия губчатой кости панциря в области шейных пластин пластрона, у змей и ящериц – эксцизия реберных костей или остистых отростков позвонков. Нами описана техника приготовления цитологических и гистологических препаратов и охарактеризована патоморфологическая картина при регенеративных и токсических реакциях, при инфекционном воспалении.2.2.1.4 Инструментальные методы диагностики.Рентгенография. На основании полученных данных для съемки ящериц среднего размера (толщина тела 4-6 см) рекомендован режим: 50 кВ и 6-8 мА/сек, с добавлением 2 кВ на 1 см увеличения толщины тела. Для мелких рептилий наилучшие результаты дает маммографическая съемка. Обзорные рентгенограммы всех рептилий, кроме черепах, следует выполнять в дорзо-вентральной и боковой проекции. Для черепах необходимо также использовать кранио-каудальную проекцию. Для контрастной рентгенографии ЖКТ мы рекомендуем вводить в кардию желудка зондом 30% бария сульфат на крахмальном растворе или 50% водный раствор йогексола в объеме 10 мл/кг. Среднее время контрастирования проксимальной ободочной кишки составляет у игуан и сухопутных черепах 36-48 ч. На основании результатов клинических экспериментов, при контрастной рентгенографии почек мы рекомендуем вводить болюсно 76% урографин, ящерицам в вентральную вену хвоста в дозе 1000 мг/кг, черепахам – в дорзальную вену хвоста в дозе 500 мг/кг. При этом почки визуализируются в течение 60 сек. По данным анализа 108 рентгенограмм нами описана нормальная рентгеноанатомия зеленых игуан, на основании которой рекомендуется интерпретировать результаты рентгенографии скелета, грудной клетки, брюшного отдела полости тела, таза ящериц.Ультрасонография. На основании анализа 417 ультрасонограмм разных видов рептилий нами рекомендована техника проведения УЗИ животным разного размера и получены данные об эхогенности, размерах, конфигурации и состоянии миокарда, аорты, печени, желчного пузыря, желудка, яичников, мочевого пузыря и почек рептилий. Для исследования почек разработана оригинальная методика сканирования.Эндоскопия. На основании результатов 83 эндоскопических исследований, проведенных 14 видам ящериц, змей и черепах, выявлены оптимальные технические характеристики фибро- и ригидных эндоскопов при их использовании для рептилий. Рекомендуются анестезиологическое пособие и доступы при проведении обзорной целиоскопии и визуализации отдельных органов брюшной полости. Впервые разработана методика гастродуоденоскопии и фиброколоноскопии растительноядных ящериц, имеющих значительные анатомо-физиологические особенности ЖКТ. Описана эндоскопическая картина при геморрагиях, эрозии, язвах, новообразованиях, воспалительных изменениях, стенозах. Электрокардиография. Результаты проведенных нами исследований показали, что имеются особенности при снятии ЭКГ у змей, а также у ящериц с краниальным и каудальным положением сердца. Поэтому рекомендованы модификации отведений с основания шеи, подмышечной впадины, грудной клетки, и оригинальная методика пищеводного отведения при использовании ЭКГ для мониторинга анестезии. Оцениваются общие особенности ЭКГ рептилий и изменения при гипоксии миокарда, кардиосклерозе.^ 2.2.2 Незаразные болезни. Сравнительно-морфологический анализ собственного серийного материала и сопоставление с некоторыми ранее обоснованными нозологическими формами заболеваний рептилий (Frye, 1976, 1991, 2000; Ippen et al., 1985; Zwart, 1992, 2004 и др.) позволили выделить, охарактеризовать и классифицировать следующие 58 нозологических форм заболеваний (табл. 3). В комплексе заболеваний опорно-двигательного аппарата нами выделены такие новые нозологические формы, как оссифицирующий спондилит и идиопатическая фиброзная остеодисплазия игуан. Первое заболевание характеризуется пролиферацией суставного хряща и эпифизарного кортекса позвонков в поясничном и крестцовом отделах, особенно выраженной в области поперечно-реберных отростков и головок реберных костей (рис.1). Клинические и макроскопические изменения при остеодисплазии игуан напоминают состояние клинически развернутой фиброзной остеодистрофии, однако отличаются выраженностью симптомов, отсутствием реакции на кальций-заместительную терапию и экзогенное введение витамина Д3, а также рентгенологически, так как изменения затрагивают исключительно челюстные кости и не выявляются в области трубчатых костей и таза. Гистологически ткань в основном состоит из фибро-остеоидного матрикса с фибробластами, фиброцитами и различным количеством коллагеновых волокон (рис.2).Таблица 3. Основные нозологические формы незаразных болезней рептилий ^ Система органов Нозологические формы Основные звенья патогенеза Кожа Дисэкдис, ожоговые поражения, неспецифические дерматиты Гиперкератоз, сквамозная метаплазия, эритема, геморрагии, внутрисосудистый тромбоз, воспаление, метастатическая минерализация, аккумуляция цероида, некроз, склероз Опорно-двигательный ппарат Гипертрофическая остеопатия, остеопетроз, болезнь Педжета, остеоартрит, остеохондрит, фиброзная остеодисплазия, оссифицирующий спондилит Воспаление, реактивный экзостоз и хондрогенез, фиброзная дистрофия, нарушение кортико-медуллярной резорбции, аутоиммунные процессы ^ Респираторная система Аспирационная пневмония, бронхопневмония, хроническая гранулематозная пневмония, специфические пневмонии, pneumonia verminosa ^ Воспаление, межуточный отек, обструкция бронхов Сердечно-сосудистая система Миокардит, инфекционный эндокардит Воспаление, склероз, метастатическая минерализация ^ Желудочно-кишечный тракт Стоматит, эзофагит, гастрит, атрофический гастрит, пролиферативный гастрит, энтериты, колит, псевдомембранозный колит, идиопатический илеус игуан, клоацит ^ Воспаление, стресс-индуцированная атрофия, кальций-зависимые крампи, внутрисосудистый тромбоз Пищеварительные железы ^ Гепатит, гепатоклеточный липидоз, вакуольная (гидропическая) дистрофия печени, холангит, желчекаменная болезнь, панкреатит, сахарный диабет Обменные нарушения, холестаз, воспаление, некроз и фиброз ^ Половая система Фолликулярный стаз, постовуляторная дистоция, пиосальпингит, острое спонтанное кровотечение яичников, желточный целомит ^ Нарушение баланса ФСГ, ЛГ и эстрогенов, воспаление, метастатическая минерализация Выделительная система Интерстициальный нефрит, гломерулонефрит, пиелонефрит, нефрокальциноз, первичная подагра почек, уролитиаз Гиперурикемия, гиперфосфатемия, вторичный гиперпаратиреоидизм, кальцифилактическая минерализация, воспаление, тубулярный некроз, снижение СКФ, десквамация тубулярного эпителия ^ Метаболические болезни Гипо- и гипервитаминозы, микроэлементозы, ВПГ (рахит, остеомаляция), остеоренальный синдром, известковая подагра, висцеральная, суставная и почечная подагра, амилоидоз ^ Вторичный гиперпаратиреоидизм, фиброзная остеодистрофия, метастатическая минерализация, гиперфосфатемия, гиперурикемия Рис.1 Оссифицирующий спондилит у варана Рис.2. Фиброзная остеодисплазия у игуаны (гематоксилин-эозин ×100) В исследованных нами случаях выделялись две характерные гистопатологические особенности: высокая активность остеокластов с высоким митотическим индексом и заметная пролиферация фибробластов, что отличает эту картину от фиброзной дисплазии млекопитающих и человека. В некоторых участках картина может напоминать саркомоподобную опухоль, но отличается от нее неинвазивным характером роста. Для лечения нами разработана операция остеотомии с пластикой нижней челюсти. Установлено, что в комплексе заболеваний печени особое место занимает гепатоклеточный липидоз - одна из самых распространенных болезней у рептилий в неволе (Frye, 1981; Will, 1975; Zwart, 1985). Прижизненные исследования патологического процесса при гепатоклеточном липидозе включали копроскопию, цитологическое исследование асцитной жидкости, общеклиническое и биохимическое исследование крови, рентгенографию в боковой проекции, ультрасонографию, эксцизионную биопсию с нижнего края правой доли печени, которую проводили с помощью ригидного эндоскопа по методу Hernandez-Divers, Cooper (2001). Умеренные изменения, характерные для этого заболевания, мы регистрировали не менее чем у 60% павших рептилий. Исход