www.diplomrus.ru ® Авторское выполнение научных работ любой сложности – грамотно и в срок Содержание Введение... 41. Обзор литературы... 91.1 Общая характеристика инфузорий рода Trichodina... 91.2 Триходиноз аквариумных рыб... 141.2.1. Клиническая картина триходиноза рыб... 221.2.2. Диагностика триходиноза аквариумных рыб... 241.2.3. Лечение рыб, больных триходинозом... 262. Собственные исследования... 292.1. Материалы и методы исследования... 292.2. Результаты собственных исследований... 432.2.1. Данные эпизоотологического мониторинга... 432.2.2. Результаты наблюдений по экспериментальным группам... 492.2.2.1. Группа 1 (три периода течения триходиноза) ... 512.2.2.2. Группа 2 (зависимость течения и схемы лечения триходиноза от вида возбудителя и лечебный эффект препарата High-Q при клинически выраженном периоде болезни)... 572.2.2.3. Группа 3 (лечебный эффект препарата Sera costapur при клинически выраженном периоде болезни)... 632.2.2.4. Группа 4 (лечебный эффект препарата High-Q при терминальном периоде болезни)... 662.2.2.5. Группа 5 (лечебный эффект препарата Sera costapur при терминальном периоде болезни)... 6923. Обсуждение результатов... 83Выводы... 93Практические предложения... 95Список литературы... 96Приложения Введение ВВЕДЕНИЕ.Актуальность темы. В настоящее время широко распространено увлечение аквариумным рыбоводством. Повышение уровня жизни населения, возможность строительства и приобретения дополнительной жилплощади позволили расширить круг домашних питомцев. В него, естественно, вошли экзотические рыбы, наблюдение за жизнью которых благотворно влияет не только на настроение их владельцев, но и на микроклимат в жилых и рабочих помещениях, где, особенно зимой, наблюдается повышенная сухость воздуха.Технически нетрудное содержание рыб на базе достижений современной аквариумной техники служит дополнительным стимулом дальнейшего развития домашней аквариумистики.Однако нередко объекты аквакультуры поражаются различными инвазионными и инфекционными болезнями, наносящими большой экономический и моральный ущерб аквариумному рыбоводству и частным владельцам рыб. По данным статистики в городе Москве, среди таких заболеваний одной из причин высокой смертности аквариумных рыб является триходиноз.Триходиноз - инвазионное заболевание диких, прудовых и аквариумных рыб, вызываемое паразитическими инфузориями относящимися к подтипу Ciliophora, классу Ciliata, отряду Peretricha, подотряду Mobilia, семейству Urceolariidae, роду Trichodina). Urceolariidae - группа округлых ресничных инфузорий, паразитирующих на морских и пресноводных видах костных рыб.Способность паразитических инфузорий рода Trichodina к быстрому размножению при изменении условий содержания или, когда рыба находится в состоянии стресса под действием тех или иных факторов, делает раннюю диагностику этой инвазии приоритетной в аквакультуре (Корзюков Ю. А., 1979). На быстроту распространения и исход болезни влияет ряд условий: состояние резистентности организма рыб, температура воды, газовый режим водоема и др. Исход болезни неодинаков и зависит как от состояния организма рыбы, так и от окружающей среды и ее изменений.Триходиноз у промысловых рыб не имеет существенного эпизоотологического значения, так как в открытых естественных водоемах со сравнительно низкой плотностью расселения рыб болезнь не принимает широкого распространения.Иначе обстоит дело с аквариумными рыбами, у которых в последнее время триходиниоз приобретает все возрастающую роль. В закрытых, а именно, специально оборудованных водоемах, где поддерживаются специфические условия разведения и содержания рыб, имеется благоприятная среда для существования, размножения и распространения триходин. Паразитарные поражения аквариумных рыб наносят в условиях выраженного расширения сферы аквариумного рыбоводства значительный экономический ущерб рыборазводням, зоомагазинам, частному сектору, занятому рыботорговлей. К тому же, кроме экономической, существует этическая сторона проблемы патологии аквариумных рыб ввиду их статуса домашних питомцев.Однако в литературе последних лет не уделяется достаточного внимания обсуждению проблемы триходиноза не только в аквариумном, но и в прудовом рыбоводстве указанным вопросам, а опубликованные работы больше посвящены биологическим аспектам изучения триходин (Lom J., 1970; Ama-Abasi D. E., Okon I. M., 1997; Ama-Abasi D. E., Holzlohner S., 1998; Ozer A., Erdem O., 1999; Ozer A., 2000, 2003). В них практически отсутствуют сведения о распространении и экономической значимости заболевания, особенностях эпизоотологии болезни, разработке и применении новых препаратов, мерах профилактики и борьбы с ней, в том числе в организационном плане. Поэтому углубленное изучение триходиноза в аквакультуре является в настоящее время актуальной задачей.Цель и задачи исследования. Определить широту распространения триходиноза аквариумных рыб в городе Москве, усовершенствовать диагностику, лечение и меры профилактики этого заболевания.Для достижения данной цели определены следующие задачи:- выяснить распространенность триходиноза среди тропических аквариумных рыб на подконтрольных ветеринарной службе объектах г. Москвы: зоомагазины, рыборазводни, частный сектор;- усовершенствовать диагностику триходиноза аквариумных рыб;- изучить динамику клинического проявления триходиноза при его естественном течении;- оценить проявление триходиноза в зависимости от вида возбудителя;- разработать методы лечения триходиноза на основе имеющихся медикаментозных препаратов;- усовершенствовать и внедрить в практику разведения и выращивания аквариумных рыб научно обоснованную систему мероприятий по профилактике, диагностике и лечению триходиноза в городе Москве.Научная новизна. Уточнено значение триходиноза аквариумных рыб в городе Москве по эпизоотологическим данным.Установлено отсутствие зависимости симптомов и характера течения заболевания от вида возбудителя, что исключает необходимость его видовой идентификации в диагностическом процессе.Констатирована высокая вероятность сочетанной с триходинозом бактериальной патологии в тяжелой стадии заболевания.Практическое значение работы. Предложен для практического использования разработанный нами метод анестезии аквариумных рыб во время диагностических манипуляций и щадящую методику взятия патологического материала с тела рыбы жесткой кисточкой.С учетом выделенных трех различных по тяжести периодов течения триходиноза рекомендованы соответствующие средства и режим лечения.При осложнении триходиноза бактериальной инфекцией обоснована необходимость и предложена схема применения препаратов комбинированного антибактериального и антипаразитарного действия.Недостаточная эффективность первичного лечения оправдывает назначение повторного лечебного курса.По результатам исследований предложена схема профилактики и борьбы с триходинозом, которая внедрена в практическую работу отдела диагностики болезней рыб Московской городской ветеринарной лаборатории и ветеринарного пункта на зооботаническом рынке «Садовод».Апробация полученных результатов. Основные материалы диссертации доложены на 12-ом Московском международном ветеринарном конгрессе по болезням мелких домашних животных (22-24.04. 2004 г.).Публикации. Материалы диссертации отражены в четырех опубликованных научных статьях.Основные положения, выносимые на защиту:• Анализ и оценка эпизоотической ситуации по триходинозу аквариумных рыб в г. Москве.• Упрощение процедуры микроскопической диагностики триходиноза путем идентификации возбудителя не до вида, как общепринято, а до рода.• Выделение трех периодов в течении триходиноза.• Установленная вероятность осложнения тяжелой стадии триходиноза сочетанной бактериальной инфекцией.• Целесообразность комбинированного лечения паразитарной и бактериальной инфекции.• Система мероприятий по профилактике и борьбе с триходинозом аквариумных рыб в городе Москве.1. Обзор литературы.1.1 Общая характеристика инфузорий рода Trichodina.Триходиноз - инвазионное заболевание диких, прудовых и аквариумных рыб, вызываемое паразитическими инфузориями относящимися к подтипу Ciliophora, классу Ciliata, отряду Peretricha, подотряду Mobilia, семейству Urceolariidae, роду Trichodina).Urceolariidae относятся к наиболее сложно устроенному семейству среди простейших. Инфузория имеет округлую форму диаметром до 50 мкм. Задний конец блюдцеобразно расширен, образуя прикрепительный диск. По краю этого диска находится прикрепительное кольцо (прикрепительный венчик), состоящее из многочисленных эктоплазматических члеников, образующих либо гладкое, либо зубчатое, благодаря наличию у члеников отростков, кольцо. При помощи этого фиксаторного аппарата паразит прикрепляется к рыбе (Быховский Б. Е., 1962).Органеллами движения служат многочисленные реснички, покрывающие целиком или частично поверхность тела инфузорий. Реснички слипаются между собой, образуя подвижные пучки - цирри и пластинки различной длины и толщины - мембраны и мембранеллы. Уплотненный поверхностный слой эктоплазмы формирует пелликулу, придающую постоянную форму телу. Эктоплазма представляет собой полужидкую массу, находящуюся в постоянном круговом движении - циклозе, и содержит сократительные и чувствительно-проводящие волоконца.Семейство Urceolariidae - единственное семейство подотряда Mobilia, паразитирующее на поверхности тела или во внутренних полостях морских и пресноводных рыб.Размножение паразита происходит в месте его локализации путем простого поперечного деления на две дочерние клетки. Инфузория при помощи перетяжки разделяется на две равные части. В каждой из них имеется по половинному набору крючьев, которые скоро пропадают, а на их месте образуется новый прикрепительный венчик. Реже инфузория размножается конъюгацией - временным соединением двух особей, которые при этом обмениваются частями своего ядерного аппарата (Корзюков Ю. А., 1979).В течение длительного времени большинство исследователей относили Urceolariidae у рыб к одному виду Trichodina domerguei (Wallengren A., 1897) или описывали их, как формы этого вида. Существовали и противоположные взгляды, когда каждое новое выделение считали другим видом. Все это создавало путаницу в систематике семейства.Первая попытка ввести объективные критерии для характеристики видов была предпринята В. А. Догелем (1940, 1948). Позднее Z. Raabe (1959) и J. Lom (1959) внесли существенный вклад в упорядочение систематики семейства Urceolariidae. При определении В. А. Догель в основном изучал инфузории, зафиксированные на мазках жидкостью Шаудинна и окрашенные железным гематоксилином Гейденгайна, тогда как Z. Raabe и J. Lom большей частью пользовались методикой серебрения AgNCb по Клейну. При сравнениирезультатов применения обеих методик по отношению к одному и тому же10объекту оказалось, что ни тот, ни другой способ не выявляет полностью всех структур инфузории. При серебрении наиболее четко видны адоральная спираль (рис. 1, 16-19), ресничный аппарат и прикрепительный диск (рис. 1, 96). Гематоксилином хорошо окрашивается ядерный аппарат, а в прикрепительном диске обычно выявляются лишь наиболее плотные части венчика и розетки, тогда как менее плотные структуры при излишней дифференцировке обесцвечиваются, вследствие чего не удается рассмотреть действительную форму зубцов. Поэтому для целей систематики необходимо сочетание обеих методик, дающее более или менее четкую картину (Быховский Б. Е., 1962). В некоторых случаях для уточнения структуры ядерного аппарата используется нуклеальная реакция Фольгена (Быховский Б. Е., 1962). Для изучения формы тела инфузорий, характера их ресничного покрова, а также способа движения большое значение имеют прижизненные наблюдения. Структура адоральной спирали и прикрепительного диска у многих видов может быть выявлена при фиксации инфузорий 4%-м раствором формалина на сырых мазках под покровным стеклом. Так, под действием формалина тело инфузорий деформируется очень незначительно, основные промеры, исключая измерения ядер, могут быть сделаны на таких временных препаратах.Вопрос об образовании инфузориями вообще (и триходиной, в частности) покоящихся стадий далеко не решен. Имеются скудные сообщения о том, что другие паразитические инфузории - эктопаразиты рыб Ichthyophthiriusmultifiliis и Oodinium pillularis образуют покоящиеся стадии (покрываются11цистой), о чем сообщает Ю. А. Корзюков (1979). Его упоминание о том, что данные инфузории покидают тело рыбы и опускаются на дно, где образуют стадию цисты и прикрепляются к грунту и растениям, вызывают у некоторых исследователей сомнения, так как при диагностике для идентификации паразитических инфузорий взять такую пробу представляется технически сложным, а методология этого не описана. В доступной нам литературе описания покоящейся стадии триходин мы не нашли. Ю. А. Корзюков (1979) упоминает об отсутствии инкапсулирования у триходин.Большинство ошибок в рыбоводстве связано с неправильным подходом к лечению больных рыб, основанном только на клинических симптомах болезни, без предварительной микроскопической диагностики. В то же время многие паразиты рыб могут быть идентифицированы при микроскопическом исследовании, что позволяет определить оптимальную лечебную тактику, включающую воздействие именно на установленного паразита. Как правило, авторы соответствующих работ доводят идентификацию до вида.Методика видового определения триходин разработана В. А. Догелем (1940, 1948), J. Lom (1959), Z. Raabe (1959).При определении до вида инфузорий рода Trichodina используются следующие признаки (рис. 1):- строение зубцов, образующих венчик (1-5);- число зубцов в венчике (9в);- число полос прикрепительного диска, или розетки, приходящихся на одинзубец или расположенных между наружными отростками двух соседних12101115Рис. 1.12131419Строение инфузорий рода Trichodina (по Быховскому Б. Е., 1962).13зубцов (6);- длина наружного отростка зубца (7а);- длина внутреннего отростка зубца (76);- диаметр тела (8а, 9а);- высота тела (86);- диаметр прикрепительного диска - розетки (96);- диаметр венчика зубцов (9в);- форма и диаметр макронуклеуса (10а, 11а);- величина отрезка х - расстояние между концами макронуклеуса (11);- форма и размеры микронуклеуса (12а);- величина отрезка у - расстояние от микронуклеуса до ближайшего конца макронуклеуса (может быть равен 0, иметь положительное или отрицательное значение) (11-15);- длина адоральной спирали (16-19); кроме того, на препаратах, обработанных AgNO3, принимается во внимание характер импрегнации серебром центральной зоны прикрепительного диска.1.2 Триходиноз аквариумных рыб.Из данных литературы известно, что на аквариумных рыбах паразитируют несколько видов инфузорий, относящихся к роду Trichodina. Trichodina domerguei forma acuta, T.reticulata, T.pediculus, T.nigra локализуются в основном на поверхности кожного покрова рыбы. Вместе с тем их можно встретить и в жабрах. T.modesta и T.mutabilis преимущественно паразитируютна жабрах. Часто на одной и той же рыбе можно встретить инфузорий14нескольких видов (Корзюков Ю. А., 1979). T.reticulata, паразитирующая на золотых рыбках (Carassius auratus L.), была описана в Европе, но возможно ее происхождение из Азии (Hoffman G. L., 1970). Также она была обнаружена у золотых рыб в штатах Арканзас (Hoffman G. L., Schubert G., 1984), Алабама, Миссисипи, Луизиана, Джорджия, Кентукки, Южная Каролина (Wellborn Th. L., 1967), и Пенсильвания (Lorn J., Hoffman G. L., 1964). T.subtilis поражает жабры золотых рыб и других рыб в Евразии (Lorn J., Haldar I., 1977) и в США (Lorn J., Hoffman G. L., 1964; Hoffman G. L., 1978). Trichodina reticulata Hirschmann, Partsch, 1955.Округлое тело высотой 7,7-12,3 мкм. Диаметр прикрепительного диска 23,1-32,3, венчика 13,1-16,9 мкм. Число зубцов в венчике равно 19-22, чаще 20-21. Наружные отростки серповидные, расширенные на конце в виде округлой лопасти, их длина 3,7-5,2 мкм. Средняя часть подковообразного макронуклеуса сильно утолщена. Яйцевидный микронуклеус лежит у одного из концов макронуклеуса. Адоральная спираль, начинаясь на одной из сторон тела, поворачивает по возвышению адорального конца против часовой стрелки, затем идет вниз вокруг тела и доходит до рта. Реснички, располагающиеся по краю адоральной борозды, очень короткие. Расширения на концах наружных отростков тупо срезаны. Trichodina pediculus Ehrenberg, 1838.Диаметр тела в среднем равен 45,0 мкм , венчика 24,0 мкм . Число зубцов в венчике от 23 до 26, чаще 23 зубца. Зубцы довольно массивные, наружныеотростки широкие, лемеховидные, внутренние относительно короткие,15шиловидные. Отношение диаметра тела к диаметру венчика приближается к 2 (1,9). Макронуклеус очень тонок, узок и постепенно сужается к обоим концам, в среднем 29,0 мкм в диаметре, слабо изогнут вследствие чего отрезок х = 22,0 мкм. Микронуклеус располагается с наружной стороны одной из ветвей макронуклеуса. Величина отрезка у варьирует от +2,0 до +3,0 мкм . На каждый зубец приходится 11-12 (чаще 11) полос прикрепительного диска. Trichodina nigra Lom, 1960Тело дисковидное, приподнятое посередине, его стенки сморщены, а велюм развит в виде узкой складки. Диаметр тела 50,0-95,0 (в среднем 61,0-79,0), прикрепительного диска 32,0-69,0 (43,0-54,0), венчика 20,0-39,0 (27.0-33.0) мкм. Характерной особенностью вида является способность прикрепительного диска сильно импрегнироваться AgNO3, так что светлая зона в центре диска отсутствует. Зубцы тонкие, округлые, широкие наружные лопасти и длинные прямые внутренние шипы с широкими основаниями, постепенно конически сужающиеся по направлению к центру. Число зубцов от 17 до 23 в разных популяциях, чаще 21-23, 25-29. Диаметр макронуклеуса 32,0-52,0 мкм. Удлиненный микронуклеус (1,0-2,5 х 3,0-5,5мкм) расположен вблизи левого конца макронуклеуса. Величина отрезка у варьирует от+5,0 до 22,0 мкм. Адоральная зона образует полную спираль (380-390°). Ширина краевой мембраны 4,0-5,Омкм. Trichodina domerguei f. acuta Lom, 1961Тело дисковидное, различной высоты, иногда сжато посредине. Адоральнаязона образует спираль 380-390°, проходящую как раз около края адоральной16поверхности тела и включающую три адоральных ресничных кольца. Краевые ресницы тонкие, редкие и загнуты вверх. Сократительная вакуоль соединяется с вестибуломом и эксцентрично смещена, как и у большинства других видов. Прижизненно видны только нижние края тонких наружных лопастей зубцов, образующих венчик. На импрегнированных AgNCh препаратах в центре прикрепительного диска наблюдается светлая центральная зона, свободная в большинстве случаев от импрегнирующихся частиц и окруженная сильно импрегнирующейся зоной, чем этот вид явственно отличается от Trichodina nigra. Венчик состоит из сильно изогнутых, остро заканчивающихся зубцов. Центральные части зубцов широкие, отчетливо конические. Наружные лопасти сравнительно короткие, с заостренными концами. Диаметр тела 50,0-86,0 мкм, его высота 13,0-25,0 мкм, диаметр прикрепительного диска 30,0-66,0 мкм, венчика 18,0-40,0 мкм. Число зубцов от 15 до 23, чаще 18-21. На каждый зубец приходится 9-11 полос прикрепительного диска. Размеры зубцов: общая длина зубца 10,0-11,0 мкм, ширина центральной конической части 3,0-4,0 мкм. Диаметр макронуклеуса 38,0-50,0 мкм. Удлиненный микронуклеус (1,5-2,5x3,5-6,0 мкм) расположен с наружной стороны на расстоянии 6,0-23,0 мкм от конца макронуклеуса.Здоровые рыбы заражаются при совместном содержании с больными. Распространение возбудителей происходит с зараженной рыбой или водой, в которой триходины могут довольно долго (1-1,5 суток) свободно плавать (Бауер О. Н. и др. 1981).17Список литературы