Аллахвердиев А.М.
Литературныеданные о способах синхронизации малярийных паразитов немногочисленны и имеютряд ограничений.
Длясинхронизаций культур возбудителя тропической малярии широко используетсясорбитал или его комбинация с желатином (Lambors et al., 1979; Kilejian, 1960).Сорбитол лизирует эритроциты, заряженные зрелыми формами паразита, а послесинхронизаций кольцевидные стадии в культурах составляют около 95 %. В тo жевремя при использования сорбитола в культуре лизируется также значительнаячасть интактных эритроцитов, а синхронизация сохраняется лишь 1-2 поколения.
Внастоящем сообщении представляются предложенные нами способы синхронизациикультур эритроцитарных стадий возбудителя тропической малярии Р. falciparum.Данные приёмы основаны на том, что паразиты не развиваются полностью в средах, гдеотсутствуют какие-либо необходимые компоненты. Мы использовали среду МЕМ-4 (с10 % сывороткой) и RPMI-1640 (без сыворотки). Такие условия позволяют паразитудостигнуть стадии трофозоита, но не позволяют перейти в стадию шизонта изавершить полный цикл внутриэритроцитарного развития.
Нижеприводятся три способа синхронизации паразитов в культуре.
СпособI. Культура малярийных паразитов с исходной паразитемией 2-3 % из питательнойсреды RPMI-1640 переносится в среду МЕМ-4. В данной среде через 72-96 часовзамедляется развитие паразитов, следовательно в культуре независимо отисходного состава популяций паразитов остается 92-97 % трофозоитов. После того,проводится пересев с исходной паразитемией 0, 3-0, 5 % и культивируется в средеRPMI-1640.
СпособII. Синхронизация культур малярийных паразитов в данном способе осуществляетсяс использованием неполной питательной среды RPMI-1640 (без сыворотки.).Культура малярийных паразитов культивируется в данной среде в течение 24-48часов. После того в культуре трофозоиты составляют около 95 %, Затем проводятпересев с исходной паразитемией 0, 3-0, 5 % и продолжают культивирование вполной среде с 10 % сывороткой.
СпособIII. Известно, что путем центрифугирования в стеклянном капилляре эритроциты, зараженныеP. falciparum можно разделить по возрасту (Л.Н. Гринберг, 1985). Исходя из этихпредставлений нами предпринята попытка синхронизировать культуры малярийныхпаразитов с использованием данного способа.
Суспензиюзараженных эритроцитов P. falciparum с исходной паразитемией 5-6 %;гематокритом 30-50 % набирают в капилляр диаметром 1, 0 мм и длиной 75 мм, закрывают замазкой и центрифугируют в гематокритной центрифуге 10 мин при 15000 g. В зависимости от плавучей плотности зрелые паразиты концентрируются в верхней частикапилляра в виде темно-коричневого цвета (до разделения общий состав популяцийпаразитов был: 12, 5 % кольцевидных, 47, 5 % трофозоитов и 40 % шизонтов, апосле разделения в верхней части она соответственно составляла: 1, 6; 8, 1; 90,3 %). Соблюдая стерильность, отделяют эту часть и вводят в культуру со свежимиэритроцитами. Через 24 часа проводят пересев с исходной паразитемией 0, 3-0, 5%.
Такимобразом, предложенные способы позволяют синхронизировать культуру малярийныхпаразитов в течение 24-96 часов не используя химические и др. агенты. Ониявляются более физиологическими и могут быть используемы для синхронизациикультуры малярийных паразитов.
Список литературы
Дляподготовки данной работы были использованы материалы с сайта www.ex-situ.ru/