Этот файлвзят из коллекцииMedinfo
www.doktor.ru/medinfo
medinfo.home.ml.org
E-mail: medinfo@mail.admiral.ru
or medreferats@usa.net
or pazufu@altern.org
FidoNet 2:5030/434 Andrey Novicov
Пишем рефератына заказ — e-mail:medinfo@mail.admiral.ru
В Medinfo для вассамая большаярусская коллекциямедицинских
рефератов, историй болезни, литературы, обучающихпрограмм, тестов.
Заходитена www.doktor.ru — Русскиймедицинскийсервер длявсех!
ЯрославскаяГосударственнаяМедицинскаяАкадемия
Кафедрапропедевтикивнутреннихболезнейпедиатрическогофакультета
Учебно-методическоепособие длястудентов IIIкурсапедиатрическогофакультета
Лабораторныеметоды диагностики
( часть первая)
ИССЛЕДОВАНИЕКРОВИ
Ярославль,1997
Цельзанятия:
Овладениестудентамиметодикойобщего клиническогоанализа кровии клиническойоценкой полученныхданных.
Порядокисследования:
Морфологическоеисследованиекрови состоитиз:
— определенияколичествагемоглобина,
— определенияколичестваэритроцитови
— лейкоцитовв 1 ммЗ крови,
— подсчеталейкоцитарнойформулы,
— цветовогопоказателя, а также
— определенияскорости оседанияэритроцитов(СОЭ).
Режеприсоединяютподсчет ретикулоцитов, тромбоцитов.
Дляморфологическогоисследованиядостаточнотого количествакрови, котороеможно получитьиз укола в палец.
Техникавзятия крови
Исследованиякрови следуетвсегда производитьв одно тожевремя при одинаковыхусловиях, доприема пищи.Кровь берутиз IV пальца левойруки. Передуколом палецдезинфицируюти обезжиривают, протирая еговатой, смоченнойспиртом, а затем
эфиромили их смесью.Прокол производятлибо стерилизованнымскарификатором, либо иглойФранка со сменнымистерилизуемымилезвиями. Уколобычно производитсяв верхушкумякоти первойфаланги наглубину 2,5 — 3 мм.Полученнуюпосле уколапервую каплюснимают фильтровальнойбумагой иливатой, смоченнойэфиром. Кровьдля исследованияберут в определенномпорядке: для
определенияСОЭ, гемоглобина, затем — для подсчеталейкоцитови эритроцитов; делают мазки.После взятиякрови, мякотьпальца оборачиваетсясмоченнойэфиром илиспиртом ватойи прижимаетсяк ладони длятого, чтобыостановитькровотечение.
Определениескорости оседанияэритроцитов(СОЭ)
Оборудованиеи реактивы:
1. АппаратПанченкова.
2. КапиллярыПанченкова.
3. 5% растворлимоннокислогонатрия (свежеприготовленный).
4. Часовоестекло.
5. ИглаФранка илискарификатор.
6. Вата.
7. Спирт.
АппаратПанченковасостоит изштатива с капиллярами(12 шт.) шириной1 мм, на стенкекоторых нанесеныделения от 0 (сверху) до 100(снизу). На уровне0 имеется букваК (кровь), а насередине пипетки, около метки50 — буква Р (реактив).
Ходисследования:
В капиллярПанченкованабирают 5% растворлимоннокислогонатрия до метки50 (буква Р) и выдуваютна часовоестекло. Из уколапальца, держакапилляргоризонтально, набирают кровьдо метки 0 (БукваК). Затем выдуваюткровь на часовоестекло с лимоннокислымнатрием, послечего вторичнонабирают кровьдо метки 0 ивыпускаютдополнительнок первой порции.
Следовательно, на часовомстеклышкеимеется соотношениецитрата и крови, равное 1:4, т. е.четыре объемакрови в одинобъем реактива.Перемешиваюткровь концомкапилляра, набирают еедо метки 0 и ставятв аппарат Панченковастрого вертикально.Через час отмечаютчисло миллиметровстолбика плазмы.
Оценкаполученныхданных:
Внорме СОЭ равнадля мужчин 4-10мм, для женщин4-15 мм в час.
Определениесодержаниягемоглобина
Оборудованиеи реактивы:
1. ГемометрСали.
2. Пипеткаот гемометраСали.
3. 0,1 N HCI.
4. Дистиллированнаявода.
5. Пипетка.
6. Стекляннаяпалочка.
7. ИглаФранка илискарификатор.
Дляколичественногоопределениягемоглобинапользуютсяобычно колориметрическимспособом. Принципопределениязаключаетсяв превращениигемоглобинакрови в солянокислыйгематин и сравнениицвета полученногос имеющимсяв приборе стандартом.Прибором дляопределенияслужит гемометрСали. Он состоитиз двух запаянных
пробироксо стандартнойцветной жидкостью1% раствор солянокислогогематина вглицерине), содержащей16,67 г% гемоглобина(16,67 г на 100 мл крови). Между нимирасположенаградуированнаяпробирка, имеющаядве шкалы. Одна- с делениямиот 0 до 23 служитдля определениягемоглобинав граммах на100 мл крови, т. е.в грамм процентах; другая шкалас делениямиот 0 до 140 показываетединицы гемоглобина(процент гемоглобина).
Ходисследования:
Вградуированнуюпробирку, находящуюсяв среднем прорезе, наливают доначала шкалы0,1N раствор солянойкислоты. Затемиз места уколана мякоти пальцапипеткой Салинабирают кровьдо метки 0,02 мл(20 мм3), насасываяее ртом черезнадетую наверхний конецпипетки резиновуютрубочку состеклянныммундштуком.Кончик пипеткиобтирают открови и опускаютв пробирку ссоляной кислотой, осторожновыдувая содержимое, чтобы не образовалисьпузырьки воздуха.Ударяя пальцемпо нижней частипробирки, тщательноразмешиваюткровь и оставляютее на 5 мин. дляобразованиясолянокислогогематина. Заэто время набираюткровь для остальнойчасти анализа.По истеченииэтого времениприливают впробирку покаплям дистиллированнуюводу, размешиваястекляннойпалочкой дотех пор, покацвет раствораисследуемойкрови полностьюсравняетсяс цветом стандартнойжидкости. Отмечают, на каком делениинаходится вградуированнойпробирке нижниймениск растворакрови, показывающийсодержаниегемоглобинав г% или единицах(процентах).
Оценкаполученныхданных:
В нормесодержаниегемоглобинав грамм-процентаху мужчин колеблетсяот 13,3 до 18 г%, у женщин- от 11,7 до 15,8 г% (в среднем13,7); в единицах(процентах) умужчин — от 80 до108 ед., у женщин- от 70 до 95 ед.
Определениеколичестваэритроцитови лейкоцитов
Оборудованиеи реактивы:
1. смесители(меланжеры) илипробирки дляподсчета эритроцитови лейкоцитов.
2. 3% — растворNaCl (для разведенияэритроцитов)или жидкостьГайема.
3.3% раствор уксуснойкислоты.
Счетная камера.
Смесителипредставляютсобой капиллярнуюпипетку срасширением-ампулой, содержащейбусинку, способствующуюсмешению кровис разводящейжидкостью. Смесители, предназначенныедля подсчетаэритроцитов, обладают капилляромболее тонкогокалибра и болееобъемистойампулой на нихнанесены меткиодна — 0,5 другая- перед входомв ампулу — 1.0, третья- у выхода изампулы — 101.
Принабирании кровидо метки 0,5 онаокажется разведеннойв 200 раз, при набираниидо 1,0 — в 100 раз. Дляразведенияэритроцитовприменяют 3%раствор повареннойсоли или жидкостьГайема, в которойлучше сохраняетсяформа эритроцитов.Смеситель длялейкоцитовимеет болееширокий просветкапилляра именьшую повеличине ампулу.Нанесены триметки: 0,5, 1,0 и 11. Этопозволяетразвести кровьв 10, либо в 20 раз(чаще разводятв 20 Раз). Для разведениялейкоцитовиспользуют3 — 50% раствор уксуснойкислоты. Уксуснаякислота растворяетэритроциты, что позволяетвести подсчеттолько лейкоцитов.
Счетнаякамера.
Дляподсчета форменныхэлементовнаиболее частоприменяетсякамера типаБюркера свыгравированнойна ней сеткойГоряева. Счетнаякамера состоитиз толстогопредметногостекла с особымуглублением.На дне углублениясчетной камерывыгравированасетка, в клеткахкоторой иподсчитываютсяформенныеэлементы. Покраям углубленияимеются возвышения, куда накладываетсяпокровноестекло. Междунижней поверхностьюэтого стеклаи дном углубленияобразуетсязамкнутоепространство, которое ипредставляетсобой счетнуюкамеру. Глубинакамеры соответствует0,1 мм. Счетнаякамера типаБюркера разделенапополам глубокойканавкой иимеет на каждойполовине сеткуГоряева, чтопозволяет сразусчитать 2 капли, не заполняявновь камеры.Сетка Горяеваимеет 225 большихквадратов(15Х15), 25 из которыхразделены намалые, по 16 вкаждом; имеютсятакже пустыеквадраты, собранныев группы по 4квадрата. Всегов сетке 100 большихпустых квадратов, собранных в25 групп (5X5). Каждаясторона маленькогоквадратикаравна 1/20 мм, а таккак высотакамеры составляет0,10 мм, то объемравен 1/4000 ммЗ.
Ходисследования:
Дляподсчета эритроцитовберут смесительдля эритроцитов, надевают резиновуютрубочку, легкимнасасываниемнабирают кровьиз укола дометки 0,5. Избытоккрови удаляютфильтровальнойбумагой, послечего кончиксмесителяпогружают вприготовленныйзаранее флаконс 3% растворомповареннойсоли или растворомГайема и насасываютраствор, заполняявсю ампулу дометки 101. Тотчасснимают резиновуютрубку, зажимаютсмеситель подлине междубольшим иуказательнымили среднимпальцем и встряхиваютв течение 3 минут.После этогозаполняютсчетную камеру, сливают
1-2капли и выпускаютпоследующуюкаплю на сетку.
Дляподсчета лейкоцитовкровьиз места уколанабирают дометки 0,5, затемразводят 3% растворомуксусной кислотыдо метки 11. Энергичновстряхиваютв течение 3 минут, после чегосливают
1-2 каплии заполняютсчетную камеру.При работе спробирками
дляподсчета эритроцитов, наливают 4 мл3% раствораповареннойсоли или жидкостиГайема и в неевыпускают 0,02мл. крови,
отмереннойпипеткой отгемометра Сали.Для подсчетабелых кровяныхэлементов впробирку наливают0,4 мл 3 — 5% раствора
уксуснойкислоты и 0,02 млкрови. Энергичновстряхиваютпробирки, затемв жидкостьопускают пипеткуиз гемометраСали и,
набравсодержимое, заполняютсчетную камеру.
Заполнениесчетных камер:
Хорошовымытое и вытертоешлифованноепокровноестекло накладываютна выступающиебоковые края.Мякотью большихпальцев покровноестекло притирают, двигая вверхи вниз, все времяплотно прижимая, пока не появятся, так называемые, Ньютоновыкольца. Передзаполнениемкамеры вновьэнергичновстряхиваютсмесители.выпускают 2капли на фильтровальнуюбумагу, а третьейзаполняют щелкумежду камеройи покровнымстеклом. Жидкостьпо капиллярностизасасываетсямежду ними изаполняетпространствонад сеткой.Жидкость призаполнениикамеры не должназатекать вжелобки, еслиэто стучится, то ее удаляютфильтровальнойбумагой.
Подсчетэритроцитов.Подсчет производятспустя 1-2 минуты(когда эритроцитыосядут на днокамеры), пользуясьобъективом 40Х и окуляром7X, либо объективом8Х и окуляром15Х.
Чтобыне сбиться сосчета, придерживаютсяопределенной
последовательностисчета: передвигаяиз квадратав квадрат по
горизонталиодин ряд слеванаправо, следующий- справа налево.Считают, помимонаходящихсявнутри квадрата, все эритроциты, лежащие на двухлиниях, например, на левой и верхней, и пропускаютвсе лежащиесправа и снизу.Считать эритроцитынадо в 5 большихквадратах, т.е. в 80 маленьких.
Чтобыизбежать неточности, вследствиене вполнеравномерногораспределениякрови в камере, выбирают дляподсчета не5 рядом лежащихквадратов, апродвигаютсяпо всей сетке.
Количествоэритроцитовв 1 ммЗ (искомое)вычисляютследующимобразом: единицейсчета всегда, при всякомподсчете, влюбой сеткеслужит малыйквадрат. Объемего, как былоуказано, равен1/4000 мм3. Сосчитавэритроцитыв 5 больших квадратах(80 малых квадратов), делят это количествона 80 и умножаютна 200 (степеньразведениякрови) и на 4000(чтобы получитьколичество
клетокво всем кубическоммиллиметре); практически, следовательно, полученноечисло умножаютна 10000 (прибавляютчетыре нуля).
Пример: В 80 маленькихквадратахподсчитано480 эритроцитов.Следовательно, количествоэритроцитовв 1 ммЗ кровиравно:
480*4000*200
— =4 800 000
80
Подсчетлейкоцитов.Для получениядостаточноточного результатапри подсчетелейкоцитовнеобходимососчитать неменее 100 большихквадратов(=1600 малых). Количестволейкоцитовв 1 мм3 получаетсяследующимобразом: число, сосчитанноев3100 большихквадратах, делят на 1600 (приводятк 1 малому квадрату)и умножают на20 (степень разведения)и на 4000; практически, сокращая постоянныецифры формулы, количествососчитанныхлейкоцитов(при разведениив 20 раз) умножаютна 50.
Пример:в 100 большихквадратахсосчитано 120лейкоцитов.
Следовательно, количестволейкоцитовв 1 ммЗ равно
120*4000*20
-----------=6000
1600
Оценкаполученныхданных:
Нормальноеколичествоэритроцитовв 1 ммЗ от 4500000 до5000000. В норме среднееколичестволейкоцитовв 1 мм3 от 5000 до 9000(крайние границы4000 — 9000).
Вычислениецветовогопоказателя:
Знаячисло эритроцитовв крови и содержаниев ней гемоглобина, можно высчитатьв какой меренасыщен каждыйэритроцит.Цветовой показательсоответствуетмаксимальномусодержаниюгемоглобинав одном нормальномэритроците, величина егоусловно принимаетсяза единицу.
Длявычисленияцветовогопоказателяпользуютсяследующейформулой:
найденноеколичествоНв найденноечисло эритроцит.
—: —
нормальноеколичествоНв нормальноечисло эритроцит.
Практическиопределениецветовогопоказателяпроизводятпутем деленияпроцента (единиц)гемоглобинана удвоенныедве первыецифры числаэритроцитов.Если же числоэритроцитовменьше 1000000, топроцент Нвделится наудвоеннуюпервую цифручисла эритроцитов.
Приготовлениемазков:
Мазоккрови делаютобычно вследза наполнениемобоих смесителей.Вытирают палеци пользуютсясвежевыступившейкаплей крови.Кровь берутна предметноестекло, котороедолжно бытьтщательнообезжирено.Затем шлифованнымпредметнымстеклом,
илитолстым покровнымстеклом, котороеставят на первоепредметноестекло подуглом 45' в непосредственнойблизости откапли крови, чтобы она растекаласьтонким слоемпо ширинешлифованногостекла, делаютна нем мазок.Хорошо сделанныймазок желтоватогоцвета, просвечивает.Вслед за этиммазок фиксируют.
Фиксациямазка делаетсядля того, чтобыуплотнитьпротоплазмуформенныхэлементов кровии сделать мазокболее устойчивым.Высохший навоздухе мазокпогружаетсядля фиксациив банку с метиловымспиртом на 1 — 3 мин., либо в смесьНикифорова, состоящую изравных частейэтиловогоспирта и эфира, на 10-20 минут. Поокончаниификсации мазкивынимают пинцетоми ставят ввертикальномположении нафильтровальнуюбумагу длявысушивания.
0крашиваниемазка производится, как правило, при помощисмеси несколькихкрасок. Наиболеешироко применяетсяокраска мазкапо Романовскому- Гимзе. Передупотреблениемкраску разводятдистиллированнойводой из расчета1 — 2 капли на 1 млводы. Мазкиукладываютна мостики изстеклянныхпалочек, опирающихсяна края кюветы, и заливаюткрасителемв максимальномколичестве, которое можетудержатьсяна стекле.Продолжительностьокраски 30 минут.После окраскикрасительсмывают струейводы, а мазкиставят вертикальнона фильтровальнуюбумагу дляпросушки.
Окраскаретикулоцитов:
1. Предметныестекла (обезжиренные).
2. 1% растворбриллианткрезилблау(спиртовой).
3. Шлифовальноепредметноестекло.
4. ЧашкаПетри.
5. Фильтровальнаябумага.
6. Стекляннаяпалочка.
7. Иммерсионноемасло.
Методикаокрашивания:
Наобезжиренноеабсолютночистое предметноестекло наносятстекляннойпалочкой каплю1% алкогольногораствора краскибриллианткрезилблау.Шлифовальнымпредметнымстеклом
этукаплю размазываюттак же, как приприготовленииобычного
мазкакрови. Послеподсыханиякрасителя нанего наносяткаплю
кровии делают тонкиймазок, которыйсразу помещаютво влажнуюкамеру (чашкаПетри с вложеннымв нее кусочкоммокрой фильтровальнойбумаги). Через3-5 минут мазоквынимают, высушиваютна воздухе иисследуют подмикроскопомс иммерсией.
Подмикроскопомэритроцитыпри этой окраскежелтовато-зеленоватогоцвета; в отдельныхже эритроцитахзамечаетсясиняя
сеточка, иногда скуднаяи нежная, иногдаобильная, зернистая-
этои есть ретикулоциты.
Подсчетретикулоцитовпроизводитсятак:
Подсчитываютв поле зрения1000 эритроцитови отмечаютсколько срединих ретикулоцитов.Найденноеколичестводелят на 10. Нормальноесодержаниеретикулоцитовв крови 0,2 — 1,0%.
Подсчетлейкоцитарнойформулы:
Лейкоцитарнойформулой называютпроцентноесоотношение
отдельныхформ лейкоцитовкрови. Для болееточного еевычислениянеобходимопросмотретьне менее 200 лейкоцитов.Так как различныевиды лейкоцитовраспределяютсяпо мазку неравномерно,
необходимособлюдатьследующиеправила: проводитьподсчет по
верхнемуи нижнему краюмазка, передвигаямазок по зигзагообразнойлинии. Считаюттри поля посамому краюв горизонтальномнаправлении, затем — три поля, направляяськ серединемазка, и т. и.Следовательно, в каждом изчетырех участковнасчитывают50 клеток, а всего- 200. Для подсчеталейкоцитарнойформулы используютспециальныйклавишныйсчетчик, накаждом клавишекоторого отмечаетсяначальная 6yкваназвания лейкоцитов.Результатыподсчеталейкоцитарнойформулы записываютсяв виде лейкограммы, имеющей в нормепримерно следующийвид:
--PAGE_BREAK--
нейтрофилы
Колич. Лейкоцитов
базо-филы
эозино-филы
юные
палочко-ядерные
сегменто-ядерные
лимфо-циты
моно-циты
8000
1%
4%
4%
60%
25%
6%
Микроскопическаякартина крови:
Эритроцит — безъядернаяклетка, окрашивающаясякислыми краскамив розовый цвети имеющая формунесколькоуплощенногокруга с вдавлениемв центре. Диаметрв среднем около8 микрон.
Лейкоцитыразличаютсясреди эритроцитовпо их большейвеличине, поналичию ядраи по характеруокраски. Различаютлейкоциты: базофильные, эозинофильные, нейтрофильные, лимфоциты имоноциты.
Первыетри вида объединяютсяв группу гранулоцитов, т.е. клеток впротоплазмекоторых имеетсязернистость.
Базофилы — клетки размером12 — l4 микрон, с ядромнеопределеннойформы. Протоплазмасодержитмногочисленныекрупные зерна, окрашивающиесяв фиолетовыйцвет. Количествоклеток не превышает0,5-1%.
Эозинофилы- клетки размером12 — 15", имеют сегментированноеядро в видедвух грушевидныхсегментов, соединенныхмежду собойтонким мостиком.Наиболее характернымпризнакомэозинофилаявляется зернистостьпротоплазмыярко-красногоцвета. Количествоэозинофиловв норме от 1 до4%.
Нейтрофилы — круглые клетки, средняя величина9 — 12 микрон.
Протоплазмаслегка розоватаяс мелкой зернистостьюкрасновато-
фиолетовогоцвета. Ядросостоит из 2-х,4-х и более сегментов, соединенныхмежду собойтоненькимимостиками, окрашиваетсяосновнымикрасками всине-фиолетовыйцвет. Сегментоядерныенейтрофилысоставляютот 50 до 68%. В менеезрелых клеткахядро
вытянутов виде палочки, так называемыепалочко-ядерныенейтрофилы1-4%. Еще реже, около1%, встречаютсянейтрофилыс
круглымядром — юныеформы. Увеличениечисла палочко-ядерных, появление юных, вплоть до миелоцитов, носит названиесдвига влево, или регенеративногосдвига. Сдвигомв право называетсяизменениеформулы лейкоцитовв сторону увеличенияболее зрелыхклеток.
Лимфоциты — клетки размером7 — 9 микрон. Лимфоцитыбывают малые, средние иширокопротоплазменные.Ядро круглоеили овальное, сине-фиолетовогоцвета; иногдаоно имеет содной стороныострое углубление.Протоплазмаголубая, нередкоразличаютсяярко-красныезерна. Вокругядра остаетсябесцветныйили более бледныйободок. В нормелимфоцитысоставляют25 — 38%.
Моноциты — самая большаяклетка нормальнойпериферическойкрови. Диаметр12-20 микрон с крупнымовальным ядром, почковиднойили подковообразнойформы. Окраскаядра светлее, чем у нейтрофилови лимфоцитов, протоплазмасеро-голубогоцвета с мелкойазурофильнойзернистостью.Моноциты составляют6-8% всех лейкоцитовкрови.
Определениедлительностикровотеченияпо Дуке
0борудованиеи реактивы:
1.Игла Франкаили скарификатор.
2.Фильтровальнаябумага.
3.Секундомер.
Ходисследования:
ИглойФранка делаютукол глубиной3 мм в мякотьпальца илимочку уха.Самопроизвольновыступающаякровь снимаетсякаждые 15-30 секундфильтровальнойбумагой. Через1-3 минуты снятаяфильтровальнойбумагой каплястановитсямаленькой, затем бумагасовсем неокрашивается.Промежутоквремени отмомента появленияпервой капликрови до прекращенияокрашиванияфильтровальнойбумаги обозначаетсякак продолжительностькровотечения.
Оценкаполученныхданных:
Нормальнаяпродолжительностькровотечения2 — 4 минуты.
Определениевремени свертываемостикрови по способуБюркера
Оборудованиеи реактивы:
1. Часовоестекло.
2. ЧашкаПетри с влажнойфильтровальнойбумагой на дне.
3. Тонкаястекляннаяпалочка илиигла.
4. ИглаФранка илискарификатор.
5. Дистиллированнаявода.
6. Секундомер
Ходисследования:
Начасовое стеклонаносят однукаплю прокипяченнойдистиллированнойводы. ИглойФранка делаютукол в мякотьпальца, первуюкаплю снимают, а вторую наносятна часовоестекло, помешиваюттонкой стекляннойпалочкой. Времявзятия кровиотмечают посекундомеру.Часовое стеклопомещают вчашку Петри.Лучше всегопроизводитьисследованиепри температуре25'C. Каждые полминутытонкой стекляннойпалочкой илииглой прикасаютсяк капле кровиот центра кпериферии дотех пор, показа палочкойне потянутсяпервые ниточкифибрина, послечего отмечаютвремя появленияих.
Оценкаполученныхданных:
Уздоровых людейвремя свертываемостипо методу Бюркераравно 5-6 минутам.
ЯрославскаяГосударственнаяМедицинскаяАкадемия
Кафедрапропедевтикивнутреннихболезнейпедиатрическогофакультета
Учебно-методическоепособие длястудентов IIIкурсапедиатрическогофакультета
Лабораторныеметоды диагностики
( часть вторая)
ИССЛЕДОВАНИЕМОЧИ
Ярославль,1997
Цель: овладениестудентамиметодикойлабораторногоисследованиямочи и клиническойоценкой полученныхданных.
Порядокисследования
1. Забор материала.
2. Исследованиефизическихсвойств.
3. Исследованиехимическихсвойств.
4. Микроскопическоеисследованиеосадка.
5. Бактериологическоеисследование.
Заборматериала
Лабораторноеисследованиемочи должнопроизводитьсяу всех больныхнезависимоот характераих заболевания.Для клиническогоанализа необходимо100 — 200 мл первойутренней мочи, которую собираютв чистую сухуюстекляннуюпосуду. Передзабором мочинеобходимтуалет наружныхполовых органовили взятие мочикатетером. Напосуду с мочойнаклеиваютэтикетку суказаниемфамилии и инициаловбольного, номерапалаты и отделения, диагноза ихарактераисследования(общий анализ, исследованиена сахар
и ацетон ит. д.). Количественноеопределениесоставныхчастей мочи(например, сахарапри сахарномдиабете) производятиз суточногоколичествамочи. Мочу собираютза сутки в одинсосуд, измеривобщее количество, направляютна исследование100 — 150 мл мочи.
Для бактериологическогоисследованиядостаточно10 мл мочи, собраннойв стерильнуюпробирку, стерильнымкатетером.
Для выявлениилейкоцитурии(метод Каковского- Аддиса) мочусобирают за10 — 12 часов, т. е. с21 часа до 9 часов.Собранную мочутщательноразмешиваюти измеряют ееколичество.На исследованиенаправляютколичество, выделенноеза 12 минут, котороеопределяютпо формуле:
Y
X=-----------------,
t*5
где:
Х- количествомочи за 12 минут,
Y- объем мочи, измереннойв мл,
t- время, за котороесобрана моча, 1/5 часа — 12 минут.
Проба по3имницкому. Приобычном питьевомрежимемочу собираютв течение сутокза каждые 3 часа, первая порциямочи в 6часов утравыливается.На каждую бутылочкунаклеиваетсяэтикетка суказаниемфамилии, палаты, номера порциии
промежуткавремени, закоторый собранапорция (6 ч.- 9 ч., 9 ч.- 12 ч., и т. д.). Все 8порций направляютна исследование.
Исследованиефизическихсвойств
Исследованиефизическихсвойств мочивключает в себяопределениеколичества, цвета, прозрачности, запаха и удельноговесамочи. Количествовыделяемойза сутки мочи(диурез) в норме составляетв среднем 50 — 80%выпитой жидкостии колеблетсяот
1000 до 2000 мл. Измерениепроизводятс помощью мернойпосуды по нижнемумениску (уровнюжидкости). Цветмочи в нормеколеблетсяот светло-желтогодо насыщенногожелтого и обусловленсодержащимисяв ней пигментами: урохромом А, урохромом Б, уроэтрином, урорезиноми др. Определяютцвет простымосмотром, послепредварительногоотстаиванияв проходящемсвете на беломфоне.3апахсвежевыпущенноймочи здоровогочеловека своеобразный, слабый ароматический, который, каксчитают,
зависит отсодержанияв ней минимальныхколичествлетучих эфирныхкислот. Придлительномстоянии, в результатещелочногоброжения, мочаприобретаетрезкий неприятныйаммиачныйзапах. Запахгниющих яблокпри наличиив моче ацетоновыхтел. Прием некоторыхпищевых продуктови лекарствпридают мочесвой запах.
Прозрачность(мутность). Нормальнаясвежевыпущеннаямоча прозрачна.Мутность можетбыть вызвана: солями, клеточнымиэлементами, бактериями.
Посуда, оборудованиеи реактивы:
— цилиндр на 10 — 15 мл.
— химическиепробирки.
— горелка.
— 10% растворуксусной кислоты, раствор щелочи ( NaОН ).
Ходисследования:
В цилиндремкостью 10 — 15 млналивают мочу, отстаиваюти через слоймочи читаютпечатный текст.Степень мутностиобозначаютследующимобразом: прозрачная
моча — печатныйтекст читаетсялегко; слабаястепень мутности- легко читаетсясредний и крупныйпечатный текст; умеренная — буквы различаютсянечетко; большая- буквы неразличимы. Причину помутненияопределяютследующимобразом. В пробиркуналивают 2-3 млмочи, нагревают.Исчезновениепомутненияуказывает наналичие уратов; усиление — наналичие фосфатов.Последниерастворяютсяпосле добавления2-3 капель 10% уксуснойкислоты, Исчезновениепомутненияот добавлениянесколькихкапель щелочиговорит о присутствиикристалловмочевой кислоты. Удельный весзависит отколичестварастворенныхв моче плотныхвеществ. В нормеудельный весмочи 1012 — 1025.
Посудаи оборудование:
— цилиндремкостью в 50 — 100 мл,
— урометр сделениями от1000 до 1050…
Ходисследования:
Мочу наливаютв цилиндр, избегаяобразованиепены. Если пенаобразуется, то ее следуетудалить фильтровальнойбумагой. Осторожнопогружаютурометр в жидкость; верхняя частьурометра должнабыть сухой иурометр недолжен касатьсястенок цилиндра.Когда урометрперестал погружаться, его слегкатолкают сверху, иначе он опускаетсяменьше, чемследует. Послепрекращенияколебаний понижнему менискужидкости пошкале урометраотмечают удельныйвес. При маломколичествемочи, ее следуетразвестидистиллированнойводой (1 мл мочи+1 мл воды — разведениев 2 раза, 1 мл мочи+2 мл воды — в 3 разаи т.д.). Определивудельный вес, две последниецифры удельноговеса умножаютна степеньразведения.Необходимопри определенииудельного весаучитыватьтемпературуокружающейсреды, так какурометры вывереныпри температуре15'С. Измеряяудельный вес, следует вноситьпоправку: накаждые 3' выше15' необходимоприбавить0,001, и на каждые3' ниже 15' вычитать 0,001.
Реакциямочи в нормепри смешаннойпище кислаяили слабокислая.Ориентировочныйспособ определенияреакции мочи при помощисиней и краснойлакмусовойбумажек. В кислоймоче синяялакмусоваябумага краснеет, в щелочной — красная синеет; в нейтральнойобе бумажкине меняют своегоцвета.
Исследованиехимическихсвойств:
Прежде чемприступитьк химическомуисследованию, необходимопрофильтроватьмочу.
Химическоеисследованиевключает в себяопределениев моче белка, сахара, ацетонаи ацетоуксуснойкислоты, желчныхпигментов иуробилина.
Определениебелка:
Качественныереакции набелок основанына его осажденииреактивамиили нагреванием.При наличиибелка в мочеобразуетсябольшая илименьшая степеньпомутнения. Условия определениябелка: 1) — мочадолжна иметькислую реакцию.Щелочную мочуподкисляют, добавляя 2 — 3 каплиуксусной кислоты.2) — моча должнабыть прозрачной.Помутнение
устраняетсяфильтрованиемчерез бумажныйфильтр. Качественнуюпробу следуетпроводить вдвух пробирках, од на — контроль.
0ценка: В норме белкав моче не содержится.
Качественныепробы
Проба ссульфосалициловойкислотой
Реактивы:
— 20% растворсульфосалициловойкислоты.
Ходисследования:
В пробиркуналивают 4 — 5 млмочи и добавляют8 — 10 капель реактива.При наличиибелка в моче, в зависимостиот количестваего, может бытьпомутнениеили выпадаетхлопьевидныйосадок. Пробасчитается однойиз самых чувствительных, положительнапри наличиибелка в мочев количестве- 0,015%.
Проба суксусной кислотой
Реактивы:
— 10% раствор уксуснойкислоты.
Ходисследования:
Впробирку наливают8 — 10 мл мочи, нагреваютверхний слоймочи до кипенияи прибавляют8 — 10 капель уксуснойкислоты. Приналичии белкав нагретойчасти мочиобразуетсяпомутнениеили хлопьясвернувшегосябелка.
Количественноеопределениебелка. (способРобертса — Стольникова):
Принципметода: Если при наслаиваниимочи на азотнуюкислоту награнице двухжидкостейобразуетсятонкое белоекольцо между2-й и 3-й минутами, то в исследуемоймоче содержится 0,033%o белка.
Реактивы:
— концентрированнаяазотная кислота,
Ходисследования:
В пробиркуналивают 1 — 3 млазотной кислотыи осторожнопо стенке наслаиваюттакое же количествомочи. Замечаютвремя посленаслаивания.Если кольцона границежидкостей(рассматриватьего следуетна черном фоне)образуетсясразу или раньше2-х минут посленаслаивания, мочу необходиморазвести водой.После чегопроизводятповторноеопределениебелка в разведенноймоче. Разведениепроизводятдо тех пор,
пока белоекольцо принаслаиваниина азотнуюкислоту разведенноймочи не появитсямежду 2-й и 3-йминутами. Количествобелка вычисляютпутем умножения0,033%o на степеньразведения.
Определениесахара (глюкозы)
Качественнаяпроба (пробаГайнеса)
Пробаоснована насвойстве глюкозывосстанавливатьгидрат окисимеди в гидратзакиси меди(желтый цвет)или закись меди (красный цвет).
Реактивы:
реактивГайнеса (смесьрастворовсернокислоймеди, едкогонатра и глицерина).
Ходисследования:
Впробирку наливают3 — 4 мл раствораГайнеса, прибавляют8 — 10 капель мочии нагреваютдо кипения. Приналичии сахарацвет мочи изменяетсяот коричневато-зеленогодо красного, в зависимостиот количествасахара.
0ценка:В норме сахарав моче нет.
Количественноеопределениесахара мочи
Поляриметрическийметод:
Принципметода заключаетсяв использованиисвойства глюкозывращать плоскостьполяризациивправо. По углувращенияполяризованноголуча можноопределитьколичествоглюкозы.
Ходопределения:
Моча должнабыть прозрачной, не содержатьбелка, кислойреакции. Дляэтого мочуподкисляютслабой уксуснойкислотой, кипятят, охлаждают ифильтруют.Трубку
поляриметразаполняютпрофильтрованноймочой без пузырьков воздуха, накрываютшлифованнымстеклом, завинчиваютплотно, насуховытирают ипомещают ваппарат.
Определениепроизводятспустя 2 — 3 минутыпосле заполнениятрубки, так какколебаниечастиц жидкостимешает исследованию.Оптическиактивный растворглюкозы, отклоняялуч, меняет интенсивностьсвета в окуляре; восстановитьосвещенностьможно, повернуванализаторна определенныйугол. Угол отклонениявыражаетсяв градусахшкалы прибора.Угол отклоненияв 1 градус соответствует1 % глюкозы придлине трубки18,94; если длина 9,47 — полученныйрезультатумножить на2.
Определениеацетоновыхтел (проба Ланге)
К ацетоновымтелам относятсяацетон, ацетоноуксуснаякислота иоксимаслянаякислота. В мочевстречаютсясовместно, поэтому раздельноеих определениеклиническогозначения неимеет. В нормев моче не содержатся.
Реактивы:
— смесь нитропрусидногонатрия с сернокислым аммонием;
— раствор аммиака.
Ходопределения:
В пробиркунасыпают немного, так чтобы былопокрыто днонитропрусиднойсмеси, и приливают5 мл мочи, взбалтываюти осторожнонаслаивают2 мл аммиака.Фиолетово-красноекольцо, появившеесяна границе двухжидкостей, свидетельствуето наличии вмоче ацетона.
Определениебилирубина (проба Розина)
Качественнаяреакция основанана превращениибилирубина под воздействиемокислителей(йода) в биливердинзеленого цвета.
Реактивы:
— раствор Люголяили 1% спиртовойраствор йода.
Ходопределения:
На 3 — 4 мл мочиосторожнонаслаивают1 — 2 мл 1% спиртовогораствора йодаили раствораЛюголя. Приналичии желчныхпигментов(билирубина)на границе жидкостейпоявляетсязеленое кольцо.
0ценка:В норме билирубинв моче не содержится.
Определениеуробилина(проба Флоренса)
Реактивы:
— концентрированнаясерная кислота;
— эфир;
— концентрированнаясоляная кислота.
Ходопределения:
К 10 мл мочидобавляют 3 — 4капли концентрированнойсерной кислоты, смешивают, приливают 2 — 3 мл эфира, пробиркузакрываютрезиновойпробкой и осторожно
смешивают, не взбалтывая.В другую пробиркуналивают 2 мл концентрированнойсоляной кислоты.Пипеткой отсасываютиз первой пробиркиэфирный слойи наслаиваютего на солянуюкислоту. Награнице жидкостейпри наличииуробилинаобразуется красно-фиолетовоекольцо различнойинтенсивности.
Микроскопическоеисследование
Приготовлениепрепарата:
Вцентрифужнуюпробирку наливают10 — 15 мл мочи ицентрифугируютпри 1000 — 1500 об/мин.10 минут. Послецентрифугированияпробирку быстроопрокидываютдля удалениянадосадочнойжидкости, затемпереводят висходное положение, чтобы осадокостался на дне. Пастеровскойпипеткой осадокразмешивают, небольшую каплюосадка помещаютна предметноестекло и накрываютпокровным.Микроскопияпроизводитсясначала подмалым, а затемпод большимувеличением.
Элементымочевого осадка
Различаюторганизованный(эритроциты, лейкоциты, эпителиальныеклетки, цилиндры)и неорганизованныйосадок (соли).
Организованныйосадок:
Эритроцитымогут бытьнеизмененныев виде дисковжелтовато-зеленоватогоцвета, содержащихгемоглобин, и измененные(выщелоченные), свободные отгемоглобина, бесцветные, имеющие видодноконтурныхили двухконтурныхколец. В нормесодержатся
единичныеэритроцитыв препарате. Лейкоцитыобнаруживаютсяв моче в виденебольшихзернистыхклеток правильнойокруглой формысерого цвета.Лейкоциты вмоче представленынейтрофиламии содержатсяв небольшомколичествев нормальноймоче до 2000000 в сутки). Видоизмененныелейкоциты, такназываемыеклетки Штернгеймера-Мальбина. Длявыявления ихпосле центрифугированияк осадку прибавляют1 — 2 капли краски, предложеннойШтернгеймероми Мальбиным, размешивают, каплю берутна предметноестекло, покрываютпокровным имикроскопируют.Клетки Штернгеймера-Мальбинав 2-3 раза большеобычных лейкоцитов, бледно-синиес бледно-синимили бледно-фиолетовымядром, в цитоплазмезаметно движениегранул.
Клеткиэпителия:
Плоскийэпителий — большие(в 3 — 4 раза большелейкоцитов), широкие полигональныеклетки с однимядром и мелкозернистойцитоплазмой.Встречаютсягруппами ипластами. Наличиеэтих клетокв моче не имеетособого диагностическогозначения.
Клетки круглогоэпителия — довольно крупные, правильнойокруглой илиовальной формыс гомогеннойили мелкозернистойпротоплазмойи небольшимядром. В нормальноймоче — единичные.
Почечныйэпителий — небольшиекруглые иликубическиеклетки с большимпузыриковиднымядром и слегказернистойпротоплазмой.В нормальноймоче не обнаруживаются.
Цилиндры — белковые иликлеточныеобразованияканальцевогопроисхождения, имеют цилиндрическуюформу. В нормальноймоче может бытьнебольшоеколичествотолько гиалиновыхцилиндров (2000за сутки).
Гиалиновыецилиндры — слепки белка, нежные, бледные, почти прозрачныеобразования, прямые и извитые, концы их закругленыили неправильнообломаны.
Зернистыецилиндры — короткие широкие- состоят иззерен различнойвеличины, имеюттемный, частожелто-коричневыйцвет.
Восковидныецилиндры — очень толстые, короткие сжелтоватымцветом воска, хорошо контурированы.
Эпителиальныецилиндрыимеют четкиеконтуры, состоятиз клеток почечногоэпителия.
Эритроцитарныецилиндры — желтого цвета, состоят измассы эритроцитов. Цилиндроидыпохожи на гиалиновыецилиндры, ноне имеют продольнойисчерченности, контуры ихнеправильные, концы раздваиваются.
Кроме того, в осадке могутбыть: сперматозоиды, бактерии, дрожжевыеи другие грибки.
Неорганизованныйосадок:
Вкислоймоче встречаются:
Мочеваякислота — кристаллыразнообразнойформы (ромбической, шестигранной, в виде бочонков, брусков и др.), окрашенныев красно-бурыйили желтовато-бурыйцвет. Микроскопическиекристаллы восадке мочиимеют вид золотистогопеска.
Ураты- аморфные мочекислыесоли — мелкиежелтоватые, часто склеенныегруппами зернышки.Микроскопическиураты имеютвид плотногокирпично-розовогоосадка.
Оксалаты- бесцветныекристаллы вформе почтовыхконвертов — октаэдров.
Сернокислаяизвесть — тонкие, бесцветныеиглы или розетки.В щелочной инейтрального моче встречаются:
Фосфаты — аморфные массысолей сероватогоцвета (мелкозернистые).Микроскопически- осадок белогоцвета.
Трипельфосфаты- бесцветныеяркие кристаллыв виде гробовыхкрышек илидлинных призм.
Мочекислыйаммоний — желтыенепрозрачныешары с шипамина поверхности.
Функциональныепробы почеки количественныйметод определенияформенныхэлементов
Проба поЗимницкому
Вкаждой из 8-миполученныхпорций замеряютколичествомочи с помощьюмерного цилиндрав определяютудельный веспо ранее разобраннойметодике. Внорме количествомочи за сути- 1000 — 1500 мл, количествомочи в каждойпорции 70 — 250 мл; дневной диурез- 2 части, ночной- 1 часть; колебанияудельного веса- 1012 — 1025.
Проба поКаковскому- Аддису
Принциписследованиязаключаетсяв определениичисла форменныхэлементов(эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров) всуточном количествемочи с помощью
счетнойкамеры.
Посудаи оборудование:
Счетнаякамера.
Градуированнаяцентрифужнаяпробирка.
Мернаяпосула.
Микроскоп.
Ходисследовании:
Количествомочи, соответствующееобъему, выделенномуза 1/5 часа (за 12минут), наливаютв центрифужнуюпробирку ицентрифугируютпри 2000 об/мин. втечение 5 минут. Пипеткой отсасываютнадосадочнуюжидкость, оставляя0,5 мл осадка.Осадок смешиваюти пипеткойзаполняютсчетную камеру Горяева. Считаютотдельно лейкоциты, эритроциты, цилиндры. Исследуемыйосадок можносмешать с 1-2 каплямикраски
Штернгеймерав Мальбина длявыявленияналичия в мочеклеток Штернгеймера- Мальбина. Подсчетклеток производитсяпод большимувеличениемв 100 любых большихквадратах.Полученноеколичествоклеток 1 ммЗумножают на60 000, узнают количество
форменныхэлементов, выделенныхс мочой за сутки.Для нормальной мочи количествоэритроцитовдо 1 млн.; лейкоцитовдо 2 млн., цилиндровдо 2000.
Бактериоскопическоеисследование
Бактериоскопическоеисследованиепроизводят, главным о6 разом, с целью обнаружениямикобактерийтуберкулеза.
Ходисследования:
Утреннююпорцию мочи, собранную встерильнуюпосуду, отстаивают.Образовавшийсяосадок собираютпипеткой вцентрифужнуюпробирку ицентрифугируют.Из осадка
приготавливаютмазки, хорошовысушивают, фиксируют надпламенем иокрашиваютпо Цилю Нильсену(см. раздел) и затеммикроскопируют.
Микобактериитуберкулеза, имеющие видпалочек, окрашеныв красный цвети отчетливовыделяютсяна синем фонепрепарата. Исследованиемокроты>