РЕФЕРАТциклу наукових робіт«Дослідження молекулярних основ нейродегенеративних, метаболічних таонкологічних патологій людини»к.б.н. Горбенко Олена Миколаївна, к.б.н. Гришкова Віталіна Сергіївна, к.б.н. Ніколаєнко Олексій ВалентиновичАктуальність теми. Нормальна життєдіяльність клітини є результатом взаємодії тонко регульованих процесів передачі позаклітинних стимулів з поверхні клітини до ядра та злагодженої генерації відповіді на них. Порушення чіткої роботи будь-якої ланки цілісного механізму регуляції та контролю клітинного росту, поділу та диференціації, як на рівні експресії генів, так і на рівні модифікації та регуляції функції їх білкових продуктів, призводить до розвитку тяжких патологій – від метаболічних розладів та розумової відсталості до виникнення онкозахворювань. З’ясування міжмолекулярних взаємодій окремих компонентів клітини, починаючи від експресії генів до активності сигнальних білків, є першим й найголовнішим кроком у напрямку створення профілактичних та терапевтичних заходів боротьби із низкою захворювань, включачи злоякісну трансформації клітини, ожиріння, діабет, нейродегенеративні та серцево-судинні захворювання тощо. Тому дослідження молекулярних основ вищезгаданих патологій, що може не тільки поглибити знання про причини їх виникнення и розвитку, я й мати важливе прикладне значення, стає все більше актуальним на сьогодні. Цикл робіт, що представляється, присвячений дослідженню фосфатази PTEN, фосфатного транспортера NaPi2b та білка інтерсектину 1. Відомий пухлинний супресор фосфатаза PTEN пригнічує активність РІ3-кіназного шляху. Мутації в гені pten, які призводять до втрати активності PTEN і як результат - до неконтрольованої надактивності компонентів РІ3-залежного каскаду, виявлені в багатьох пухлинах, включаючи гліобластому, меланому, пухлини ендометрію, рак простати і молочної залози (Eng, 2003). Численні дані свідчать про негативний вплив PTEN на процеси, опосередковані дією інсуліну, а саме пригнічення фосфатазою всмоктування глюкози та вплив на метаболізм вуглеводів у печінці, що свідчить про залучення PTEN до регуляції метаболізму ліпідів та формування жирової тканини (Gu et al.,1998; Weng et al., 2001; Yart et al., 2001), а отже робить цей пухлинний супресор потенційною мішенню для терапевтичного впливу при порушеннях ліпідного метаболізму та діабеті другого типу. Кількість виявлених специфічних маркерів раку яєчника є дуже обмеженою, що значно ускладнює раннє виявлення та терапію цього захворювання. Отже, ідентифікація та характеристика потенційних маркерів раку яєчника є важливим завданням для молекуляpної біології, імунології та онкогінекології. Нещодавно було показано, що фосфатний транспортер NaPi2b має підвищений рівень експресії у пухлинах яєчника та не детектується у нормальному яєчнику (Yin, 2008). Ця властивість робить транспортер NaPi2b привабливим об’єктом для імунотерапії раку. Багатофакторні порушення у функціонуванні клітин є наслідком не тільки пошкодженої регуляції активності різних сигнальних каскадів, але й часто викликані різноманітними хромосомними абераціями, які призводять до зміни експресії окремих генів. Синдром Дауна — це найчастіша хромосомна причина розумової відсталості, яка є наслідком присутності в клітинах додаткової копії 21-ї хромосоми. Найтяжчим симптомом синдрому Дауна, що стоїть на заваді якісного життя хворих, є розумова відсталість. Тому зусилля вчених спрямовані в першу чергу на пошук фактора, який зумовлює порушення когнітивних функцій центральної нервової системи. Один з генів-кандидатів, ген інтерсектину 1 (ITSN1), кодує білок, що окрім ферментативної ГДФ/ГТФ-обмінної активності виконує функції адаптера та регулює декілька клітинних процесів — передачу сигналу МАРК-шляхом, ендоцитоз та перебудови актинового цитоскелету. Окрім того, численні білкові партнери ITSN1 залучають його до багатьох інших процесів — екзоцитозу, апоптозу та інших. Великий інтерактом ITSN1, тим не менше ,не є повним і потребує розширення з метою встановлення функціональних зв'язків цього білка, що допоможе передбачити наслідки його надекспресії при синдромі Дауна. Таким чином, вивчення молекулярних основ клітинної функції як у нормі, так і при різних патологічних станах, зокрема залучення таких молекул як PTEN, NaPi2b та інтерсектину 1 до формування метаболічних, онкологічних, нейродегенеративних захворювань з використанням сучасних методологічних підходів, є важливою і актуальною задачею науковців, вирішення якої може призвести до розкриття нових функціональних зв’язків, що дало б змогу створити нові засоби для боротьби з цими захворюваннями. ^ Наукова новизна одержаних результатів. Вперше показано, що антиген МХ35, який експресується у більшості випадків раку яєчника, є Na-залежним транспортером неорганічного фосфату NаРi2b. Вперше отримано моноклональні антитіла проти великого позаклітинного домену транспортера NaРi2b людини, що здатні розпізнавати ендогенний NaРi2b у Вестерн-блот та імуногістохімічному аналізах, а також імунопреципітувати його з лізатів клітин ссавців. Вперше визначено ділянку транспортера NaРi2b, де знаходиться епітоп, що розпізнається моноклональними антитілами МХ35. Створено стабільну клітинну лінію HEK293, що надекспресує фосфатний транспортер NaPi2b дикого типу. Вперше проведено аналіз експресії NaРi2b на рівні білка у різних гістологічних варіантах епітеліальних пухлин яєчника і тканинах гінекологічного тракту жінки та виявлено його високий вміст у високодиференційованих папілярних серозних та ендометріоїдних пухлинах яєчника, а також в епітеліальних клітинах фаллопієвих труб і ендометрії порівняно з нормальним яєчником. Висловлено припущення, що різний профіль експресії NaРi2b при різних гістологічних варіантах раку яєчника пов’язаний з напрямком диференціювання поверхневого епітелію яєчника при канцерогенезі. За допомогою двогібридної системи дріжджів проскриновано кДНК-бібліотеки 18-денного ембріона миші, раку кишечнику людини та клітин HeLa, що дозволило ідентифікувати вісім нових білків-партнерів фосфатази PTEN, серед яких основними є АЕВР1 (білок 1, який зв’язується з енхансером адипоцитів), що функціонує як репресор транскрипції гена аР2, який кодує переносник жирних кислот FABP4 та власне білок FABP4. Ідетнифіковані взаємодії свідчать про потенційну роль пухлинного супресора PTEN у метаболізмі ліпідів та регуляції адипогенезу. Вперше показано утворення комплексу PTEN/FABP4 in vitro за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу BIAcore. Встановлено величину рівноважної константи дисоціації KD білково-білкової взаємодії між PTEN і FABP4. За допомогою методів преципітації білкових комплексів із використанням GST-злитих білків та гель-фільтрації вперше показано можливість взаємодії фосфатази PTEN із переносником жирних кислот FABP4 у клітинах диференційованих адипоцитів модельної лінії 3T3L1. Вперше отримано моноклональні антитіла проти білка-переносника жирних кислот FABP4, здатні розпізнавати ендогенний FABP4 та імунопреципітувати його з лізатів адипоцитів. Вперше запропоновано гіпотезу стосовно ролі PTEN у регуляції адипогенезу через утворення комплексу із FABP4. Вперше створено єдиний список генів 21-ї хромосоми людини, що містить інформацію з баз даних NCBI, ERICR та H-Inv; знайдено ортологи цих генів у миші та інших організмів. Визначено екзон-інтронні структури генів та доменні структури відповідних білків; створено малюнки-схеми, що поєднують зазначені структури. Розроблено інтерфейс бази даних, що дозволяє віддалено користуватися нею. Вперше створено інструмент обслуговування бази даних, який призначений для доповнення та корегування інформації, що містить база даних. Отримано рекомбінантні білки, що відповідають окремим ЕН2-, CCR- та SH3A–Е-доменам ITSN1 та вперше отримано поліклональні антитіла до ЕН2-домену ITSN1. Визначено ділянки ITSN1, які взаємодіють з убіквітинлігазою c-Cbl. Вперше встановлено взаємодію між ITSN1 та іншим членом родини Cbl — убіквітинлігазою Cbl-b; визначено ділянки ITSN1, що відповідають за це зв'язування. Вперше передбачено і підтверджено in vitro та in vivo взаємодію ITSN1 з адаптерним білком Ruk/CIN85; визначено послідовності, що зв'язуються. Вперше встановлено субклітинну локалізацію комплексів ITSN1-Ruk/CIN85 по відношенню до клатрину та c-Cbl.^ Практичне значення одержаних результатів. Ідентифікація транспортеру неорганічного фосфату NaРi2b як маркера раку яєчника відкриває перспективи щодо створення нових імунотерапевтичних та діагностичних препаратів для боротьби з цим захворюванням. Нові моноклональні антитіла, отримані проти фосфатного транспортеру NaPi2b, можуть бути використані для вивчення функціонування транспортера в нормі та при патології, а також є перспективними для цілей імунотерапії та діагностики раку яєчника. Створено стабільну клітинну лінію HEK293, що надекспресує фосфатний транспортер NaPi2b, яку можна використовувати для вивчення механізмів регуляції фосфатного транспортера NaPi2b. Виявлена диференційна експресія транспортера в епітеліальних пухлинах яєчника може бути врахована під час застосування антитіл МХ35 у терапії раку яєчника, а також у підтвердженні діагнозів хворих на епітеліальні пухлини яєчника. Рекомбінантний NaPi2b, що містить епітоп антигену МХ35, може бути використаний як складова при розробці протипухлинних вакцин для імунотерапії раку яєчника. Отримані дані вносять вклад у загальну картину PTEN-опосередкованих сигнальних мереж, залучених до контролю фізіологічної активності клітин. Детальне дослідження можливості взаємодії фосфатази PTEN з білком FABP4 дає підстави припустити її участь в процесах адипогенезу, зокрема, в регуляції метаболізму ліпідів і транспорту вільних жирних кислот. Це відкриває нові перспективи як у вивченні механізмів регуляції обміну ліпідів, так і з’ясуванні причин порушення їхнього обміну за умов патологій різного походження, зокрема, при розвитку ожиріння, діабету другого типу та атеросклерозу. Водночас, дослідження у зазначеному напрямку закладають теоретичний фундамент для створення фармакологічних препаратів нового покоління, спрямованих на конкретні сигнальні мішені. Клонування генів фосфатази PTEN та білка-переносника жирних кислот FABP4 з використанням бакуловірусних та бактеріальних векторів дозволяє експресувати і очищати дані білки у кількостях, достатніх для проведення різних досліджень. Отримані моноклональні та поліклональні антитіла проти білка-переносника жирних кислот FABP4 та фосфатази PTEN, відповідно, можуть бути використані при дослідженні процесів диференціації адипоцитів і формування жирової тканини. Створена база даних генів 21-ї хромосоми людини та їхніх ортологів у миші дозволяє поєднати дані, що прямо чи опосередковано стосуються генів 21-ї хромосоми людини, в межах одного ресурсу. Це дає науковцям, які досліджують молекулярні аспекти синдрому Дауна, можливість отримати не тільки базову, але і різноманітну додаткову інформацію, стосовно генів 21-ї хромосоми та їхніх ортологів у інших організмів, що, в свою чергу, полегшить засвоєння цієї інформації, допоможе встановити взаємозв'язки між надекспресією генів та фенотипом, що спостерігається, та буде сприяти висуванню нових гіпотез щодо механізмів розвитку синдрому Дауна та інших патологій, які пов'язані з порушенням функцій генів, що розташовані на 21-й хромосомі людини. Результати проведених досліджень з ідентифікації нових функціональних зв'язків ITSN1 дають можливість охарактеризувати низку закономірностей функціонування та механізмів, які лежать в основі регуляції передачі клітинного сигналу через МАРК-шлях. Ідентифікація нових партнерів ITSN1 — убіквітинлігази Cbl-b та адаптерного білка Ruk/CIN85 — вказує на тісну інтеграцію сигнальних шляхів з процесом ендоцитозу. Це доповнює експериментальні дані, які відкривають перспективи для пошуку і впровадження у практику препаратів для корекції патологічних змін, пов'язаних із порушенням регуляції сигнальних шляхів. Матеріали циклу робіт можуть бути корисними при підготовці спецкурсів з молекулярної біології та біохімії для студентів біологічних факультетів.^ Апробація результатів. Основні положення циклу робіт доповідались на Конференції молодих науковців, аспірантів і студентів з молекулярної біології і генетики, присвяченій золотому ювілею подвійної спіралі та 30-тій річниці ІМБіГ НАН України (Київ, 2003), на конгресі FEBS із сигнальних шляхів (Брюсель, Бельгія, 2003), Міжнародній зимовій школі з питань розуміння здоров’я та хвороб (Тампере, Фінляндія, 2004), Експертному засіданні з питань біології генів 21-ї хромосоми (Вашингтон, США, 2004), 14му міжнародному зібранні “Beyond the Identification of Transcribed Sequences: Functional, Expression and Evolutionary Analysis” (Чiба, Японiя, 2004), Мiжнародній школі-конференцiї молодих вчених “Системна бiологiя i бiоiнженерiя” (Москва, Росiя, 2005), VII Міжнародній конференції молодих онкологів «Сучасні проблеми експериментальної і клінічної онкології» (м. Київ, 2006), Х Пущинській конференцiї молодих вчених (Пущино, Росiя, 2006), IІ та ІІІ Міжнародних наукових конференціях студентів і аспірантів «Молодь та поступ біології» (Львів, 2006 та 2007), Конференції, присвяченій молекулярним основам і клінічним проблемам резистентності до лікарських засобів (Київ, 2006), Конференції молодих науковців, аспірантів і студентів з молекулярної біології, присвяченій 185 річниці з дня народження Г. Менделя (Київ, 2007), 2-му з’їзді Українського товариства клітинної біології (Київ, 2007), 6-ій Конференції Парнас з питань молекулярних механізмів клітинного сигналінгу (Кракiв, Польща, 2007), Консорціумі RECOOP HST (Печ, Угорщина, 2007), 20-му Конгресі Європейської Асоціації Досліджень Раку (Ліон, Франція, 2008), Конференції молодих вчених, присвяченій 35-річчю ІМБіГ НАНУ (Київ, 2008), а також на засіданнях відділу сигнальних систем клітини ІМБіГ НАНУ, загальних зборах Інституту ракових досліджень Людвіга (Лондонське відділення, Велика Британія), Седар-Синай медичного центру (Лос-Анжелес, США, 2009), Інституту ракових досліджень Людвіга (Нью-Йоркське відділення, США, 2009), відділу біохімії та молекулярної біології Університетського коледжа Лондона (Лондон, Велика Британія) та семінарах імунологічної лабораторії Утрехтського медичного центру (Утрехт, Голандія). Публікації До циклу публікацій oб’єднано 51 працю, з них 12 статей у вітчизняних та 10 у закордонних наукових журналах, та тези 29 доповідей у збірках матеріалів міжнародних з’їздів і конференцій, що вийшли з 2003 по 2009 рік. Загальний імпакт фактор публікацій – 33.66, загальний коефіцієнт цитування SJR – 8.758, кількість цитувань за базою даних Scopus – 95.ПЕРЕЛІК НАУКОВИХ ПРАЦЬ,ВКЛЮЧЕНИХ ДО ЦИКЛУZhyvoloup A, Nemazanyy I, Panasyuk G, Valovka T, Fenton T, Rebholz H, Wang ML, Foxon R, Lyzogubov V, Usenko V, Kyyamova R, Gorbenko O, Matsuka G, Filonenko V, Gout IT. Subcellular localization and regulation of coenzyme A synthase // J Biol Chem. - 2003. – V. 278, №50. – P. 50316-50321.Томачинская Л.А., Черний В.Я., Горбенко О.М., Филоненко В.В., Волков С.В. Цитотоксическая противоопухолевая активность нового смешанного лигандного фталоцианинового комплекса циркония с лизином // Укр. хим. журн. – 2003. – Т. 69, № 3. – С. 129-133.O. Savinska, V.V. Lyzogubov, V.S. Usenko, G.V. Ovcharenko, O.M. Gorbenko, M.V.Rodnin, M.I. Vudmaska, P.V. Pogribniy, R.G. Kyyamova, G.G. Panasyuk, I.O, Nemazanyy, M.S. Malets, S.S. Palchevskyy, I.T. Gout, V.V. Filonenko. Immunohistochemical analysis of S6K1 and S6K2 expression in human breast tumors // Experimental Oncology. – 2004. V. 26, №1. – P. 24-30.O. Gorbenko, V. Kuznetsov, O. Kukharenko, O. Zhyvoloup, G. Panasyuk, I. Nemazanyy, V. Filonenko, I. Gout. Identification of novel binding partners for tumor suppressor PTEN by a yeast two-hybrid approach // Experimental Oncology. – 2004. V. 26, №1. – P. 15-19.Lyudmyla Tsyba, Inessa Skrypkina, Alla Rynditch, Oleksii Nikolaienko, Ganna Ferenets, Andrew Fortna and Katheleen Gardiner Alternative splicing of mammalian Intersectin 1: domain associations and tissue specificities // Genomics — 2004 — Vol. 84, № 1 — P. 106–113.Larisa A. Tomachynski, Victor Ya. Chernii, Olena M. Gorbenko, Valeriy V. Filonenko, Sergey V. Volkov. Synthesis, spectral properties and antitumour activity of new axial substituted zirconium (IV) phthalocyanine complex with citric acid // Chemistry and Biodiversity. – 2004. – V. 1, №6. – P. 682-687.Циба Л.О., Скрипкіна І.Я., Ніколаєнко О.В., Ференець Г.О., Гордиюк В.В., Гардинер К., Риндич А.В .Альтернативний сплайсинг пре-мРНК гена інтерсектину 1: експресія транскрипційних ізоформ // Біополімери і клітина, 2004 — T. 20, № 6 — C.515-523.O. Nikolaienko, C. Nguyen, L. Crinc, K. Cios, K. Gardiner Human chromosome 21/Down syndrome gene function and pathway database // Gene. — 2005. — Vol. 364. — P. 90–98.Капустян Л. Н., Киямова Р. Г., Гришкова В.С., Терентьев А. Г., Филоненко В. В., Сидорик Л. Получение рекомбинантного шаперона GroES и его иммунологическая кросс-реактивность с Hsp60 // Біополімери та клітина. – 2006. – T.22, № 2. – С. 117-120. Kyyamova R.G., Gryshkova V.S. A. М. Zhyvoloup, S.I. Korovin, Gout I.T., Filonenko V.V. Expression of SSX2 tumor antigen in baculovirus expression system and its application for screening of blood serum of melanoma patients // Experimental Oncology. - 2006. - V. 28, №2. – Р. 110-113. Gorbenko O, Filonenko V, Gout I. Generation and characterization of monoclonal antibodies against FABP4 // Hybridoma (Larchmt). – 2006. – V.25, №2, - P. 86-90.Gorbenko O, Panayotou G, Volkova D, Zhyvoloup O, Kukharenko O, Gout I, Filonenko V. Identification of fatty acid binding protein FABP4 interaction with PTEN phosphatase // Біополімери та клітина. - 2006. – V. 22, №3. – C. 217-224.В. С. Гришкова, Г. В. Овчаренко, Л.А. Савинская, С. С Малючик, Н. В. Химич, В. В. Филоненко, И. Т. Гут, Р. Г. Киямова. Получение моноклональных антител против котранспортера фосфатов Napillb // Факторы экспериментальной эволюции организмов. - 2006. - Т. 3. – C. 550-556.О.В. Ніколаєнко, І.Я. Скрипкіна, О.В. Дергай, Л. Мацкова, Л.О. Циба, М.В. Дергай, С.В. Кропивко, Г. Винберг і А.В. Риндич Білки родини cbl — нові партнери інтерсектину 1 // Фактори експериментальної еволюції організмів. — 2006. — Т. 3. — С. 122–127.R.G. Kiyamova, V. S. Gryshkova, V. V. Usenko, V. A. Gurtovyy, B.W.T. Yin,G. Ritter, V. V. Filonenko, I. T. Gout // The sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b (SLC34A2) is a new target antigen in ovarian carcinoma and is recognized by the anti-cancer antibody MX35 / 20th Meeting of the European Assotiation for Cancer Research: European Journal of Cancer. – Lyon (France), 2008. – Vol. 6, № 9. - P. 153-154.R. G Kiyamova, V. S.Gryshkova, V. S.Usenko, Y. S. Khozaenko, V. A. Gurtovyy, G.Ritter, L.Old, I. T. Gout, V. V. Filonenko. Identification of phosphate transporter Napi2b as MX35 cancer antigen by modified SEREX approach // Біополімери та клітина. – 2008. - Т. 24, № 3. – С. 218 - 224. R. G. Kiyamova, V. S. Gryshkova,G. V. Ovcharenko, D. S. Lituyev, S. S. Malyuchik, V. S. Usenko, Y. S. Khozhayenko, V. A. Gurtovyy, B.W.T. Yin, G. Ritter, L. Old, V. V. Filonenko, I. T. Gout. Development of monoclonal antibodies specific for the human sodium-dependent phosphate cotransporter NaPi2b // Hybridoma. – 2008. – Vol. 27, № 4.- P. 277-284. B. Yin, R.Kiyamova, R. Chua, O. Caballero, I. Gout, V. Gryshkova, N. Bhaskaran, S. Souchelnytskyi, U. Hellman, V. Filonenko, A. Jungbluth, K. Odunsi, K. Lloyd, L. Old, G. Ritter. Monoclonal antibody MX35 detects the membrane transporter NaPi2b (SLC34A2) in human carcinomas; a new target for cancer immunotherapy // Cancer Immunity.-2008.- [serial online];8:3. URL:http://www.cancerimmunity.org/v8p3/080103.htm. Tsyba L, Gryaznova T, Dergai O, Dergai M, Skrypkina I, Kropyvko S, Boldyryev O, Nikolaienko O, Novokhatska O, Rynditch A. Alternative splicing affecting the SH3A domain controls the binding properties of intersectin 1 in neurons // Biochem Biophys Res Commun. — 2008 — Vol. 372, № 4 — P. 929–934.O. Nikolaienko, I. Skrypkina, L. Tsyba, Y. Fedyshyn, D. Morderer, V. Buchman, S. de la Luna, L. Drobot, A. Rynditch Intersectin 1 forms a complex with adaptor protein Ruk/CIN85 in vivo independently of epidermal growth factor stimulation // Cellular Signalling.—2009.— Vol. 21, №5.— P. 753–759.V. Gryshkova, I. Goncharuk, V. Gurtovyy, Yu. Khozhayenko, S. Nespryadko, L. Vorobjova, V. Usenko, I. Gout, V. Filonenko, R. G. Kiyamova. Study of phosphate transporter NaPi2b expression in different hystotypes of epithelial ovarian cancer // Experimental oncology. – 2009. – Vol. 31, № 1. – P. 37-43. V. S. Gryshkova, D. S. Lituyev, V.V. Filonenko, R. G. Kiyamova.Creation of cellular models for the analysis of sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b, a potential marker for ovarian cancer // Biopolymers and Cell. – 2009. – Vol. 25, № 2. – P. 95-101. L.A.Tomachynski, V.Ya. Chernii, O.M. Gorbenko, V.V.Filonenko, S.V.Volkov. Cytostatic activity of mixed ligand zirconium and hafnium phthalocyanines with organic acids // Conference for Students, PhD-students and young scientists on Molecular Biology and Genetics. – Kyiv (Ukraine), 2003. – P. 267 Gorbenko O.M., Kuznetsov V.V. Kukharenko O.P. Identification of new partners of tumor suppressor PTEN using LexA-based yeast two-hybrid system // Conference for Students, PhD-students and young scientists on Molecular Biology and Genetics. – Kyiv (Ukraine), 2003. – P. 173.L. Kapustian, D.Lytvyn, T.Dudchenko, R.Kyyamova, V. Gryshkova, V.Filonenko, P.Pogrebnoi, L.Sidorik. ThestudyofHSP60 expressioninGuerin`sCarcinomaratmodel // Conferenceforyoungscientistsandstudentsinmolecularbiologyandgenetics. – Kyiv (Ukraine), 2004.– P.157.Gorbenko O. Report on a specific project “The use of a yeast two-hybrid screen for the search of PTEN binding partners and characterization of their biological significance”. // EACR Newsletter. – 2004. – P.23.K. Gardiner, A. Fortna, O. Nikolaienko, L. Crnic, C. Nguyen, K. Cios A Chromosome 21/Down Syndrome Gene Expression/Gene Function Database // Expert Workshop on the Biology of Chromosome 21 Genes: Towards the Gene- Phenotype Correlations in Down Syndrome. — Washington (USA), 2004. — P. 47.O. Nikolaienko, C. Nguyen, L. Crnic, K. Cios, K. Gardiner A database for pathway analysis in Down syndrome // 14th International Workshop “Beyond the Identification of Transcribed Sequences: Functional, Expression and Evolutionary Analysis”.—Chiba (Japan), 2004.— P. 40.L. Kapustian, D.Lytvyn, T.Dudchenko, R.Kyyamova, V. GryshkovaV.Filonenko, P.Pogrebnoi, L.Sidorik. ThemolecularchaperonHSP60 expressionintumorcellsofGuerin`scarcinomaratmodel // FirstUkrainianCongressforCellBiology. – Lviv (Ukraine), 2004. – P. 135.WangM-L., PanasyukG., RebholzH., NemazanyyI., FentonT., ZhyvoloupA., FoxonR., FilonenkoV., BrooksS.J., GorbenkoO., WestA., WeberH.O., VousdenK.H., andGoutI.T.RegulationofthecellcycleviamTOR/S6Ksignallingpathway // FirstUkrainianCongressforCellBiology. – Lviv (Ukraine), 2004. - P. 11.Kyyamova R., Rodnin M., Garifilin O., Tykhonkova I, Gryshkova V, Gout I, Filonenko V. Identification of novel tumor-associated antigens with the use of SEREX-methodology // First Ukrainian Congress for Cell Biology. – Lviv (Ukraine), 2004. –P. 139.Gryshkova V., Gout I.,Filonenko V., Kyyamova R. Expression, purification and investigation of the immunogenicity of the tumor-associated antigen SSX2 // 16-th European Students` Conference. – Berlin (Germany), 2005. - P. 48.А.В. Николаенко, Я.Я. Федышин, И.Я. Скрипкина, Л.А. Цыба, Л.Б. Дробот, А.В. Рындич Адапторный белок интерсектин 1 взаимодействует с убиквитинлигазами семейства Cbl и Cbl-связывающим белком Ruk/CIN85 // Международная школа-конференция молодых ученых ``Системная биология и биоинженерия''. — Москва (Росія), 2005. — С. 151.Гришкова В.С., Філоненко В.В., Кіямова Р.Г. Дослідження імуногенних властивостей пухлинного антигену SSX-2, отриманого в бакуловірусній експресійній системі // Міжнародна наукова конференція студентів і аспірантів. – Львів (Україна), 2006. – С. 334.V. S. Gryshkova, I. T. Gout, V.V. Filonenko, R. G. Kyyamova. Revealing of the potential tumor marker SLC34A2 by screening of drug resistant ovarian carcinoma cell line OVCAR-3 // Drug Resistance Conference: Oncology (special issue, ISSN 0204-3564).– Kyiv (Ukraine), 2006. - P.73. Gorbenko O. M., Kukharenko O. P., Volkova D. D., Gout I. T. Identification of a novel PTEN-binding partner // Current problems of experimental and clinical oncology. – Kyiv (Ukraine), 2006. – P. 90.О.В. Дергай, О.В. Ніколаєнко, І.Я. Скрипкіна, М.В. Дергай, Л.О. Циба, А.В. Риндич Убіквітин-лігаза CBL-B — новий партнер інтерсектину 1. Вплив альтернативного сплайсингу пре-мРНК гена інтерсектину 1 на взаємодію його білкових ізоформ з CBL-B // ІІ міжнародна наукова конференція студентів та аспірантів ``Молодь і поступ біології''. — Львів (Україна), 2006. — С. 339.А.В. Дергай, И.Я. Скрипкина, А.В. Николаенко, Т.А. Грязнова, Н.В. Дергай, Л.А. Цыба, А.В. Рындич Убиквитинлигаза Cbl-b — новый партнер интерсектина 1. Влияние альтернативного сплайсинга пре-мРНК гена интерсектина 1 на взаимодействие его белковых изоформ с Cbl-b // Х Пущинская школа-конференция. — Пущино (Росія), 2006. — С. 14.Rynditch A., Skrypkina I., Nikolaienko O., Gryaznova T., Dergai O., Dergai M., Kropyvko S., Tsyba L. Effect of alternative splicing on regulation of intersectin 1 functions // Human genome meeting. — Helsinki (Finland), 2006. — Poster 185.V.S. Gryshkova, S. S. Malyuchik, D.S. Lituev, V.V. Filonenko, R. G. Kyyamova Identification of MX35/Napillb antigen as a potential marker of ovarian cancer // International Scientific Conference for students and PhD-students. – L`viv (Ukraine), 2007. - P.407. Літуєв Д.С., Кіямова Р.Г., Гришкова В.С., Філоненко В.В. Аналіз мутацій у гені натрій-фосфатного транспортера в нормі та при патологіях // Міжнародна конференція студентів та аспірантів. – Львів (Україна), 2007. – С. 396. V.S. Gryshkova, S. S. Malyuchik, V. V. Filonenko, R. G. Kyyamova. Epitope definition for monoclonal antibody against sodium-phosphate cotransporter NaPi2b // 2nd Ukrainian Congress for cell Biology. – Kyiv (Ukraine), 2007. - P. 117. Gorbenko O., Panayutou G., Volkova D., Filonenko V., Gout I. Tumor suppressor PTEN physically interacts with fatty acid binding protein FABP4 and may be involved in adipogenesis regulation // Conference for young scientists, PhD-students, and students, on Molecular Biology and Genetics. – Kyiv (Ukraine), 2007. – P. 103.V. S. Gryshkova, G.V.Ovcharenko, S.S. Maluchik, D.S. Lituev, V.V. Filonenko, R.G. Kiyamova. Generation and characterization of monoclonal antibodies against phosphate cotransporter NaPiIІb // Conference for Students, PhD-students and young scientists: Biopolimers and Cells. – Kyiv (Ukraine), 2007. – Vol. 23, № 4. - P. – 272. O. Nikolaienko, D. Morderer, L. Tsyba, I. Skrypkina, Y. Fedyshyn, L. Drobot, A. Rynditch Interaction between adapter proteins Ruk/CIN85 and ITSN1: new link connects RTK signalling and endocytosis // 6th Parnas Conference ``Molecular Mechanism of Cellular Signalling''. — Krakow (Poland), 2007. — P. 24.Rynditch A., Tsyba L., Skrypkina I., Nikolaienko O., Dergai M., Dergai O., Gryaznova T., Kropyvko S., Gubar O. Regulation of functional activities of adapter proteins: Intersectins family // Functional genomics & systems biology. — Cambridge (UK), 2007. — P. 51.O. Nikolaienko, D. Morderer, L. Tsyba, I. Skrypkina, L. Drobot, A. Rynditch Adaptor protein Intersectin 1: searching for new protein partners // RECOOP HST Consortium, Bridges in Life Sciences Annual Scientific Review. — Pecs (Hungary), 2007. — P. 76.Gryshkova V. Report on a specific project “Investigation of novel potential ovarian cancer antigen sodium-phosphate cotransporter Napillb” // EACR Newsletter. – 2008. – P. 24.V.S. Gryshkova, D. S. Lituev, V. V. Filonenko, R. G. Kiyamova. The model for the investigation of novel ovarian cancer marker – sodium-depenent cotransporter NaPi2b // // Conference for young scientists: Biopolymers and Cell. – Kyiv (Ukraine), 2008. - Vol. 25, № 5. – P. 355. V. S. Gryshkova, D.S. Lituyev, V. V. Filonenko, R. G. Kyyamova. Establishing of cellular model for the analysis of the sodium-dependent phosphate transporter NaPi2b, a potential marker for ovarian cancer // Bridges in Life Sciences, Annual Scientific Review. Zagreb (Croatia), 2008. – P. – 83. Nikolaienko O.V., Dergay M.V., Dergay O.V., Morderer D.Y., Tsyba L.O., Skrypkina I.Y., Rynditch A.V. De novo prediction of alternative splicing events within SH3 domains of proteins from different origins // The sixth international conference on bioinformatics of genome regulation and structure. — Novosibirsk (Russia), 2008. — P. 173.с.н.с. відділу сигнальних систем клітини ІМБіГ, к.б.н. Горбенко О.М.н.с. відділу сигнальних систем клітини ІМБіГ, к.б.н. Гришкова В.С.н.с. відділу функціональної геноміки ІМБіГ, к.б.н. Ніколаєнко О.В.